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基于微流控芯片的肿瘤细胞体外药敏试验研究进展

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分析试验室 2023年第2期42卷 266-274页

作者：赵明威郭世伟戴博李振庆郑璐璐张大伟陶春先上海理工大学光电信息与计算机工程学院光学仪器与系统教育部工程研究中心上海200093 海军军医大学附属长海医院胰腺肝胆外科上海200433 上海理工大学上海市环境与生物安全仪器设备工程研究中心上海200093

在抗癌药物研发及疾病治疗过程中,药物溶液实现梯度浓度及混合配置,对确定最佳浓度和联合治疗方案至关重要。微流控技术通过设定微通道网络实现复杂的溶液处理,可进行药理学分析。微流控技术是构建体外微环境、开展细胞培养和药敏研究... 详细信息

在抗癌药物研发及疾病治疗过程中,药物溶液实现梯度浓度及混合配置,对确定最佳浓度和联合治疗方案至关重要。微流控技术通过设定微通道网络实现复杂的溶液处理,可进行药理学分析。微流控技术是构建体外微环境、开展细胞培养和药敏研究的重要手段。本文针对肿瘤细胞体外药敏试验研究,在微流控技术原理、制造材料、结构设计和制造特点等方面,对近10年来微流控芯片功能结构、在细胞体外培养和药物筛选应用中的研究进展做了概括和综述,对未来用于癌症个性化治疗的微流控芯片结构和功能进行了展望。

关键词：癌细胞体外培养药敏试验微流控芯片通道网络

淋病奈瑟菌药敏试验刃天青微量稀释法的建立与评价

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四川大学学报（医学版） 2024年第1期55卷 198-203页

作者：李梦欢杨桂琴王有为雍刚王红仁别明江王国庆四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院成都610041 四川省医学科学院·四川省人民医院临床医学检验中心成都610072 四川大学华西基础医学与法医学院病原生物学系成都610041 《四川大学学报(医学版)》编辑部成都610041

目的建立一种基于刃天青显色的淋病奈瑟菌药敏试验方法并对其进行评价。方法在肉汤微量稀释法的基础上,添加刃天青作为活细菌指示剂,采用参考株WHO G进行试验以优化加入刃天青后细菌的培养时间,肉眼观察颜色变化以读取结果。用琼脂稀释... 详细信息

目的建立一种基于刃天青显色的淋病奈瑟菌药敏试验方法并对其进行评价。方法在肉汤微量稀释法的基础上,添加刃天青作为活细菌指示剂,采用参考株WHO G进行试验以优化加入刃天青后细菌的培养时间,肉眼观察颜色变化以读取结果。用琼脂稀释法(金标准)和刃天青微量稀释法对3株淋球菌参考株和32株分离株分别进行阿奇霉素、头孢曲松和大观霉素最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的测定,从基本一致性(essential agreement,EA)(反映对MIC值的一致性)、分类一致性(category agreement,CA)(反映对耐药、中介和敏感判定的一致性)、极重大误差(very major error,VME)(反映假敏感性)和重大误差(major error,ME)(反映假耐药性)等指标进行分析,评价刃天青微量稀释法用于淋球菌药敏试验的准确性。CA率和EA率≥90%,VME率和ME率≤3%被认为是可接受的标准。结果加入刃天青后反应6 h读取的结果与琼脂稀释法一致,以此参数建立刃天青微量稀释法。刃天青微量稀释法测量阿奇霉素、头孢曲松和大观霉素MIC结果的EA率分别为97.1%、91.5%和94.3%,CA率分别为88.6%、94.3%和94.3%,VME率均为0%,ME率分别为11.4%、5.7%和5.7%。结论本研究建立的刃天青微量稀释法用于测量抗生素对淋病奈瑟菌MIC时,与琼脂稀释法具有良好的一致性,敏感结果可信度极高,仅通过肉眼观察即可方便读取结果。但应慎重对待耐药结果,需要继续进行参数的优化。

关键词：淋病奈瑟菌药敏试验刃天青微量稀释法

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多纹钱蝶鱼溃疡病病原的分离鉴定及药敏试验

大连海洋大学学报 2024年

作者：阙莉文杨林狄涂祖豪蔡双虎黄郁葱简纪常广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东海洋大学水产学院

为探究2023年钦州湾网箱养殖多纹钱蝶鱼(Selenotoca multifasciata)发生溃疡病的原因，从患病多纹钱蝶鱼的肝、脾和肾组织中分离纯化出优势菌株，并对其进行了形态学观察、生理生化特性鉴定、16SrRNA和dnaJ基因序列测序分析、毒力基因... 详细信息

为探究2023年钦州湾网箱养殖多纹钱蝶鱼(Selenotoca multifasciata)发生溃疡病的原因，从患病多纹钱蝶鱼的肝、脾和肾组织中分离纯化出优势菌株，并对其进行了形态学观察、生理生化特性鉴定、16SrRNA和dnaJ基因序列测序分析、毒力基因的检测、人工感染试验及药敏试验。结果表明：形态学观察显示，分离获得的优势菌在TCBS平板上形成黄色、圆形的光滑菌落，在TSA形成乳白色微凸圆润菌落；生理生化特征为β溶血的革兰氏阴性菌，可发酵葡萄糖、蔗糖、甘露糖、阿拉伯糖，V-P试验呈阳性；基于16SrRNA和dnaJ基因序列构建的系统发育树显示，3株优势菌均与鳗弧菌(Vibrioanguillarum)聚为一支，综合鉴定菌株QZ991、QZ992和QZ993均为鳗弧菌；毒力基因检测结果显示，3株优势菌均携带virA、vah1、virC、empA、angM、flaA和ompU等7种毒力基因；人工感染试验显示，QZ991、QZ992和QZ993对多纹钱蝶鱼的半致死浓度(LD50)分别为 5.10×105、4.33×105、2.45×106cfu/mL；药敏试验显示，3株优势菌均对多粘菌素B、庆大霉素、四环素类、喹诺酮类和多数头孢烯类等多种抗菌药物敏感；组织病理切片观察发现，患病多纹钱蝶鱼多脏器发生了不同程度的损伤，主要表现为充血、出血、坏死和炎性细胞浸润等。研究表明，本研究首次报道了鳗弧菌是北部湾地区多纹钱蝶鱼溃疡病的病原，对多纹钱蝶鱼具有较强的致病性，并具有一定的耐药性，可交替使用水产用多西环素和恩诺沙星进行治疗。本研究结果可为多纹钱蝶鱼弧菌病的防控提供科学参考。

关键词：多纹钱蝶鱼鳗弧菌分离鉴定毒力基因药敏试验

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药敏试验结果智能化判读方法研究

广东农业科学 2020年第2期47卷 141-148页

作者：郭玉彬林欣颖曾晓银孙坚李西明华南农业大学数学与信息学院广东广州510642 华南农业大学兽医学院广东广州510642

【目的】细菌耐药性监测是公共健康安全领域一项至关重要的工作。针对目前耐药性试验结果需要人工读取而结果判读主观性强且效率较低的问题,提出了利用卷积神经网络进行微孔图像识别的药敏试验结果判读方法。【方法】根据国家兽医微生... 详细信息

【目的】细菌耐药性监测是公共健康安全领域一项至关重要的工作。针对目前耐药性试验结果需要人工读取而结果判读主观性强且效率较低的问题,提出了利用卷积神经网络进行微孔图像识别的药敏试验结果判读方法。【方法】根据国家兽医微生物耐药性风险评估实验室提供的MIC试验图像构建数据集,利用Inception_V4和MobileNet_V1两个神经网络模型进行单个微孔药敏试验结果图像识别模型的训练,并基于模型判断的分类结果构建MIC值计算方法以及耐药性判断方法,实现药敏试验结果的自动识别。【结果】利用Inception_V4和MobileNet_V1两个神经网络模型进行单个微孔药敏试验结果图像识别的准确率分别达到99.99%、99.97%,MIC值及耐药性判定的准确率分别达到97.30%、94.40%和99.13%、98.40%。【结论】两种卷积神经网络均可替代人工判读,提高工作效率,并降低对实验人员的专业性要求。与Inception_V4相比,MobileNet_V1模型的判读精度略低,但效率较高,可达到实用化程度。

关键词：卷积神经网络耐药性药敏试验最低抑菌浓度(MIC)

半滑舌鳎源维罗纳假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

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大连海洋大学学报 2023年第6期38卷 987-993页

作者：蔺宝珠赵露王浩伊韩卓然孙敬锋天津农学院水产学院天津市水产生态及养殖重点实验室天津300384

为探究导致半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)疾病发生的病原,从患病半滑舌鳎肝脏中分离纯化出一株细菌,命名为CLPV-114,结合细菌形态学观察、生化鉴定和16S rRNA序列分析进行病原鉴定,对其进行药敏试验和生长曲线测定,人工感染试验后... 详细信息

为探究导致半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)疾病发生的病原,从患病半滑舌鳎肝脏中分离纯化出一株细菌,命名为CLPV-114,结合细菌形态学观察、生化鉴定和16S rRNA序列分析进行病原鉴定,对其进行药敏试验和生长曲线测定,人工感染试验后测定半数致死剂量(LD50),并进行组织病理学观察。结果表明:菌株CLPV-114为革兰氏阴性杆菌,在系统发育树上与GenBank登录号分别为AF064460、AY144583的维罗纳假单胞菌(Pseudomonas veronii)亲缘关系最近,自然聚为一支;综合生理生化特征和16S rRNA基因序列分析鉴定其为维罗纳假单胞菌;药敏试验显示,CLPV-114对阿莫西林、氨苄西林和头孢哌酮等18种抗菌药物高度敏感,对呋喃妥因、阿奇霉素和四环素等11种抗菌药物中度敏感,对头孢克肟、磺胺异恶唑和甲氧嘧啶等4种抗菌药物耐药;人工感染试验显示,CLPV-114对半滑舌鳎具有致病性,人工感染后的患病鱼与自然患病鱼症状相似,CLPV-114菌株对半滑舌鳎的LD_(50)为1.3×10^(7)CFU/mL;组织病理学观察显示,CLPV-114可引起明显的组织学损伤,表现为肝细胞组织坏死,鳃血管中心充血,脾脏出现含铁血黄素沉积、出血,肠绒毛脱落。研究表明,本次从患病半滑舌鳎肝脏中分离的菌株CLPV-114为维罗纳假单胞菌,对半滑舌鳎具有较强的致病性,可引起不同组织出现明显病理变化,本研究结果可为半滑舌鳎维罗纳假单胞菌病的防控提供科学参考。

关键词：半滑舌鳎维罗纳假单胞菌 16S rRNA 致病性药敏试验

鸡源鼠伤寒沙门菌的分离鉴定、药敏试验与毒力基因检测

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浙江农业学报 2024年第2期36卷 284-294页

作者：郭伟娜陶晶何梦婷王紫苇马佰贺赵磊安徽科技学院动物科学学院安徽凤阳233100 动物营养调控与健康安徽省重点实验室安徽凤阳233100

鼠伤寒沙门菌是一种重要的人兽共患病病原,不仅影响养禽业的健康发展,还对禽类产品安全构成严重威胁,本研究主要是对鸡源鼠伤寒沙门菌进行分离鉴定、药敏试验和毒力基因的测定。首先采集病死产蛋鸡的脾脏组织进行分离培养和染色镜检,以... 详细信息

鼠伤寒沙门菌是一种重要的人兽共患病病原,不仅影响养禽业的健康发展,还对禽类产品安全构成严重威胁,本研究主要是对鸡源鼠伤寒沙门菌进行分离鉴定、药敏试验和毒力基因的测定。首先采集病死产蛋鸡的脾脏组织进行分离培养和染色镜检,以及16S rRNA基因的PCR鉴定,然后用圆纸片扩散法测定分离株对26种药物的敏感性,用PCR方法检测分离株的28个毒力基因。结果显示,分离株在普通营养琼脂和血琼脂培养基上形成灰白色菌落,在麦康凯培养基上为无色菌落,在BS培养基上为黑色带金属光泽的菌落;染色镜检结果显示分离株为革兰阴性的红色短杆菌;16S rRNA基因测序结果显示,分离株与鼠伤寒沙门菌OLF-FSR1-WB-Sparrow-ST-87的相似性为99.86%,与10个鼠伤寒沙门菌参考菌株的同源性介于99.5%~100%;药敏试验结果表明,分离株对环丙沙星最为敏感,抑菌圈直径达30 mm;除sseC基因未检测出外,其余27个毒力基因的测序结果与参考菌株对应毒力基因的相似性介于98.58%~100%。本研究成功从病死产蛋鸡分离鉴定出一株鼠伤寒沙门菌菌株FY2021,为深入研究鼠伤寒沙门菌的致病机理和禽源沙门菌病的防控提供参考依据。

关键词：鼠伤寒沙门菌分离鉴定药敏试验毒力基因 PCR检测

1株鲤源致病性铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

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中国畜牧兽医 2023年第11期50卷 4703-4713页

作者：邹昊博薛淑群吕晓楠高聪婷邴辉古今朝韩英夏邦华中牧实业股份有限公司北京100070 东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 北京市水产技术推广站北京100176 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

【目的】分离鉴定导致鲤大量急性死亡的病原菌,确定其毒力基因和药物敏感性,为后续病鲤的临床治疗提供参考。【方法】从病鲤的内脏中分离培养病原菌,并对该菌株进行形态学观察、革兰染色、生理生化鉴定及16S rRNA分子鉴定;采用毒力基因... 详细信息

【目的】分离鉴定导致鲤大量急性死亡的病原菌,确定其毒力基因和药物敏感性,为后续病鲤的临床治疗提供参考。【方法】从病鲤的内脏中分离培养病原菌,并对该菌株进行形态学观察、革兰染色、生理生化鉴定及16S rRNA分子鉴定;采用毒力基因检测、K-B药敏纸片法及人工回归感染试验分析该病原菌的药物敏感性和致病性。【结果】分离菌在LB固体培养基上呈现圆形或椭圆形菌落,镜检为短棒状的革兰阴性菌,具有一定的运动能力。生理生化试验结果显示,分离菌株在D-葡萄糖、明胶、脲酶、氧化酶、精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸及柠檬酸试验中均呈阳性反应,其余指标皆呈阴性反应,符合铜绿假单胞菌的生理生化特征。16S rRNA基因序列系统进化树显示,分离菌与铜绿假单胞菌NR_114471.1呈现高度同源,相似性为99%。综合以上试验结果,将分离菌鉴定为铜绿假单胞菌,命名为HB2210。通过毒力基因检测发现,该菌株含有鞭毛蛋白结构基因fla基因、气溶素aer基因、细胞毒性肠毒素act基因、外膜蛋白ompA基因及热稳定性肠毒素ast基因等多种毒力基因。通过药敏试验发现,分离菌株对头孢他啶、头孢曲松、头孢哌酮、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、多黏菌素B、左氧氟沙星及哌拉西林9种抗菌药敏感。通过人工回归感染试验发现,分离菌对鲤具有急性毒性,高浓度组死亡率高达85%。【结论】本试验从病鲤组织中分离的铜绿假单胞菌HB2210具有极强的致病性,药敏试验筛选出的头孢他啶、头孢曲松、头孢哌酮、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、多黏菌素B、左氧氟沙星及哌拉西林9种抗菌药素可为鲤养殖企业精准用药提供理论基础。

关键词：鲤铜绿假单胞菌药敏试验毒力基因

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鸡滑液囊支原体的分离鉴定及药敏试验

动物医学进展 2024年第1期45卷 130-135页

作者：殷梦玉张腾飞张文婷胡巧卢琴郭云清罗青平湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北武汉430064 湖北洪山实验室湖北武汉430064

为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。... 详细信息

为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。结果显示,病原分离鉴定结果仅滑液囊支原体阳性,镜检观察到典型的“煎蛋样”菌落;16S rRNA序列与已报道的滑液囊支原体的具有高度同源性;鸡胚感染试验显示,分离株导致鸡胚发育迟缓,胚体弱小,从弱小胚体内可再次分离出滑液囊支原体;药敏试验结果显示滑液囊支原体分离株对泰妙菌素、四环素和盐酸克林霉素敏感。结果表明,从产蛋下降的鸡群中成功分离到1株滑液囊支原体,为临床该病的防治提供了科学依据。

关键词：鸡滑液囊支原体分离鉴定药敏试验

克氏原螯虾源普通变形杆菌分离、鉴定及联合药敏试验

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淡水渔业 2022年第5期52卷 53-59页

作者：马亮董靖张国栋张露珊刘绍春艾晓辉华中农业大学水产学院武汉430070 中国水产科学研究院长江水产研究所武汉430223 岳阳渔美康生物科技有限公司湖南岳阳414100

本研究对患病克氏原螯虾(Procambarus clarkia)进行病原菌分离、鉴定及联合药敏试验。从患病克氏原螯虾的肝胰腺中分离出一株优势菌(QJ201905007),经形态学观察、生理生化特性分析、16S rRNA基因测序和构建进化树对该菌株进行了鉴定,并... 详细信息

本研究对患病克氏原螯虾(Procambarus clarkia)进行病原菌分离、鉴定及联合药敏试验。从患病克氏原螯虾的肝胰腺中分离出一株优势菌(QJ201905007),经形态学观察、生理生化特性分析、16S rRNA基因测序和构建进化树对该菌株进行了鉴定,并测定该菌株对抗菌药物的药敏性及化学抗菌药物和天然化合物的协同抑菌作用。结果显示:该分离菌生理生化特征符合普通变形杆菌(Proteus vulgaris)的特征,分子鉴定结果和进化树分析与普通变形杆菌的亲缘关系较近,由此可判定该病原菌为普通变形杆菌。回归试验发现,分离的菌株对克氏原螯虾具有致病力,半致死剂量为5.04×106CFU/mL。药敏结果显示,该菌株对亚胺培南、头孢噻肟、恩诺沙星和头孢吡肟敏感,对氟苯尼考、青霉素和丁胺卡那等耐药;联合抑菌试验发现,氟苯尼考与白藜芦醇联用可在体外协同抑制该菌株的生长。以上研究表明,普通变形杆菌是克氏原螯虾的病原菌,在保证小龙虾食用安全的前提下,可使用恩诺沙星治疗,或通过氟苯尼考与白藜芦醇联用提高氟苯尼考的敏感性。

关键词：克氏原螯虾(Procambarus clarkia) 普通变形杆菌(Proteus vulgaris) 鉴定药敏试验