检索结果-南通市图书馆

作者：周琳河北农业大学

学位级别：硕士

本研究中通过比较四种土壤样品总DNA的提取方法,确定了以提取成本较低、提取效率较高(3.15 mg DNA/g土)、提取质量最适于偶联后续DGGE技术的土壤样品总DNA的提取方法作为本研究中土总DNA的提取方法:即土壤样品预处理,土壤样品总DNA的粗... 详细信息

本研究中通过比较四种土壤样品总DNA的提取方法,确定了以提取成本较低、提取效率较高(3.15 mg DNA/g土)、提取质量最适于偶联后续DGGE技术的土壤样品总DNA的提取方法作为本研究中土总DNA的提取方法:即土壤样品预处理,土壤样品总DNA的粗提取,土壤样品总DNA的纯化;然后以纯化后的土壤总DNA为模板进行细菌16S rDNAV3区扩增;接下来采用微生物分子生态学手段的变性梯度凝胶电泳技术(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)结合DGGE图谱直接观察法和DGGE图谱聚类分析的方法对荧光假单胞菌工程菌株BioP8和分别在基因组和质粒上带有红色荧光蛋白标记(rfp)的荧光假单胞菌8'P303和12P303在进入土壤中后的微生态行为进行了跟踪监测和分析。研究中未发现荧光假单胞菌工程菌株BioP8和分别在基因组和质粒上带有红色荧光蛋白标记(rfp)的荧光假单胞菌8'P303和12P303对土壤中细菌群落组成和结构产生明显的可检测得到的影响。从DGGE图谱上几乎观察不到空白对照土壤样品与喷施了相应菌液的土壤样品有差别;结合ImageJ,Mathworks Matlab V7.1以及PAST软件对DGGE图谱进行聚类分析:在喷施了荧光假单胞菌工程菌株BioP8的处理土壤的DGGE图谱上,第7天、第15天和第45天的空白对照土壤样品和经荧光假单胞菌工程菌BioP8处理的土壤样品分别聚在一起,细菌群落组成相似性大约在88%左右;而第0天与第1天的4份土壤样品聚在一起,第30天与第45天的4份土壤样品聚在一起,第60天与第90天的4份土壤样品聚在一起。由此可以看出,取样时间相对应的空白对照土壤样品与喷施了荧光假单胞菌工程菌BioP8的土壤样品细菌群落组成相似性在85%左右;而纵向时间上的差别也不是很大,其相似性程度也在70%以上;在8'P303的处理的DGGE图谱上,主要有三个cluster:第一个cluster主要包括第0天到第15天的空白对照土壤样品和喷施了基因组带有红色荧光蛋白标记的荧光假单胞菌8'P303的土壤样品,各个样品之间的细菌群落组成相似性均在80%左右;第二个cluster主要包括第30天和第45天的土壤样品,其细菌群落组成相似性在90%左右;第三个cluster主要包括第60天和第90天的土壤样品,其细菌群落组成相似性在80%左右,所有土壤样品细菌群落组成相似性也可达到60%以上;在12P303的处理的DGGE图谱上,第0天到第15天的包括空白对照土壤样品和喷施了带有红色荧光蛋白质粒标记的荧光假单胞菌12P303的土壤样品均聚在一起,细菌群落组成相似性约为80%;第30天和第45天的样品聚在一起,细菌群落组成相似性约为85%;第60天和第90天的样品聚在一起,细菌群落组成相似性也达到80%。由此可见,对于荧光假单胞菌工程菌以及带有红色荧光蛋白标记的荧光假单胞菌,从微生物分子生态学角度评价,二者均具有良好的生态安全性,可以进行大规模的环境释放和田间应用。本研究采用微生物分子生态学手段为荧光假单胞菌工程菌的产业化和生产应用提供直接的科学依据,具有重要的理论意义和实践价值。

关键词：生态安全性微生物分子生态学荧光假单胞菌工程菌变性梯度凝胶电泳聚类分析

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转Bt基因工程菌BioP8在环境中的消长动态及生物学效应

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应用与环境生物学报 2006年第4期12卷 476-479页

作者：曹伟平王金耀冯书亮王容燕杜立新张杰贾艳华河北省农林科学院植物保护研究所河北保定071000 中国农业科学院植物保护研究所北京100080

2001～2004年，在河北省保定市对转Bt基因荧光假单胞菌工程菌BioP8进行了环境释放，并跟踪调查该工程菌在田间的定殖、扩散、田间防效以及对田间节肢动物群落的影响．结果表明，BioP8在甘蓝叶、根及土壤中均能定殖、存活，在植物根部存... 详细信息

2001～2004年，在河北省保定市对转Bt基因荧光假单胞菌工程菌BioP8进行了环境释放，并跟踪调查该工程菌在田间的定殖、扩散、田间防效以及对田间节肢动物群落的影响．结果表明，BioP8在甘蓝叶、根及土壤中均能定殖、存活，在植物根部存活能力较强．在施药后d3，BioP8菌密度均达最高值，之后趋于衰减；BioP8对甘蓝田中天敌有较明显的保护作用，对田间节肢动物群落物种丰富度有一定的影响，BioP8防治区的节肢动物个体总量介于化防区和空白对照区的个体总量．

关键词：荧光假单胞菌工程菌 Bt 环境释放生态安全

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含苏云金芽孢杆菌aiiA基因的重组荧光假单胞菌的构建及对软腐病的抗病活性

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华北农学报 2006年第4期21卷 13-16页

作者：张霞胡玉琴贾振华张杰马宏宋水山河北省生物研究所中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100094

aiiA基因编码的AiiA蛋白能降解细菌群体感应系统中的信号分子N_酰基高丝氨酸内酯AHLs,从而减弱致病菌对植物的危害。本文将aiiA基因转入到植物根际促生细菌荧光假单胞菌P303中,构建成防治植物细菌和真菌病害的工程菌P303-ss10。通过PCR... 详细信息

aiiA基因编码的AiiA蛋白能降解细菌群体感应系统中的信号分子N_酰基高丝氨酸内酯AHLs,从而减弱致病菌对植物的危害。本文将aiiA基因转入到植物根际促生细菌荧光假单胞菌P303中,构建成防治植物细菌和真菌病害的工程菌P303-ss10。通过PCR和RT-PCR鉴定,均获得0.8 kb的目的片断,表明aiiA基因已经导入P303中。室内平板抑菌试验表明,该工程菌保留了出发菌株对多种植物病原真菌的抑制作用;室内离体试验表明该工程菌对马铃薯软腐病和大白菜软腐病都有一定的抑制作用。

关键词：荧光假单胞菌工程菌群体感应 aiiA基因胡萝卜软腐欧文氏杆菌细菌病害防治

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