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当归苯酞riligustilide抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应及机制研究

中华中医药学刊 2024年第7期42卷 140-146,I0026页

作者：刘员王欢欢吕洁丽张来宾新乡医学院药学院河南新乡453003

目的研究当归苯酞二聚体riligustilide(DG2)对脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用,并探讨其作用机制。方法通过LPS诱导建立RAW 264.7细胞炎症模型,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法考察DG2对RAW 264.7细胞存活率的影响,Griess法考察DG2对LPS诱导的RAW 264.7细胞释放炎症介质一氧化氮(nitric oxide, NO)的影响,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)考察DG2对LPS诱导的RAW 264.7细胞分泌炎症因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)]的影响,Western blotting法考察DG2对LPS诱导的RAW 264.7细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2),以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)、核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和信号传导及转录激活蛋白(signal transducer and activator of transcription, STAT)信号通路的影响,免疫荧光法考察DG2对LPS诱导的RAW 264.7细胞STAT3核转位的影响。结果DG2浓度在64μmol/L下对RAW 264.7细胞存活率无影响,DG2能显著降低LPS诱导的RAW 264.7细胞释放NO的水平(P<0.001)[IC_(50)=(26.13±5.75)μmol/L],与阳性对照槲皮素的作用相当[IC_(50)=(26.06±2.28)μmol/L];还能够显著抑制炎症因子IL-6和TNF-α的生成(P<0.01,P<0.001)。DG2能够显著抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS和COX-2蛋白的表达(P<0.01,P<0.001),显著抑制p-STAT3、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和p-p38的蛋白表达(P<0.05,P<0.01),同时抑制STAT3的核转位。结论DG2可抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应,其机制可能与下调STAT、NF-κB和MAPK信号通路有关。

关键词：当归苯酞二聚体抗炎 RAW 264.7细胞作用机制

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当归苯酞riligustilide抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应及机制研究

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中华中医药学刊 2023年

作者：刘员王欢欢吕洁丽张来宾新乡医学院药学院

目的：研究当归苯酞二聚体riligustilide(DG2)对脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用，并探讨其作用机制。方法：通过LPS诱导建立RAW264.7细胞炎症模型，采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法考察DG2对RAW264.7细胞存活率的影响，Griess法考察DG2对LPS诱导的RAW264.7细胞释放炎症介质一氧化氮(nitric oxide，NO)的影响，酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA)考察DG2对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)的影响，Western blotting法考察DG2对LPS诱导的RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)，以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)、核转录因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)和信号传导及转录激活蛋白(signal transducer and activator of transcription，STAT)信号通路的影响，免疫荧光法考察DG2对LPS诱导的RAW264.7细胞STAT3核转位的影响。结果：DG2浓度在64 μmol/L下对RAW264.7细胞存活率无影响，DG2能显著降低LPS诱导的RAW 264.7细胞释放NO的水平(P<0.001)(IC50= 26.13 ± 5.75 μmol/L)，与阳性对照槲皮素的作用相当(IC50= 26.06 ± 2.28 μmol/L)；还能够显著抑制炎症因子IL-6和TNF-α的生成(P<0.01，P<0.001)。DG2能够显著抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS和COX-2蛋白的表达(P<0.01，P<0.001)，显著抑制p-STAT3、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和p-p38的蛋白表达(P<0.05，P<0.01)，同时抑制STAT3的核转位。结论：DG2可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应，其机制可能与下调STAT、NF-κB和MAPK信号通路有关。

关键词：当归苯酞二聚体抗炎 RAW264.7细胞作用机制

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