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利用苯胺蓝染色法对苹果果实角质膜发育品质的评价

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西北农业学报 2013年第10期22卷 120-125页

作者：陈柏杨艳青任小林樊丽向春燕西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100

为探索苯胺蓝染色法与判定苹果果实角质膜发育品质的相关性,对6个不同品种苹果果实进行染色试验,并测定角质膜厚度、果点密度大小、表皮细胞大小和果形指数,通过电镜观察果面皮孔及蜡质裂纹发生情况,最后对染色结果与角质膜结构指标进... 详细信息

为探索苯胺蓝染色法与判定苹果果实角质膜发育品质的相关性,对6个不同品种苹果果实进行染色试验,并测定角质膜厚度、果点密度大小、表皮细胞大小和果形指数,通过电镜观察果面皮孔及蜡质裂纹发生情况,最后对染色结果与角质膜结构指标进行相关分析。结果表明,染色结果与皮孔闭合程度及其周围蜡质裂纹愈合状况以及果面蜡质裂纹的发生情况存在相关性,与角质膜厚度等结构指标相关性不明显。苹果果实贮藏前苯胺蓝染色试验可判定果实皮孔及果面蜡质裂纹发育品质,对贮藏期间由于角质膜发育不完善引起的失水失鲜、呼吸伤害和相关表皮病害等可以提供一个指示,染色结果与品种的耐贮性没有直接关系。

关键词：苹果苯胺蓝染色染色级数皮孔蜡质裂纹

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利用苯胺蓝染色检测苹果冷藏表皮病害的研究

果树学报 2011年第4期28卷 703-707,F0004页

作者：李富军张新华姚永花孙希生刘禄强山东理工大学农业工程与食品科学学院山东淄博250049 罗门哈斯中国公司北京100016 山东省招远市蚕庄镇果业站山东招远265402

为阐明苯胺蓝染色检测苹果冷藏表皮病害的机理,以富士苹果(Malus domestica Borkh ***)为试材,通过苯胺蓝染色和扫描电镜的方法,研究了苹果采收后苯胺蓝染色和0℃冷藏210 d后几种表皮病害的表皮结构。结果表明,(1)苹果表皮苯胺蓝染色部... 详细信息

为阐明苯胺蓝染色检测苹果冷藏表皮病害的机理,以富士苹果(Malus domestica Borkh ***)为试材,通过苯胺蓝染色和扫描电镜的方法,研究了苹果采收后苯胺蓝染色和0℃冷藏210 d后几种表皮病害的表皮结构。结果表明,(1)苹果表皮苯胺蓝染色部位存在皮孔发育不完善、表皮裂缝愈合不完善等质量缺陷,且该缺陷可以通过苯胺蓝染色的方法显现出来;(2)苹果贮藏210 d后表皮病害部位表皮及其蜡质层存在皮孔和表皮裂缝愈合不完善的质量缺陷;(3)苹果苯胺蓝处理后,发生染色部位往往与冷藏210 d后表皮病害发生部位相吻合。因此,苯胺蓝染色可用于检测果实贮藏病害的结构机理是:染色部位与病害部位存在共同结构基础,即发育不完善的表皮质量;该质量缺陷可用苯胺蓝染色的方法在果实入贮前使其显现出来。

关键词：苹果苯胺蓝染色表皮病害扫描电镜

低渗肿胀实验、苯胺蓝染色及染色质扩散实验检测精子核蛋白及膜完整性对比研究

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中国生育健康杂志 2018年第5期29卷 428-433页

作者：李安娜张美华房振亚邱毅国家卫生和计划生育委员会生育调控技术重点实验室山东省妇幼保健院山东省计划生育科学技术研究所山东省立医院集团妇产医院济南250014

目的通过对低渗肿胀实验(HOST)、苯胺蓝(AB)染色实验、染色质扩散(SCD)实验、脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)实验、AB/HOST实验,SCD/HOST实验、HOST/TUNEL实验的检测结果中精子活性分级进行比较,探索优化精子活性的... 详细信息

目的通过对低渗肿胀实验(HOST)、苯胺蓝(AB)染色实验、染色质扩散(SCD)实验、脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)实验、AB/HOST实验,SCD/HOST实验、HOST/TUNEL实验的检测结果中精子活性分级进行比较,探索优化精子活性的检验方法。方法选取2012年5月—2016年10月已育成年健康男性志愿者30例。每例样本分为7组,分别为:HOST组、AB组、SCD组、TUNEL组、HOST/AB组和HOST/SCD组、HOST/TUNEL组。分别进行相应方法的染色,观察精子尾部肿胀及核蛋白、DNA受损情况,计算各级活力精子的比例。结果单独AB和单独HOST与HOST/AB比较,精子分级差异有统计学意义;单独SCD和单独HOST与HOST/SCD比较,精子分级差异有统计学意义;单独TUNEL和单独HOST与HOST/TUNEL比较,精子分级差异有统计学意义。结论 HOST/AB联合染色及HOST/SCD联合染色是对精子的核蛋白、DNA及膜完整性判断更为准确和实用的方法。

关键词：精子苯胺蓝染色低渗肿胀实验染色质扩散实验核蛋白 TUNEL

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合欢种皮结构及其与吸水的关系

林业科学 2019年第5期55卷 46-54页

作者：陈丽代松马青江邓先静朱铭玮李淑娴南京林业大学南方现代林业协同创新中心南京210037 贵州省铜仁科学院铜仁554300 青海省林业厅种苗站西宁810008

【目的】研究合欢种皮结构及其对种子吸水的影响,探索种子的吸水机制,为硬实性种子休眠的解除提供理论依据。【方法】以籽粒饱满、无病虫害的合欢种子为试材,利用体视显微镜和扫描电镜观察种皮结构,并结合染色法和凡士林密封试验,探究... 详细信息

【目的】研究合欢种皮结构及其对种子吸水的影响,探索种子的吸水机制,为硬实性种子休眠的解除提供理论依据。【方法】以籽粒饱满、无病虫害的合欢种子为试材,利用体视显微镜和扫描电镜观察种皮结构,并结合染色法和凡士林密封试验,探究合欢种皮结构对吸水的影响。【结果】合欢种子的种皮具有不透水性,采用始温60、70、80℃的热水浸种处理均能有效解除其硬实性,但种子生活力随热水温度的升高而降低。合欢种子呈不规则的扁椭圆形,种皮坚硬,黄褐色,背腹面各有一条向外突出且长轴与种子侧缘平行的椭圆形棱。扫描电镜结果表明,椭圆形棱是种皮表面的一道较宽的裂痕。合欢种子种皮由外到内依次为:表皮层、栅栏层、骨状石细胞层、厚壁细胞层、薄壁细胞层。种子表面有许多大小、形状及深度不同的裂缝。种孔和种脊紧闭,种脐被致密的蜡质所覆盖,维管束由种脐开始平行于种皮表面向其深处延伸。热水处理后,种孔开启,种脊处细胞开裂,种脐处的蜡质减少。凡士林密封实验发现,解除硬实性后,种子各部位均可吸水,但子叶末端区域的吸水量始终最低。吸水4h时,种脐部位的吸水量最大,显著高于其他处理;随后中间部位吸水加快,吸水至24h,种脐部位和中间部位的吸水率差异不显著,均高于子叶末端部位,该差异趋势一直保持至种子吸水饱和。苯胺蓝染色发现,种皮有3种吸水途径:水分最先由种脊进入种皮并沿其内的维管束移动;随后种孔和种脐处也有水分进入;水分还可以透过表皮层,但没有继续向内穿过栅栏层进入种子内部。TTC染色发现,种子的胚根端最先吸水并被染成红色,随后水分由胚根端向种子另一端即子叶末端迁移,在同一水平位置水分由子叶侧缘向中间渗透。【结论】解除合欢种子硬实性的最佳方法是始温70℃的热水处理5min。种脊是合欢种子的初始吸水部位,随后水分也由种孔和种脐进入种胚,并由胚根端向子叶末端迁移。种皮的栅栏层、明线、厚壁细胞层、覆盖于种脐表面的蜡质层和填充于种皮维管束中的蜡质可能均与合欢种子的硬实性有关。

关键词：合欢吸水机制种皮结构 TTC染色苯胺蓝染色

梗阻性无精子症患者附睾精子核成熟度检测初探

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中华医学杂志 2012年第26期92卷 1828-1831页

作者：王鸿祥陈斌胡凯冯坦金炎杨昊王益鑫黄翼然上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科上海市男科学研究所 200001

目的明确梗阻性无精子症（OA）患者附睾精子核成熟度情况。方法选取2011年1—5月上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿男科门诊的男性不育患者81例，其中拟行卵胞质内单精子注射技术（ICSI）的OA患者32例（OA组），弱精子症患者49例（弱... 详细信息

目的明确梗阻性无精子症（OA）患者附睾精子核成熟度情况。方法选取2011年1—5月上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿男科门诊的男性不育患者81例，其中拟行卵胞质内单精子注射技术（ICSI）的OA患者32例（OA组），弱精子症患者49例（弱精症组）；另设对照组32例。弱精症组及对照组进行精液分析，OA组进行经皮附睾精子抽吸术后进行样本镜检。同时采用吖啶橙试验及苯胺蓝染色试验对3组样本进行精子核成熟度检测。结果弱精症组与对照组的精液量及精子密度差异均无统计学意义（均P〉0．05），OA组精子密度显著低于对照组（P〈0．01）；弱精症组及OA组精子活率显著低于对照组（均P〈0．01）；而弱精症组a＋b级精子百分比也显著低于对照组（P〈0．01）。OA组和弱精症组的吖啶橙染色与苯胺蓝染色阴性率分别为57％±20％、64％±20％和62％±19％、67％±15％，均低于对照组（81％±9％、85％±8％），差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论OA患者附睾精子核成熟度低于健康对照，需要进一步改善精子核成熟度以提高生育力。

关键词：无精子症精子核成熟度经皮附睾精子抽吸术吖啶橙试验苯胺蓝染色

枸杞胼胝质酶基因克隆及在雄性不育材料中的表达分析

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西北植物学报 2013年第3期33卷 437-443页

作者：李彦龙樊云芳戴国礼秦垦曹有龙国家枸杞工程技术研究中心银川750002

以雄性不育枸杞‘宁杞5号’和正常可育枸杞‘宁杞1号’为材料,提取不同发育时期枸杞花蕾RNA,反转录合成cDNA,利用胼胝质酶的β-1,3-葡聚糖酶属性进行同源克隆和半定量RT-PCR分析。结果表明:(1)所克隆的胼胝质酶基因(LG1)属于植物糖基水... 详细信息

以雄性不育枸杞‘宁杞5号’和正常可育枸杞‘宁杞1号’为材料,提取不同发育时期枸杞花蕾RNA,反转录合成cDNA,利用胼胝质酶的β-1,3-葡聚糖酶属性进行同源克隆和半定量RT-PCR分析。结果表明:(1)所克隆的胼胝质酶基因(LG1)属于植物糖基水解酶第17家族基因,编码344个氨基酸,有5个氨基酸保守区在4种植物的花药β-1,3-葡聚糖酶基因中都存在。(2)LG1在正常可育枸杞花药中高量表达,在雄性不育枸杞花药中表达沉默,但基因序列并没有发生突变。(3)经苯胺蓝染色观察,雄性不育枸杞花药四分体分解受阻与LG1基因表达沉默同步。研究结果提示,LG1基因是受不育基因调控的下游基因,参与了枸杞花粉的败育过程,LG1基因沉默是雄性不育枸杞花粉败育的一个重要原因。

关键词：枸杞雄性不育胼胝质酶半定量RT-PCR 苯胺蓝染色

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新疆海岛棉传粉受精过程研究

新疆农业科学 2015年第6期52卷 988-994页

作者：阿里甫.艾尔西孔杰宁新民王为然骆乐薛玲英金银根新疆农业科学院核技术生物技术研究所乌鲁木齐830091 新疆农业科学院经济作物研究所乌鲁木齐830091 扬州大学生物技术学院江苏扬州225009

【目的】通过对人工授粉后海岛棉受精过程进行切片观察,获得其受精过程的动态结构变化规律,为新疆海岛棉遗传育种提供支持。【方法】以新海35号为材料,采用人工授粉、石蜡法连续切片及苯胺蓝染色的方法,观察并拍摄授粉后花粉粒萌发、花... 详细信息

【目的】通过对人工授粉后海岛棉受精过程进行切片观察,获得其受精过程的动态结构变化规律,为新疆海岛棉遗传育种提供支持。【方法】以新海35号为材料,采用人工授粉、石蜡法连续切片及苯胺蓝染色的方法,观察并拍摄授粉后花粉粒萌发、花粉管生长和双受精过程的显微结构变化。【结果】海岛棉具有胚珠倒生、双层珠被、厚珠心,蓼型成熟胚囊,受粉前反足细胞和部分珠心细胞已经开始解体;人工授粉后0.5-1h,花粉粒萌发形成花粉管;2-14 h,花粉管在花柱内向下生长;16-20 h,花粉管到达珠孔端;20-24 h,花粉管进入胚囊释放出精子和营养物质,一个精子靠近卵细胞并与之受精,24 h时另一个精子与极核受精;50 h时,初生胚乳核分裂成2个游离核;74 h,合子第一次分裂,游离核数量也明显增多。此外,传粉50 h,胚珠表皮细胞伸长生长,74 h,纤维明显伸长。【结论】海岛棉与陆地棉受精过程中的生物学特征基本相同,但海岛棉受精各阶段与陆地棉相比时间更长,受精过程较慢,74 h后仍未见胚的第2次分裂及进一步的分裂,有待进一步研究。

关键词：海岛棉石蜡切片苯胺蓝染色花粉管受精

假单胞菌QL212的分离鉴定及产物凝胶多糖的制备纯化应用

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假单胞菌QL212的分离鉴定及产物凝胶多糖的制备纯化应用

作者：曲衍洪济南大学

学位级别：硕士

凝胶多糖是微生物发酵产生的直链同型β-1,3-葡聚糖，因其独特的理化性质与免疫活性，使它在很多领域都具有广泛的应用开发前景，例如，食品、医药、农业、化工、建筑等。凝胶多糖的聚合度约450，分子量较大，因此在多方面限制了凝胶多... 详细信息

凝胶多糖是微生物发酵产生的直链同型β-1,3-葡聚糖，因其独特的理化性质与免疫活性，使它在很多领域都具有广泛的应用开发前景，例如，食品、医药、农业、化工、建筑等。凝胶多糖的聚合度约450，分子量较大，因此在多方面限制了凝胶多糖的实际应用。凝胶多糖分子链的长短及其聚合度对其在医药中的应用具有重要意义。分子量较大的凝胶多糖不溶于水或水溶液粘度较高，抑制了其生物活性。低分子量的凝胶多糖经过修饰后具有良好的抗肿瘤、抗HIV以及免疫活性。β-1,3-葡聚糖一般出现在真菌、酵母菌、藻类、细菌和高等植物的细胞壁或细胞膜上。迄今为止，细菌中只报道了土壤杆菌属和产碱杆菌属能够生产同型直链的β-1,3-葡聚糖。然而，不同来源的β-1,3-葡聚糖具有不同的物理性质，本课题组筛选获得一株产凝胶多糖的假单胞菌，并发现所产凝胶多糖有较好的水溶性，具有较好应用前景。本论文以从土壤中筛选的高产胞外多糖菌株查实3-1作为出发菌株，通过镜检和16SrDNA序列分析对菌株查实3-1进行了鉴定;研究发酵后凝胶多糖的制备、分离和纯化工艺;采用红外光谱和多角度激光散射技术分析分离纯化后的凝胶多糖的分子结构和分子量;应用单因子实验和响应面法优化了发酵培养基和培养条件。主要内容是：从土壤筛选出18株产糖量较高的菌株，经过镜检和用含有苯胺蓝的固体培养基染色获得了能够分泌凝胶多糖的菌株－查实3-1，PCR扩增查实3-1的16S rDNA序列后，使其与T载体连接导入大肠杆菌DH5α，蓝白斑筛选出成功导入的菌落，测序获得查实3-1的16S rDNA序列，将该序列与NCBI数据库中的已登录的序列进行比对分析，并利用Biolog自动微生物鉴定系统分析了该菌株的碳源利用情况，最终鉴定菌株查实3-1为假单胞菌QL212。采用发酵培养基培养假单胞菌QL212发酵凝胶多糖，采用有机溶剂分级沉淀法获得凝胶多糖粗品，Sevag法脱蛋白，透析法去除杂质和小分子糖类物质，经过离子交换层析和分子筛进一步纯化凝胶多糖得到纯品。较纯的凝胶多糖是白色粉末状固体，能够溶于水。通过多角度激光散射分析确定了凝胶多糖的分子量为618KDa，红外光谱分析显示β-键的特征，在波长890cm-1处有吸收峰，在840cm-1处没有特征吸收峰说明没有α-键存在。通过单因素试验分析确定了蔗糖与酵母粉为假单胞菌QL212发酵的最佳碳源和氮源并且分析了影响凝胶多糖发酵的因素，然后挑选3个主要影响因素设计BBD实验。通过优化，获得了发酵凝胶多糖的最佳条件：蔗糖30.11g/L，酵母粉5.94g/L，碳酸钙3g/L，接种量和种龄分别为10%和12h，装液量和摇床转速分别为75mL和180rpm，发酵液初始pH值8.03，发酵周期为96h，发酵温度为30～32℃，凝胶多糖发酵产量最高，最高产量为5.92g/L。微生物絮凝剂具有无毒无害无二次污染的性质，比普通絮凝剂更有应用前景。本文还对凝胶多糖的絮凝作用进行研究，并对影响絮凝的因素进行了初步的优化。测定了凝胶多糖对高岭土、印染污水、黄河水、果汁的絮凝作用均取得了较好的效果，絮凝率分别为97.67%、93.87%、94.17%和93.98%。

关键词：胞外多糖苯胺蓝染色理化性质响应面优化生物絮凝剂

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苹果果实发育期角质膜结构特性的研究

苹果果实发育期角质膜结构特性的研究

作者：陈柏西北农林科技大学

学位级别：硕士

果实采后损失主要包括由病害引起的腐烂损失和果实失水引起的失重失鲜，而二者都与果实角质膜的特性有密切关系，因此，研究苹果果实角质膜结构的特性对果实采后贮藏保鲜具有重要意义。本研究以苹果果实为试材，研究了果实发育期角质膜... 详细信息

果实采后损失主要包括由病害引起的腐烂损失和果实失水引起的失重失鲜，而二者都与果实角质膜的特性有密切关系，因此，研究苹果果实角质膜结构的特性对果实采后贮藏保鲜具有重要意义。本研究以苹果果实为试材，研究了果实发育期角质膜结构的变化特性以及果面蜡质裂纹的发生特性;同时对不同品种成熟期果实和不同产区富士果实的角质膜结构进行差异性分析。此外，本研究还对苯胺蓝染色法评价苹果果实角质膜发育质量的具体相关因素进行了探索，以期为苯胺蓝染色法评价果实角质膜发育质量提供一定的理论依据。具体研究结果如下： 1.苹果果实发育期角质膜结构的变化特性富士与嘎拉苹果果实的角质膜厚度随果实发育呈现升高的趋势，分别于盛花后170d和盛花后130d时达到最大值。表皮蜡质含量发育期内整体变化很小，嘎拉果实盛花后90d、富士果实盛花后150d时果面蜡质含量降低，可能是由于果实膨大期果实体积增大，导致果面蜡质含量相对降低。富士和嘎啦分别于盛花后70d和盛花后50d开始出现蜡质裂纹，到成熟期时富士果面蜡质裂纹已基本愈合，嘎拉果面仍存在一定数量的裂纹。 2.不同品种果实成熟期的角质膜结构差异性分析在果实成熟期时，富士、国光等贮藏性好的晚熟品种果实角质膜厚度较高而表皮细胞长宽比值较低，金冠、红星等中熟品种则相反。国光皮孔周围及果面蜡质裂纹分布较多，粉红女士、红星和富士等果实皮孔周围及果实表面的蜡质裂纹较少或者部分已经愈合。 3.同一品种不同产区果实成熟期的角质膜结构差异性分析洛川、黄陵和凤翔地区果实角质膜厚度高于白水和宜川地区。白水地区果点密度最大，凤翔地区最小。凤翔、洛川地区富士果实表面蜡质裂纹均很少，果面蜡质分布非常均匀，白水、黄陵、宜川地区富士苹果果实表面出现蜡质裂纹，但大部分裂纹已愈合，推测富士果实果面蜡质裂纹有一定的愈合能力。 4.苯胺蓝染色法对苹果果实角质膜发育质量的评价染色后吸水量值可作为反映角质膜发育状况的指标，且更加客观准确。0.06MPa真空度下1min，1min内恢复正常大气压，可以作为富士苹果染色的最佳条件。此方法可用于成熟期富士苹果的角质膜发育状况的快速评价。

关键词：苹果果实蜡质裂纹角质膜苯胺蓝染色