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苓桂术甘汤对心肌梗死后小鼠心肌纤维化及Lats1/Yap信号通路的影响

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中国中药杂志 2024年第17期49卷 4702-4710页

作者：徐少华王舒舒任涵赵婉竹周鹏王靓黄金玲安徽中医药大学中医学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

观察苓桂术甘汤对心肌梗死(MI)后小鼠心肌纤维化(MF)及心肌组织大肿瘤抑制激酶1(Lats1)/Yes相关蛋白(Yap)信号通路的影响,探讨其抑制MF的作用和机制。采用冠状动脉左前降支结扎法构建MI后小鼠缺血模型,造模24 h后,连续干预6周。采用小... 详细信息

观察苓桂术甘汤对心肌梗死(MI)后小鼠心肌纤维化(MF)及心肌组织大肿瘤抑制激酶1(Lats1)/Yes相关蛋白(Yap)信号通路的影响,探讨其抑制MF的作用和机制。采用冠状动脉左前降支结扎法构建MI后小鼠缺血模型,造模24 h后,连续干预6周。采用小动物超声成像系统检测小鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室舒张末期内径(LVIDd);采用HE及Masson染色观察小鼠心肌组织病理学变化;采用ELISA法检测小鼠血清肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;采用RT-qPCR法检测小鼠心肌组织Lats1、Yap、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA水平;采用Western blot法检测小鼠心肌组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(ColⅢ)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、Lats1、Yap、磷酸化Yap(phosphorylation-Yap,p-Yap)、细胞核Yap(n-Yap)蛋白表达。与假手术组比较,模型组小鼠LVEF、LVFS水平显著降低,LVIDd、LVIDs水平显著升高(P苓桂术甘汤干预后,小鼠LVEF、LVFS水平显著升高,LVIDd、LVIDs水平显著降低(P苓桂术甘汤能够抑制MI后模型小鼠MF,改善小鼠心功能,此作用与其激活Lats1/Yap信号通路密切相关。

关键词：苓桂术甘汤心肌梗死心肌纤维化 Lats1/Yap信号通路

苓桂术甘汤的临床应用:1项系统性评价与Meta分析

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中草药 2023年第14期54卷 4599-4614页

作者：张晟安刘志栋戴亮李玲党延启周文君王振中季光上海中医药大学附属龙华医院脾胃病研究所上海200032 北京大学深圳医院临床研究院广东深圳518036 上海中医药大学中药学院上海201203 江苏康缘现代中药研究院江苏东连云港222000

目的对经典名方苓桂术甘汤的临床应用证据进行系统性评价与Meta分析。方法在知网(CNKI)、万方(Wanfang)、维普(VIP)、中国生物医学文献数据库(Sinomed)、PubMed、Web of Science与Ovid共7个平台检索自各数据库建库至2023年4月5日的苓... 详细信息

目的对经典名方苓桂术甘汤的临床应用证据进行系统性评价与Meta分析。方法在知网(CNKI)、万方(Wanfang)、维普(VIP)、中国生物医学文献数据库(Sinomed)、PubMed、Web of Science与Ovid共7个平台检索自各数据库建库至2023年4月5日的苓桂术甘汤相关临床随机对照研究,对各病种研究中报告的结局指标进行Meta分析,Egger检验评估发表偏倚,应用剪补法后进行敏感性分析。结果纳入47项研究,各病种病例共3933例。病种主要包括慢性心力衰竭、心律失常、非酒精性脂肪性肝病、2型糖尿病、血脂异常、肾脏病以及椎基底动脉供血不足。Meta分析显示,苓桂术甘汤具有改善慢性心力衰竭左室射血分数(MD=3.63,95%CI [1.72,5.54],P=0.000 2)、脑利钠肽(MD=-104.35,95%CI [-145.02,-63.67],P苓桂术甘汤临床应用证据涵盖慢性心力衰竭、心律失常、非酒精性脂肪性肝病、2型糖尿病、血脂异常、肾脏病以及椎基底动脉供血不足等疾病,对各病种相关结局指标均有所改善,临床应用多样;但相关研究的质量普遍有提高空间,仍需更高水平的循证医学证据。

关键词：苓桂术甘汤经典名方系统性综述 Meta分析循证医学

苓桂术甘汤治疗心血管疾病的作用机制研究进展

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中草药 2024年第9期55卷 3146-3156页

作者：王荣潘力黄金玲安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 中国科学技术大学生命科学与医学部安徽合肥230027

心血管疾病是全球重大公共卫生问题。苓桂术甘汤(Linggui Zhugan Decoction,LGZGD)作为传统中药方剂,在治疗心血管疾病方面疗效显著。通过对LGZGD在治疗心血管疾病的药理活性成分和作用机制进行深入探讨和总结,从中西医结合的视角,分析... 详细信息

心血管疾病是全球重大公共卫生问题。苓桂术甘汤(Linggui Zhugan Decoction,LGZGD)作为传统中药方剂,在治疗心血管疾病方面疗效显著。通过对LGZGD在治疗心血管疾病的药理活性成分和作用机制进行深入探讨和总结,从中西医结合的视角,分析了LGZGD联合现代医药和手术治疗心血管疾病的协同效应,并对LGZGD的未来推广与应用提出了较为前瞻性的展望,为LGZGD治疗心血管疾病及相关疾病提供新的思路和方法。

关键词：苓桂术甘汤心血管疾病联合治疗茯苓桂枝白术甘草

苓桂术甘汤联合基质金属蛋白酶响应型多柔比星逐级靶向脂质体抗原发性肝癌作用研究

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中国新药杂志 2024年第11期33卷 1155-1163页

作者：孔亮曹慧敏郭睿博张璐李学涛贾连群辽宁中医药大学药学院大连116600 辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室沈阳110847

目的:探讨苓桂术甘汤联合基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)响应型多柔比星(doxorubicin,DOX)逐级靶向脂质体抗原发性肝癌的协同增效作用。方法:以HepG2细胞为体外细胞模型,利用在线SynergyFinder软件分析苓桂术甘汤联合MM... 详细信息

目的:探讨苓桂术甘汤联合基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)响应型多柔比星(doxorubicin,DOX)逐级靶向脂质体抗原发性肝癌的协同增效作用。方法:以HepG2细胞为体外细胞模型,利用在线SynergyFinder软件分析苓桂术甘汤联合MMP酶响应型DOX逐级靶向脂质体的协同指数;50只3周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分为2组,空白对照组(n=10)和造模组(n=40)。采用腹腔注射二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)和高脂饮食相结合建立原发性肝癌小鼠模型,模型制备成功后将小鼠分为模型组(Model)、苓桂术甘汤组(LGZGT)、脂质体组(Lip)及联合干预组(LGZGT+Lip),各治疗组小鼠分别灌胃给予苓桂术甘汤,腹腔注射给予脂质体,其余各组予等量生理盐水,连续8周。考察小鼠体重、肝脏指数;甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平,谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyl transferase,γ-GT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性;苏木素伊红(hematoxylin eosin,HE)染色、马松(Masson)染色观察肝脏病理变化;免疫组织化学染色、原位末端标记法(terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)染色观察肿瘤细胞增殖、凋亡情况。结果:两药联合协同指数评分结果显示,两药联合应用零相互作用效力(zero interaction potency,ZIP)值为2.697,具有协同增效作用。体内药效学结果显示,苓桂术甘汤,脂质体及联合干预后,均能降低小鼠肝脏指数、AFP和CEA表达水平以及ALT,AKP,AST,γ-GT活性,改善肝脏病理损伤、肝纤维化,抑制肝癌细胞增殖及促进肝癌细胞凋亡,且LGZGT+Lip组的干预能力最强。结论:苓桂术甘汤与MMP响应型DOX逐级靶向脂质体联合应用于原发性肝癌的治疗,具有协同增效作用,为临床原发性肝癌的治疗提供了新思路。

关键词：苓桂术甘汤基质金属蛋白酶多柔比星逐级靶向脂质体原发性肝癌协同增效

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苓桂术甘汤药理作用及其机制研究进展

中国实验方剂学杂志 2019年第14期25卷 222-227页

作者：陈君媚周春祥南京中医药大学

苓桂术甘汤临床广泛应用于由脾虚饮停引起的各种疾病,是温脾化饮法的代表方。古代医家对其组方论述也多不离脾虚饮停。现代研究发现,苓桂术甘汤组成成分大多含有抗炎、抗肿瘤以及调节免疫的作用。目前关于苓桂术甘汤的药理机制研究主要... 详细信息

苓桂术甘汤临床广泛应用于由脾虚饮停引起的各种疾病,是温脾化饮法的代表方。古代医家对其组方论述也多不离脾虚饮停。现代研究发现,苓桂术甘汤组成成分大多含有抗炎、抗肿瘤以及调节免疫的作用。目前关于苓桂术甘汤的药理机制研究主要涵盖β淀粉样蛋白(Aβ)清除与抗神经炎症、调控脂质代谢和胰岛素抵抗、保护心肌细胞以及调节水液代谢。苓桂术甘汤可以通过调节Aβ关键转运蛋白的表达,包括低密度脂蛋白受体相关蛋白-1和晚期糖基化终末产物受体,促进Aβ清除,并且可以通过抑制小胶质细胞分泌白细胞介素(IL)-1β,IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等促炎因子减轻神经细胞炎症。该方还可通过调控脂联素、胰岛素和瘦素水平影响脂质代谢和胰岛素抵抗,进而对代谢综合征和非酒精性脂肪性肝病产生治疗作用。苓桂术甘汤对心肌细胞的保护机制主要涉及抑制核转录因子-κB(NF-κB)信号通路过度激活、上调Smad7蛋白表达和下调Smad3蛋白表达、调节NF-κB抑制蛋白激酶(IKK)/NF-κB抑制蛋白(IκB)/NF-κB信号通路,抑制炎症因子产生以及下调半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-8表达。此外,苓桂术甘汤还可调控水通道蛋白以影响机体水液代谢。该方还具有显著的抗氧化作用。中药复方与中医疾病证候的网络调节密切相关,借助以“疾病-靶点-药物”为特征的网络药理学完善“病-证-方”研究,有助于阐释脾虚饮停证的科学内涵以及温脾化饮法的生物学机制。

关键词：苓桂术甘汤药理作用机制温脾化饮脾虚饮停网络药理学

苓桂术甘汤调节Sig1R抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大的作用及机制

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中国中药杂志 2024年第3期49卷 754-762页

作者：王翔莫佳佳汤同娟丁芮黄金玲安徽中医药大学安徽合肥230012 合肥医工医药股份有限公司安徽合肥230601 安徽省药物再创新工程技术研究中心安徽合肥230088

探讨苓桂术甘汤通过调节sigma-1受体分子(sigma-1 receptor,Sig1R)抑制血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的作用机制。制备苓桂术甘汤含药血清与空白血清,构建体外AngⅡ诱导H9c2心肌细胞肥大模型,将H9c2细胞分为正... 详细信息

探讨苓桂术甘汤通过调节sigma-1受体分子(sigma-1 receptor,Sig1R)抑制血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的作用机制。制备苓桂术甘汤含药血清与空白血清,构建体外AngⅡ诱导H9c2心肌细胞肥大模型,将H9c2细胞分为正常组、AngⅡ模型组、20%空白血清组(20%normal rat serum,20%NSC)、20%苓桂术甘汤含药血清组。按分组将细胞用AngⅡ(1μmol·L^(-1))或AngⅡ与血清共孵育72 h后,鬼笔环肽染色检测心肌细胞表面积,微量法检测细胞Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性,流式细胞术检测线粒体Ca^(2+)水平,Western blot法检测细胞中心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、Sig1R、肌醇1,4,5-三磷酸受体2型(inositol 1,4,5-triphosphate receptor type 2,IP3R2)蛋白的表达。通过转染特异性siRNA下调Sig1R表达,观察Sig1R下调后苓桂术甘汤含药血清对AngⅡ刺激H9c2细胞后心肌细胞表面积、Na^(+)-K^(+)-ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性、线粒体Ca^(2+)、蛋白(ANP、BNP、IP3R2)表达的影响。结果显示,与正常组相比,AngⅡ组心肌细胞表面积显著增加,ANP、BNP表达显著升高(P苓桂术甘汤含药血清干预可以显著降低心肌细胞表面积及ANP、BNP表达(P苓桂术甘汤含药血清上述作用被逆转(P苓桂术甘汤含药血清可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,且其药效作用的发挥与调节Sig1R、促进线粒体Ca^(2+)内流、恢复ATP合成、保护线粒体功能有关。

关键词：苓桂术甘汤心肌细胞肥大线粒体相关内质网膜 Sigma-1受体分子(Sig1R)

苓桂术甘汤含药血清通过PI3K/Akt信号通路保护H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤

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中国实验方剂学杂志 2022年第13期28卷 1-9页

作者：汤同娟王翔左梦雨姚娟李向阳周鹏王靓黄金玲安徽中医药大学安徽省中医药科学院中西医结合研究所中药复方安徽省重点实验室合肥230001

目的:研究苓桂术甘汤含药血清对H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:采用血清药理学方法,制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清。体外培养H9c2细胞,分为空白组、H_(2)O_... 详细信息

目的:研究苓桂术甘汤含药血清对H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:采用血清药理学方法,制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清。体外培养H9c2细胞,分为空白组、H_(2)O_(2)组、20%空白血清组、20%苓桂术甘汤含药血清组,给予相应药物处理12 h,再加入100μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)继续培养6 h后进行检测。采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测20%苓桂术甘汤含药血清对H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞增殖活性的影响,荧光探针法检测线粒体活性氧(ROS)水平,比色法检测氧化应激标志物丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测PI3K、Akt mRNA水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。加入PI3K抑制剂LY294002后对线粒体ROS、LDH、GSH-Px水平,PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达及细胞凋亡率进行检测。结果:与空白组比较,H_(2)O_(2)诱导后细胞活力显著降低(P苓桂术甘汤含药血清能够提高H9c2细胞活力,显著降低线粒体ROS、MDA及LDH水平(P苓桂术甘汤含药血清与抑制剂LY294002联用后,逆转了苓桂术甘汤含药血清对H9c2细胞的上述作用(P苓桂术甘汤含药血清保护H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤可能与调控PI3K/Akt信号通路减轻氧化应激及细胞凋亡有关。

关键词：苓桂术甘汤氧化应激凋亡磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路

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苓桂术甘汤配伍机制研究

中国中药杂志 2002年第10期27卷 760-762页

作者：宋宗华戴舒佳黎辉琴毕开顺冯东沈阳药科大学药学院辽宁沈阳110016 北京中顺制药厂北京101300

目的 :研究《伤寒论》名方苓桂术甘汤的配伍机制 ,确定方中各药味的君臣佐使关系。方法 :采用正交试验设计对方中组成药味进行药味与药量同时加减拆方 ,选择小鼠常压耐缺氧、对抗氯仿所致小鼠心律失常和利尿 3项药理指标 ,对所得 16个... 详细信息

目的 :研究《伤寒论》名方苓桂术甘汤的配伍机制 ,确定方中各药味的君臣佐使关系。方法 :采用正交试验设计对方中组成药味进行药味与药量同时加减拆方 ,选择小鼠常压耐缺氧、对抗氯仿所致小鼠心律失常和利尿 3项药理指标 ,对所得 16个处方进行药理实验 ;采用方差分析、逐步回归分析 (SREG)与典型相关分析 (CCOR)将所得药理数据和组方药味及药量相关联 ,探讨复方苓桂术甘汤的配伍机制。结果 :确定了方中以茯苓为君 ,以桂枝为臣 ,佐以白术 ,使以甘草的配伍关系 ,与对该复方中药的传统诠释相一致。结论 :本研究为探讨复方中药的配伍机制提供了有意义的尝试。

关键词：苓桂术甘汤配伍机制正交试验设计方剂

苓桂术甘汤调控Wnt/β-catenin通路抑制心肌成纤维细胞纤维化

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中国中药杂志 2024年第15期49卷 4178-4187页

作者：丁芮李向阳王翔王靓周鹏黄金玲安徽中医药大学安徽合肥230012

该研究旨在通过观察苓桂术甘汤(Linggui Zhugan Decoction,LGZGD)含药血清对心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)纤维化及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路蛋白分子表达的调控机制。制备空白血清和LGZGD含药血清,胰酶-胶原酶... 详细信息

该研究旨在通过观察苓桂术甘汤(Linggui Zhugan Decoction,LGZGD)含药血清对心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)纤维化及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路蛋白分子表达的调控机制。制备空白血清和LGZGD含药血清,胰酶-胶原酶依次消化并结合差速贴壁法分离培养原代CFs,采用免疫荧光标记鉴定原代CFs。设正常对照组,模型组,20%空白血清组,5%、10%、20%LGZGD含药血清组。分别用20%空白血清,5%、10%、20%LGZGD含药血清预处理12 h,除正常对照组,其余5组均加入过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))刺激细胞,建立原代CFs纤维化模型。采用划痕愈合实验观察细胞迁移能力,ELISA法检测Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)含量,Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Wnt1、糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3 beta,GSK-3β)、磷酸化糖原合酶激酶3β(phospho synthase kinase 3 beta,p-GSK-3β)、β-catenin及细胞核β-catenin的蛋白表达,RT-qPCR检测β-catenin、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)的基因表达,免疫荧光技术检测关键蛋白α-SMA、β-catenin的表达及定位。制备Wnt1过表达CFs,采用H_(2)O_(2)处理CFs。设正常对照组、模型组、20%LGZGD含药血清组、空载质粒+20%LGZGD含药血清组、Wnt1过表达+20%LGZGD含药血清组。采用ELISA法检测ColⅠ、ColⅢ的含量与其比值,Western blot法检测α-SMA和Wnt1、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin及细胞核β-catenin的蛋白表达,RT-qPCR检测β-catenin、MMP9的基因表达。免疫荧光染色显示,心肌成纤维细胞Vimentin表达阳性,呈绿色,胞核为蓝色,纯度大于90%,鉴定是原代CFs。结果显示,与正常对照组相比,模型组CFs愈合率增强,ColⅠ、ColⅢ含量升高,ColⅠ/ColⅢ比值增大,α-SMA、Wnt1、p-GSK-3β、β-catenin、核β-catenin蛋白表达上调,GSK-3β蛋白表达降低,β-catenin、MMP9 mRNA表达显著升高,β-catenin、α-SMA荧光强度明显增强,表达量明显增多;与模型组相比,5%、10%、20%LGZGD含药血清能显著抑制细胞迁移能力,减少ColⅠ、ColⅢ的含量,降低ColⅠ/ColⅢ比值,下调α-SMA、Wnt1、p-GSK-3β、β-catenin、核β-catenin蛋白表达,提高GSK-3β表达,减少β-catenin、MMP9的mRNA表达,降低β-catenin、α-SMA荧光强度和表达量;与空载质粒+20%LGZGD含药血清组比,过表达Wnt1后,LGZGD作用被显著逆转。LGZGD能够减少胶原纤维过度沉积,抑制成纤维细胞过度增生,改善心肌纤维化进程。LGZGD改善心肌纤维化的作用与调控Wnt/β-catenin通路,减少胶原沉积,保护心肌细胞有关。

关键词：苓桂术甘汤慢性心力衰竭心肌纤维化心肌成纤维细胞 Wnt/β-连环蛋白信号通路