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薤白多糖的分离纯化及组成分析

食品工业科技 2010年第1期31卷 244-247页

作者：夏新奎杨海霞李纯周魏信阳农业高等专科学校生物技术系河南信阳464000

采用DEAE-纤维素离子交换柱层析和SephadexG-150凝胶柱层析,对薤白粗多糖(PAM)进行了分离纯化;利用醋酸纤维素薄膜电泳和凝胶过滤法鉴定精制薤白多糖纯度;硅胶薄层层析分析精制多糖的单糖组成。结果表明:DEAE-纤维素柱分别用水、0.1mol.... 详细信息

采用DEAE-纤维素离子交换柱层析和SephadexG-150凝胶柱层析,对薤白粗多糖(PAM)进行了分离纯化;利用醋酸纤维素薄膜电泳和凝胶过滤法鉴定精制薤白多糖纯度;硅胶薄层层析分析精制多糖的单糖组成。结果表明:DEAE-纤维素柱分别用水、0.1mol.L-1NaCl、0.5mol.L-1Na0H洗脱分得三种级分,即水洗级分(PAM-I)、盐洗级分(PAM-II)和碱洗级分(PAM-III);这三种级分再经过SephadexG-150柱进一步分离纯化,得三个主要级分PAM-Ib、PAM-IIa及PAM-III’;经醋酸纤维素薄膜电泳和凝胶过滤法鉴定,它们为均一的多糖;硅胶薄层层析分析显示,PAM-Ib主要由半乳糖和葡萄糖组成,PAM-IIa主要由半乳糖、葡萄糖、果糖、木糖和鼠李糖组成,PAM-III’主要由半乳糖、葡萄糖和木糖组成。

关键词：薤白多糖分离纯化组成分析

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薤白多糖的酶法修饰及其抗氧化活性

食品工业 2015年第1期36卷 185-188页

作者：夏新奎豆成林信阳农林学院食品科学系信阳464000

为探讨薤白多糖酶法修饰的最佳条件,以及酶法修饰提高薤白多糖活性的可能性,采用α-淀粉酶对醇沉法得到的薤白多糖和柱层析纯化的3种分级薤白多糖进行酶法修饰,以O2-·清除率为响应值,应用响应面分析法对α-淀粉酶修饰薤白多糖的工艺进... 详细信息

为探讨薤白多糖酶法修饰的最佳条件,以及酶法修饰提高薤白多糖活性的可能性,采用α-淀粉酶对醇沉法得到的薤白多糖和柱层析纯化的3种分级薤白多糖进行酶法修饰,以O2-·清除率为响应值,应用响应面分析法对α-淀粉酶修饰薤白多糖的工艺进行优化,用邻苯三酚自氧化法测定修饰产物的抗氧化活性。结果表明,对修饰多糖抗氧化活性的影响因素从大到小依次为:加酶量、酶解温度、酶解p H;α-淀粉酶修饰薤白多糖的最优工艺条件为:加酶量263U/g,酶解温度45℃、酶解p H 5.8,在此条件下O2-·清除率预测值为80.13%,验证值为80.16%,结果重现性好,可用于实际预测。抗氧化试验表明,酶法修饰能提高薤白多糖的抗氧化活性。

关键词：薤白多糖酶法修饰响应面法优化抗氧化活性

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薤白多糖抑瘤及神经营养活性研究

食品研究与开发 2015年第5期36卷 107-110,115页

作者：张占军王富花曾晓雄扬州市职业大学生物与化工工程学院江苏扬州225009 南京农业大学食品科技学院江苏南京210095 扬州工业职业技术学院江苏扬州225127

采用MTT法对薤白多糖纯化组分(AMP40-1、AMP40-2)在体外抑制人肺癌细胞A549和人胃癌细胞BGC-823的增殖作用进行了研究。结果显示,AMP40-2对人肺癌细胞A549的生长具有一定的抑制作用。对人胃癌细胞BGC-823的增殖实验结果表明,薤白多糖AMP... 详细信息

采用MTT法对薤白多糖纯化组分(AMP40-1、AMP40-2)在体外抑制人肺癌细胞A549和人胃癌细胞BGC-823的增殖作用进行了研究。结果显示,AMP40-2对人肺癌细胞A549的生长具有一定的抑制作用。对人胃癌细胞BGC-823的增殖实验结果表明,薤白多糖AMP40-1、AMP40-2均能不同程度的抑制BGC-823细胞的增殖,且抑制作用与多糖之间存在不同程度的正相关量效关系和时效关系。通过大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12培养体系,对薤白多糖纯化组分(AMP40-1、AMP40-2)进行了神经营养活性研究。结果表明,薤白多糖AMP40-2对大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞具有一定的促分化作用。

关键词：薤白多糖癌细胞增殖神经营养活性

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薤白多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

薤白多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

作者：夏新奎西北农林科技大学

学位级别：硕士

薤白是一味传统的中药,为百合科植物小根蒜Allium macrosttemon Bge.或薤Allium chinensis G. Don的干燥鳞茎。性味辛、苦、温,有温中通阳,理气宽胸,通阳散结之功效。其原植物除入药外还可食用,是卫生部2002年公布的88种药食两用中药材... 详细信息

薤白是一味传统的中药,为百合科植物小根蒜Allium macrosttemon Bge.或薤Allium chinensis G. Don的干燥鳞茎。性味辛、苦、温,有温中通阳,理气宽胸,通阳散结之功效。其原植物除入药外还可食用,是卫生部2002年公布的88种药食两用中药材之一。现代研究证明,薤白具有抗氧化、防治动脉粥样硬化等作用。薤白在我国分布广泛,资源丰富,是一种具有很大开发潜力的植物。薤白中已分离得到挥发油、皂苷、含氮化合物、前列腺素等化学成分,但薤白多糖的研究还鲜见报道。本文以薤白多糖为研究对象,目的在于探索其未被发现的多糖及其所具有的生物活性,为进一步开发利用奠定基础。本文主要研究了薤白多糖的提取工艺、分离纯化及对所得组分进行了纯度鉴定、分子量测定,组成分析,并用HO/Fe体系法和邻苯三酚自氧化法研究了薤白多糖半纯品及精制多糖体外清除超氧阴离子自由基(O2ˉ·)和羟基自由基(·OH)的抗氧化活性。通过单因素试验和L9(3)4正交试验,研究了提取温度(A),料液比(B),提取时间(C)对多糖提取率的影响。结果表明:三因素对多糖提取率影响的主次顺序为A>C>B,提取温度为主要因素。最佳提取工艺为A3B2C3,即提取温度90℃、料液比为1:12、提取时间90 min。薤白多糖的提取率为13.93%。同时研究了提取过程中脱蛋白的处理方法,结果显示:木瓜蛋白酶+Sevag法脱蛋白处理效果最佳。脱蛋白后的多糖经透析得多糖半纯品(PAM)。采用DEAE一纤维素离子交换层析柱和Sephadex G-150凝胶层析柱,先后对薤白多糖半纯品(PAM)进行了进一步分离纯化。DEAE一纤维素柱分别用水、0.1M NaCl, 0.5M Na0H洗脱分得三种级分,即水洗级分(PAM-I)、盐洗级分(PAM-II)和碱洗级分(PAM-III)。这三种级分再经过Sephadex G-150柱进一步分离纯化,得三个主要级分PAM-Ib、PAM-IIa及PAM-III’,经醋酸纤维素薄膜电泳和凝胶过滤法鉴定,它们为均一的多糖。本实验选定PAM-Ib, PAM-IIa及PAM-III’为深入研究对象。采用凝胶过滤法测定各组分的平均分子量分别为12.18kD, 51.58kD, 291.61kD。其中PAM-III’的分子量最大,PAM-Ib分子量最小。各精制多糖通过12 mol·L-1盐酸水解,再用硅胶薄层层析分析各多糖的组成。结果表明:PAM-Ib主要由半乳糖和葡萄糖组成,PAM-IIa主要由半乳糖、葡萄糖、果糖、木糖和鼠李糖组成,PAM-III’主要由半乳糖、葡萄糖和木糖组成。抗氧化活性实验主要是研究薤白多糖半纯品(PAM)及三种精制多糖(PAM-Ib,PAM-IIa和PAM-III’)对O·和·OH的清除作用。利用HO/Fe体系产生·OH,邻苯三酚自氧化体系产生O·,分别比较了PAM,PAM-Ib,PAM- IIa及PAM-III’对·OH和O·的清除率。结果表明,PAM具有抗·OH和O·的双重功效,且呈剂量依赖关系。PAM-Ib清除·OH和O·活性较弱,但其活性大小也与多糖的用量成正比,PAM-IIa对·OH和O·均无清除作用。PAM-III’具有较高的清除·OH作用,但对O·不起作用。

关键词：薤白多糖分离纯化组成分析抗氧化活性

薤白多糖的化学修饰、结构分析及生物活性研究

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薤白多糖的化学修饰、结构分析及生物活性研究

作者：郑如刚海南大学

学位级别：硕士

薤白(Allium macrostemon Bge.)别名紫根蒜、小根蒜,是百合科草本植物。中医常用作胸闷、肺喘等疾病的治疗,其味微苦、辛,性温。薤白耐瘠耐旱,在我国分布广泛,而且药食两用,具有较大的开发价值。薤白有调血脂、抗肿瘤等活性,已经从薤白... 详细信息

薤白(Allium macrostemon Bge.)别名紫根蒜、小根蒜,是百合科草本植物。中医常用作胸闷、肺喘等疾病的治疗,其味微苦、辛,性温。薤白耐瘠耐旱,在我国分布广泛,而且药食两用,具有较大的开发价值。薤白有调血脂、抗肿瘤等活性,已经从薤白中分离得到前列腺素、含氮含硫化合物以及挥发油成分等,但少见有关其多糖的报道。本文主要对薤白多糖的水提醇沉法工艺、分离纯化、多糖纯度及分子量测定、多糖结构分析、硫酸酯化修饰、生物活性等方面进行研究。结果如下： (1)采用水提醇沉法提取薤白多糖,其最佳工艺为：按1：14的料液比投料,90℃,提取80min,得薤白粗多糖(cAMP),提取率可达14.26%。并采用蛋白酶与Sevag法相结合去除cAMP中的蛋白质,采用3%的H202溶液,60℃,恒温反应2h进行脱色,结果显示蛋白质去除及脱色效果较好,经透析后得半纯薤白多糖(AMP)。 (2)分别用柱层析法和分级醇沉法对AMP进行分离纯化,并用高效凝胶渗透色谱仪(GPC)测定纯度和分子量。其中采用DEAE-32纤维素加Sephadex G-100柱层析法分离得到三种不同分子量的均一多糖AMP-I’(1.50×104Da)、AMP-Ⅱ’(8.95×105Da). AMP-Ⅲ’(1.51×106Da),最终得率分别为7.58%,1.75%,3.42%;采用分级醇沉法分离得到两种均一多糖AMP-Ⅰ(1.57×104Da)和AMP-Ⅲ(1.55×106Da),得率分别为17.31%,7.82%。比较两种方法,确定了采用分级醇沉法纯化薤白多糖,并选用AMP-Ⅰ及AMP进行化学修饰,再结合AMP-Ⅲ进行生物活性研究。通过薄层色谱法及高效液相色谱法分析,结果表明AMP-Ⅰ由葡萄糖、半乳糖组成;AMP-Ⅲ由葡萄糖、果糖及半乳糖组成。AMP-Ⅰ的主链由葡萄糖和半乳糖构成,主链核心由葡萄糖构成,葡萄糖和半乳糖构成支链或主链的末端残基。AMP-Ⅲ的主链由葡萄糖、半乳糖及果糖构成,葡萄糖及半乳糖构成其主链核心,支链或主链的残基末端由葡萄糖及果糖构成。 (3)采用氯磺酸-吡啶法、三氧化硫-吡啶法及浓硫酸法对AMP和AMP-Ⅰ进行硫酸酯化修饰,得到酯化产物。经过理化性质、紫外及红外光谱分析,显示各酯化多糖均存在硫酸根基团,表明多糖与酯化试剂结合生成了酯。采用BaSO4浊度法进行取代度(DS)测定,结果显示纯化薤白多糖的DS高于对应的半纯薤白多糖的DS。三种修饰方法取代度大小依次为：氯磺酸-吡啶法,三氧化硫-吡啶法,浓硫酸法。通过单因素实验和L9(34)正交试验,研究了酯化试剂比例、反应温度和反应时间对氯磺酸-吡啶法修饰薤白多糖的影响,以DS和得率为指标,得出了其最佳酯化条件为V氯磺酸：V叱咤为1：5,温度为80℃,时间为90min。结果显示,在最佳条件下AMP的DS为].624,得率为81.24%;AMP-Ⅰ的DS为1.735,得率为83.13%。 (4)采用邻二氮菲-Fe2+-H202体系研究薤白多糖的羟自由基清除能力。表明薤白多糖及硫酸酯化后的薤白多糖均有清除作用,且清除作用基本都随着浓度的增大而增强。其中以AMP-Ⅲ的清除作用最强,在8mg/mL时达51.32%。未修饰多糖的清除率大小为：AMP-Ⅲ> AMP> AMP-Ⅰ。修饰后的多糖在羟自由基的清除作用上有所减低。 (5)采用荧光探针法对多糖与DNA的相互作用进行研究,结果表明,薤白多糖与DNA均有相互作用,不同的薤白多糖具有不同的作用常数,并且在一定范围内存在一个最大值。AMP-Ⅰ和AMP-Ⅲ的最大作用常数与AMP的接近,但是对应的浓度降低较多。粗多糖的最大作用常数很小(仅11.07%,约为AMP的一半)而其相应浓度较高(0.3mg/mL),提示与DNA相互作用的主要活性成分是多糖,而不是蛋白质。经过硫酸酯化修饰后的多糖与DNA的作用均有较大的增强,其中修饰后AMP-Ⅰ的作用常数最大,为38.25%,对应浓度为0.01mg/mL,比原糖增强了两倍多。三种修饰方法所得多糖与DNA作用的次序为：氯磺酸-吡啶法>三氧化硫-吡啶法>浓硫酸法,其中,使用氯磺酸-吡啶法修饰多糖与DNA的作用明显强于其他两种方法。此外,用同一种修饰方法所得均一多糖酯化产物与DNA的作用强度略高于相应的半纯多糖。

关键词：薤白多糖提取分离化学修饰羟自由基脱氧核糖核酸

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薤白多糖提取、分离提纯及与DNA作用研究

薤白多糖提取、分离提纯及与DNA作用研究

作者：徐淼海南大学

学位级别：硕士

薤白系百合科葱属植物小根蒜Allium macrostemon Bunge或薤A. chinese G. Don的干燥鳞茎。薤白味辛、苦,性温,具有理气、宽胸、通阳、散结的功效,中医长期用于治疗胸闷刺痛、肺气喘等疾病。薤白耐旱、耐瘠、耐低温、适应性很强,是一种... 详细信息

薤白系百合科葱属植物小根蒜Allium macrostemon Bunge或薤A. chinese G. Don的干燥鳞茎。薤白味辛、苦,性温,具有理气、宽胸、通阳、散结的功效,中医长期用于治疗胸闷刺痛、肺气喘等疾病。薤白耐旱、耐瘠、耐低温、适应性很强,是一种药食两用的粗放型经济作物,而且在我国资源丰富,其具有重要的开发前途。现代研究表明,薤白具有抗肿瘤、抗衰老等作用,已分离得到挥发油、皂苷、前列腺素、含氮化合物等化学成分,但其多糖研究鲜见报道。本文主要研究了薤白多糖的酶法提取工艺、分离提纯、及对分离所得组分进行纯度鉴定、分子量测定、理化性质分析,并用荧光探针法研究了薤白多糖与DNA的作用。研究结果如下：’ 纤维素酶法提取薤白多糖的工艺研究中,通过单因素实验和L9(34)正交实验,研究了酶解温度(A)、酶解时间(B)、酶解pH值(C)、酶添加量(D)对薤白多糖提取率的影响。结果表明：四个因素对多糖提取率影响的主次顺序为D>C>A>B,酶添加量和酶解pH值为主要因素。最佳提取工艺A2B3C2D3,即酶解温度50℃,酶解时间2.5h,酶解pH值5.0,酶添加量0.4%。薤白多糖的提取率为17.27%。水提法时薤白多糖的提取率为12.78%,纤维素酶酶解辅助提取法优于水提法。薤白粗多糖经蛋白酶加Sevag法除蛋白,H202法脱色,透析袋透析纯化后得多糖半纯品(AMP). H2O2法脱色工艺条件为H2O2浓度10%,温度60℃,恒温反应4h。薤白多糖半纯品先后采用超滤、DEAE-32纤维素柱层析、Sephadex G-100凝胶柱层析进一步分离纯化。先经超滤得两个组分,即AMP-ⅠAMP-Ⅱ c AMP-Ⅰ AMP-Ⅱ再分别经过DEAE-32纤维素柱层析得到AMP-Ⅰa、AMP-Ⅰb两种级分和AMP-Ⅱa、 AMP-Ⅱb、AMP-Ⅱe三种级分。其中AMP-Ⅰa、AMP-Ⅱb、AMP-Ⅱc进一步用SephadexG-100凝胶柱层析纯化,经高效液相色谱法鉴定AMP-Ⅰa、AMP-Ⅱb为均一的多糖。本实验选定该两种均一多糖为深入研究对象。高效液相色谱法鉴定AMP-Ⅰa、AMP-Ⅱb的平均分子量分别为1.86×105Da、6.43×104Da。 AMP-Ⅰ a为白色粉末,AMP-Ⅱb为淡黄色粉末,两者均溶于水。以溴化乙锭(EB)为荧光探针,研究了薤白多糖与DNA的作用。不同类型薤白多糖在同等浓度(0.1mg/ml)下,与DNA相互作用常数从大到小依次为：AMP-Ⅱb24.49%>AMP-Ⅰa20.90%>粗多糖10.38%>粗多糖(未除蛋白)5.31%,表明薤白多糖纯度越高,与DNA相互作用越强,证明薤白多糖是一种与DNA有相互作用的活性成分。薤白多糖的浓度与DNA作用的强弱有直接关系,在一定范围内,AMP-Ⅱb与DNA作用的较佳浓度为0.2975mg/ml。

关键词：薤白多糖提取分离提纯脱氧核糖核酸荧光探针

一种具有抑制细胞增殖的薤白多糖的分离及性质

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食品研究与开发 2012年第12期33卷 178-183页

作者：张占军王富花曾晓雄扬州环境资源职业技术学院江苏扬州225127 南京农业大学食品科技学院江苏南京210095 扬州工业职业技术学院江苏扬州225127

对薤白多糖80%醇沉组分进行分离纯化、理化性质及肿瘤细胞抑制作用研究,经DEAE-52纤维素柱层析及葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱层析纯化得到薤白多糖AMP80-1,分别采用苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法、硫酸-间羟联苯法、氯化钡-明胶法对AMP80及... 详细信息

对薤白多糖80%醇沉组分进行分离纯化、理化性质及肿瘤细胞抑制作用研究,经DEAE-52纤维素柱层析及葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱层析纯化得到薤白多糖AMP80-1,分别采用苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法、硫酸-间羟联苯法、氯化钡-明胶法对AMP80及AMP80-1中总糖、蛋白质、糖醛酸、硫酸基含量进行分析。结果表明,多糖组分不含蛋白质,硫酸基含量均较低。采用高效液相凝胶渗透色谱法测得AMP80-1相对分子质量为8.1 ku。红外光谱分析表明AMP80-1主要为吡喃糖苷连接,紫外光谱分析表明AMP80-1不含核酸和蛋白质。细胞实验结果显示,薤白多糖AMP80-1对人胃癌细胞BGC-823生长存在一定的抑制作用,且在一定范围内存在不同程度的量效关系和时效关系。

关键词：薤白多糖分离纯化理化性质

响应面法优化薤白多糖的羧甲基化修饰工艺及抗氧化活性研究

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信阳师范学院学报（自然科学版） 2015年第2期28卷 244-247页

作者：夏新奎豆成林信阳农林学院食品科学系河南信阳464000

采用氯乙酸法对醇沉法得到的薤白多糖(PAM)和柱层析纯化的3种分级薤白多糖进行羧甲基化修饰,以氯乙酸浓度、反应时间和反应温度为自变量,修饰产物的羧甲基取代度(DS)为响应值,应用响应面设计法确定羧甲基化修饰的最佳条件,用H2O2/Fe2+... 详细信息

采用氯乙酸法对醇沉法得到的薤白多糖(PAM)和柱层析纯化的3种分级薤白多糖进行羧甲基化修饰,以氯乙酸浓度、反应时间和反应温度为自变量,修饰产物的羧甲基取代度(DS)为响应值,应用响应面设计法确定羧甲基化修饰的最佳条件,用H2O2/Fe2+体系法和邻苯三酚自氧化法测定修饰产物的抗氧化活性.结果表明:薤白多糖氯乙酸法修饰的最佳条件为氯乙酸浓度1.3 mol/L、反应温度63℃、反应时间3.2 h.此条件下羧甲基取代度为0.882.羧甲基化修饰能提高薤白多糖的体外抗氧化活性.

关键词：薤白多糖羧甲基化修饰响应面法优化抗氧化活性

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薤白多糖提取、分离提纯及与DNA作用研究

生物化工 2019年第2期5卷 82-84页

作者：甘杨子钟克焱黄林海南医学院海南海口571199

目的:分析薤白多糖提取、分离提纯及与DNA作用。方法:根据薤白多糖酶法提取工艺、对薤白多糖薤进行分离提纯和鉴定。研究期间利用常规方法分离小鼠股骨BMSCs,将BMSC分为空白组、对照组、实验组(剂量100μL、剂量为12.5、25、50、100μg/... 详细信息

目的:分析薤白多糖提取、分离提纯及与DNA作用。方法:根据薤白多糖酶法提取工艺、对薤白多糖薤进行分离提纯和鉴定。研究期间利用常规方法分离小鼠股骨BMSCs,将BMSC分为空白组、对照组、实验组(剂量100μL、剂量为12.5、25、50、100μg/ml)薤白多糖,分别采用不同方法处理。结果:AMP40-1、AMP40-2、AMP60-1、AMP80-1均未见吸收峰,提示为单纯的多糖组份。空白组、对照组、不同浓度的薤白多糖溶液处理的实验组的畸变率、焦点簇数目差异都具有统计学意义(P薤白多糖提取、分离提纯质量尚可;薤白多糖可减轻放射引起的细胞DNA损伤,发挥保护作用且呈剂量依赖。

关键词：薤白多糖提取药理学