苓桂术甘汤含药血清通过PI3K/Akt信号通路保护H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤

作     者：汤同娟 王翔 左梦雨 姚娟 李向阳 周鹏 王靓 黄金玲 TANG Tongjuan;WANG Xiang;ZUO Mengyu;YAO Juan;LI Xiangyang;ZHOU Peng;WANG Liang;HUANG Jinling

作者机构：安徽中医药大学安徽省中医药科学院中西医结合研究所中药复方安徽省重点实验室合肥230001 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2022年第28卷第13期

页      面：1-9页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 100504[医学-方剂学] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100501[医学-中医基础理论] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81973844,81373533,82004180) 安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2020A0393) 安徽中医药大学自然科科学金重点项目(2020zrzd06) 

主　　题：苓桂术甘汤 氧化应激 凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路 

摘      要：目的:研究苓桂术甘汤含药血清对H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:采用血清药理学方法,制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清。体外培养H9c2细胞,分为空白组、H_(2)O_(2)组、20%空白血清组、20%苓桂术甘汤含药血清组,给予相应药物处理12 h,再加入100μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)继续培养6 h后进行检测。采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测20%苓桂术甘汤含药血清对H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞增殖活性的影响,荧光探针法检测线粒体活性氧(ROS)水平,比色法检测氧化应激标志物丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测PI3K、Akt mRNA水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。加入PI3K抑制剂LY294002后对线粒体ROS、LDH、GSH-Px水平,PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达及细胞凋亡率进行检测。结果:与空白组比较,H_(2)O_(2)诱导后细胞活力显著降低(P0.01),线粒体ROS、MDA及LDH水平显著增加(P0.01),CAT、GSH-Px水平则显著下降(P0.01),PI3K、Akt蛋白的磷酸化及mRNA水平明显降低(P0.05,P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01)。与H_(2)O_(2)组比较,苓桂术甘汤含药血清能够提高H9c2细胞活力,显著降低线粒体ROS、MDA及LDH水平(P0.01),并显著提高CAT、GSH-Px水平(P0.01),促进PI3K、Akt的磷酸化及mRNA的表达(P0.05,P0.01),显著减少细胞凋亡率(P0.01)。苓桂术甘汤含药血清与抑制剂LY294002联用后,逆转了苓桂术甘汤含药血清对H9c2细胞的上述作用(P0.05,P0.01)。结论:苓桂术甘汤含药血清保护H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤可能与调控PI3K/Akt信号通路减轻氧化应激及细胞凋亡有关。