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根癌农杆菌介导的橡胶树花药愈伤组织遗传转化体系的建立

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作物学报 2010年第10期36卷 1691-1697页

作者：黄天带李哲孙爱花周权男华玉伟黄华孙中国热带农业科学院橡胶研究所/国家橡胶树育种中心/农业部橡胶树生物学重点开放实验室/省部共建国家重点实验室培育基地/海南省热带作物栽培生理学重点实验室海南儋州571737

为建立根癌农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系,以花药愈伤组织为受体,研究了农杆菌菌株、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)等因素对遗传转化效率的影响。结果表明,农杆菌菌株、共培养温度和共培养时间对转化效率具有显著影响,AS不... 详细信息

为建立根癌农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系,以花药愈伤组织为受体,研究了农杆菌菌株、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)等因素对遗传转化效率的影响。结果表明,农杆菌菌株、共培养温度和共培养时间对转化效率具有显著影响,AS不影响转化效率。2.2万个花药愈伤组织经EHA105菌株侵染后,转入未添加AS的培养基,22℃共培养6d,通过50mgL-1卡那霉素抗性筛选、叶片GUS染色、uidA和NptII基因PCR特异扩增、PCR产物测序及NptII基因Southern检测,鉴定出11株转基因植株,并通过嫁接和次生体胚发生,获得来自8个转基因株系的681株转基因植株,移栽成活253株。

关键词：橡胶树根癌农杆菌花药愈伤组织遗传转化次生体胚发生

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百日草根尖和花药愈伤组织染色体制片技术

广西植物 2007年第5期27卷 673-675,740页

作者：叶要妹陈天花齐迎春杨涛华中农业大学园艺林学学院教育部园艺植物生物学重点实验室武汉430070

以种子萌发根尖和花药愈伤组织为材料,研究了取样时间、预处理方法对百日草染色体制片的影响。结果表明:根尖上午8:00～9:00,花药愈伤继代3～5d上午9:00～10:00为最佳取样预处理时间;采用三种药剂预处理活体根尖,以4℃下饱和对二氯苯溶... 详细信息

以种子萌发根尖和花药愈伤组织为材料,研究了取样时间、预处理方法对百日草染色体制片的影响。结果表明:根尖上午8:00～9:00,花药愈伤继代3～5d上午9:00～10:00为最佳取样预处理时间;采用三种药剂预处理活体根尖,以4℃下饱和对二氯苯溶液或0.002mol/L的8-羟基喹啉液预处理8h效果最佳,花药愈伤则以饱和对二氯苯溶液预处理6h效果最佳。本实验的预处理温度是固定的,可克服预处理随季节和时间温度的变化而带来的不稳定性,且百日草花药愈伤染色体观察为首次报道。

关键词：百日草根尖花药愈伤组织预处理染色体制片

AgNO_3对橡胶树花药愈伤组织形态及体胚发生的影响

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广西植物 2016年第12期36卷 1426-1431页

作者：戴雪梅黄天带李季杨先锋辛士超黄华孙中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/国家橡胶树育种中心海南儋州571737

橡胶树的花药愈伤组织在长期继代过程中,胚性易下降甚至丧失;而AgNO_3作为乙烯活性抑制剂,被广泛应用于植物组织培养中。该研究以继代培养4 a以上的热研7-33-97花药愈伤组织为材料,在继代培养基中添加2.5 mg·L^(-1)AgNO_3预培养35 d后... 详细信息

橡胶树的花药愈伤组织在长期继代过程中,胚性易下降甚至丧失;而AgNO_3作为乙烯活性抑制剂,被广泛应用于植物组织培养中。该研究以继代培养4 a以上的热研7-33-97花药愈伤组织为材料,在继代培养基中添加2.5 mg·L^(-1)AgNO_3预培养35 d后,观察预培养前后愈伤组织表形及其细胞形态的变化,并设计不同浓度AgNO_3及不同处理时间对其进行体胚诱导,90 d后分别统计胚状体总数和正常胚数。结果表明:浅黄色质地柔软的愈伤组织在含AgNO_3的培养基上预培养后能转变成鲜黄色易碎愈伤组织,在倒置显微镜下前者大多表现为不规则多边形,细胞内含物较稀薄;而后者则呈圆形或椭圆形,细胞内含物丰富,属于典型的胚性细胞。在体胚诱导的第1个月添加5 mg·L^(-1)AgNO_3能显著促进体胚的发生,AgNO_3浓度升至10 mg·L^(-1)时体胚发生受到抑制,且畸形胚的形成率显著增加;在含5 mg·L^(-1)AgNO_3的培养基中培养2个月以上,体胚发育明显受阻,大部分形成畸形胚。该研究结果在一定程度上恢复了橡胶树长期继代花药愈伤组织的胚性能力,并提高了其体胚发生频率,为橡胶树花药胚性愈伤组织长期继代培养过程中胚性的保持提供了参考。

关键词：橡胶树花药愈伤组织 AgNO3 细胞形态体胚发生

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穿心莲花药愈伤组织原生质体分离条件初探

分子植物育种 2023年

作者：胡斌盛周纯贤郑健云杜勤顾元钦徐丹广州中医药大学中药学院

为了获得形态完整、产量较高的愈伤组织原生质体，本研究以穿心莲花药愈伤组织为材料，研究了影响穿心莲花药愈伤组织原生质体制备的关键因素，初步摸索出穿心莲花药愈伤组织原生质体分离的最适条件。结果表明，穿心莲花药愈伤组织分离... 详细信息

为了获得形态完整、产量较高的愈伤组织原生质体，本研究以穿心莲花药愈伤组织为材料，研究了影响穿心莲花药愈伤组织原生质体制备的关键因素，初步摸索出穿心莲花药愈伤组织原生质体分离的最适条件。结果表明，穿心莲花药愈伤组织分离条件为液料比为50∶1，3.0%纤维素酶+0.75%离析酶为组合+0.6 mol/L甘露醇为渗透压稳定剂+20 mmol/L 2-(N-吗啡啉)乙磺酸为质膜稳定剂酶解8 h。该研究为后续利用穿心莲原生质体融合培养提供科学参考，为穿心莲改良育种提供科学依据。

关键词：穿心莲花药愈伤组织原生质体分离

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光皮树花药愈伤组织原生质体分离的研究

中南林业科技大学学报 2012年第4期32卷 135-139页

作者：李昌珠王丽华陈建华蒋丽娟李培旺张良波湖南省林业科学院湖南长沙410004 中南林业科技大学湖南长沙410004

为获得高质量的原生质体,给光皮树转化系统的建立奠定基础,以光皮树花药愈伤组织为材料,研究了愈伤组织结构、酶液组合、酶解时间及渗透压对原生质体分离效果及活力的影响,从而确定适合光皮树花药愈伤组织原生质体最佳分离条件。结果表... 详细信息

为获得高质量的原生质体,给光皮树转化系统的建立奠定基础,以光皮树花药愈伤组织为材料,研究了愈伤组织结构、酶液组合、酶解时间及渗透压对原生质体分离效果及活力的影响,从而确定适合光皮树花药愈伤组织原生质体最佳分离条件。结果表明:淡黄绿色、疏松的愈伤组织在CPW+2%纤维素酶R-10+0.3%蜗牛酶+0.25%果胶酶Y-23+13%甘露醇+0.6/L MES的酶解液中,黑暗条件下振荡酶解10 h,原生质体产量达到3.19×106个/g,具活力的原生质体为73.48%。

关键词：光皮树花药愈伤组织原生质体分离条件

枇杷花药愈伤组织诱导及褐化机理和控制方法研究

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枇杷花药愈伤组织诱导及褐化机理和控制方法研究

作者：刘红四川农业大学

学位级别：硕士

本研究以枇杷品系‘6-6-6'花药作为组织培养的外植体,通过诱导枇杷花药愈伤组织,进一步测定花药愈伤组织继代培养过程中总酚含量和与褐化相关酶活性的变化。初步探究了枇杷花药愈伤组织褐化的机理,找到控制花药愈伤组织褐化的有效措施... 详细信息

本研究以枇杷品系‘6-6-6'花药作为组织培养的外植体,通过诱导枇杷花药愈伤组织,进一步测定花药愈伤组织继代培养过程中总酚含量和与褐化相关酶活性的变化。初步探究了枇杷花药愈伤组织褐化的机理,找到控制花药愈伤组织褐化的有效措施。主要研究结果如下：1、枇杷花蕾的横径、纵径与小孢子发育时期呈显著正相关。当花蕾横径为4.68mm,纵径为4.96mm,花药颜色为黄绿色时,小孢子的发育时期处于单核靠边期,最适于枇杷花药愈伤组织诱导。2、最佳低温预处理时间筛选：经过4℃低温预处理1d的花药愈伤组织诱导率达71.11%,此条件处理下,诱导率最高且愈伤组织状态良好。但随着低温预处理时间不断延长,愈伤组织诱导率逐渐降低。3、最佳蔗糖浓度筛选：培养基中添加蔗糖浓度为5%时,诱导愈伤组织的效果最佳,愈伤组织诱导率达75.93%。当浓度超过5%,随着蔗糖浓度的增加愈伤组织诱导率逐渐下降。4、枇杷花药愈伤组织培养过程中,总酚含量与愈伤组织褐化程度呈正相关;PPO活性变化与愈伤组织褐化程度呈正相关;未褐化愈伤组织POD活性与褐化愈伤组织变化趋势相反,与褐化程度无明显相关性;SOD活性变化与愈伤组织褐化程度呈负相关。5、不同pH值、蔗糖、琼脂浓度处理中,pH5.4、蔗糖40g/L、琼脂7.5g/L时愈伤组织褐化指数最低。不同处理下,总酚含量和PPO活性与褐化指数呈正相关,POD和SOD活性则无明显相关。6、不同基本培养基、NAA、6-BA浓度处理中,当基本培养基为MS、NAA为1.0mg/L、6-BA0.25mg/L时,愈伤组织褐化指数最低,为28.92%。在不同处理条件下,愈伤组织总酚含量、PPO活性与其褐化指数呈正相关,POD活性与褐化指数不相关, SOD活性则与愈伤组织褐化指数呈负相关。7、AgNO3浓度为6mg/L时愈伤组织褐化指数最低。AgNO3各处理愈伤组织褐化指数与总酚含量、PPO活性呈正相关,与POD活性不相关,与SOD活性负相关。8、抗氧化剂处理中,以100mg/L抗坏血酸和10mg/L柠檬酸抗褐化效果最好。且在抗氧化剂处理下,总酚含量和PPO活性均为影响褐化的因素,POD则无相关性。9、吸附剂各处理中,以1.2g/L活性炭和1.5g/LPVP抗褐化效果最好。且吸附剂处理下,褐化指数与总酚含量呈正相关,与SOD活性呈负相关,与POD活性无相关性,PPO活性是引起褐化的因素,但不是主要因素。

关键词：枇杷花药愈伤组织褐化

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花药愈伤组织辐射诱导育种途径研究

丹东师专学报 1999年第4X期21卷 27-28页

作者：曾秀娥大连医科大学丹东分校生化教研室丹东118002

~６０Ｃｏ－ｒ射线辐射聚合草花药愈伤组织可产生许多重要结果，一定的照射量能够提高胚性细胞团的形成率和突变率，照射后分化的植株出现各种变异，其中有肉质叶和叶柄变短等有利变异，处理后分化的单倍体植株不开花，花期叶片的含... 详细信息

~６０Ｃｏ－ｒ射线辐射聚合草花药愈伤组织可产生许多重要结果，一定的照射量能够提高胚性细胞团的形成率和突变率，照射后分化的植株出现各种变异，其中有肉质叶和叶柄变短等有利变异，处理后分化的单倍体植株不开花，花期叶片的含氮量提高３．４％。由此可见，愈伤组织辐射诱变是值得重视的现代诱变育种途径。射线对植物离体组织和细胞的作用研究国内外均有报导。这些报导指出：一定剂量的辐射处理能提高愈伤组织的诱变率和绿苗分化率。本实验以聚合草花药愈伤组织为材料，应用６０Ｃｏ－ｒ射线处理，结合组织培养技术以期获得聚合草有利突变体，从而探讨花药愈伤组织辐射诱变育种途径的理论和实践意义。１．材料和方法１．１材料：取自

关键词：花药愈伤组织育种途径聚合草胚性细胞辐射诱导适宜辐射剂量花药培养单倍体植株辐射育种分化培养基

小麦花粉电穿孔法及花药愈伤组织基因枪法遗传转化技术研究

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小麦花粉电穿孔法及花药愈伤组织基因枪法遗传转化技术研究

作者：赵雪晶西北农林科技大学

学位级别：硕士

近年来，作物转基因育种以其打破生殖隔离、准确的改良目标性状、育种效率高等诸多优势，受到广泛的关注，而高效、稳定的遗传转化技术是提高转基因育种效率的前提和关键。探索便捷、快速的小麦遗传转化技术不仅有助于拓展小麦转基因育... 详细信息

近年来，作物转基因育种以其打破生殖隔离、准确的改良目标性状、育种效率高等诸多优势，受到广泛的关注，而高效、稳定的遗传转化技术是提高转基因育种效率的前提和关键。探索便捷、快速的小麦遗传转化技术不仅有助于拓展小麦转基因育种的途径，更对加快小麦新品种的培育具有重要的理论和实践意义。本研究以冬小麦品种济麦19为受体，对扬花期成熟花粉进行电穿孔处理，通过对花粉电穿孔的参数和转化条件的筛选和比较，旨在探索并建立小麦花粉电穿孔法转化技术体系，并利用花粉电穿孔法将Gus基因导入小麦，对获得的转基因T1、T代植株进行PCR、Southern和组织化学染色的检测和鉴定。其次，本研究以小麦品种新春9号的花药愈伤组织为受体，Gus为外源基因，对基因枪转化时的轰击参数进行优化，通过对轰击后花药愈伤组织中Gus基因瞬时表达率的检测，以及对再生植株PCR和PCR-Southern的鉴定，旨在优化以小麦花药愈伤组织为受体的基因枪法转化体系。本研究得到了以下主要结论： 1.小麦花粉电穿孔转化中，当电场强度为6kV/cm时，花粉细胞经Trypan Red和FDA染色的平均值最高为58.67%，表明电穿孔产生孔洞且有活力的细胞数最多，为最适电场强度;花粉电穿孔处理后冰上保存4h，FDA染色率为92.27%，而室温下保存为69.97%，表明冰上操作可以显著延长离体花粉的活力;当花粉密度为5×106个/mL、去雄后第5天授粉时结实率最高为9.82%，为比较适宜的花粉授粉条件。 2.利用花粉电穿孔法将外源基因Gus转入普通小麦，共授粉112个小花，T1代PCR检测得到2株阳性植株，转化率1.79%;PCR检测T代所有单株，阳性植株为19株，阳性率40.43%;Southern杂交检测结果表明，阳性植株T代的2个株系检测到杂交信号，分别以2和3拷贝整合入小麦基因组，同时取其种胚、幼根、叶片等经过组织化学染色法检测，呈现蓝色反应，表明利用小麦花粉电穿孔转化法可以成功将外源基因整合入小麦基因组中并稳定遗传至T代，且外源基因Gus能够得到表达。 3.利用基因枪轰击法将外源基因Gus转入小麦的花药愈伤组织，对轰击2天后的花药愈伤组织Gus基因瞬时表达率的比较发现，轰击距离为6cm、Gus:Bar=3:1时，瞬时表达率最高，为91.11%;但对再生植株的PCR检测表明，轰击距离为6cm、Gus:Bar=1:1时，共轰击愈伤组织211个，检测得到阳性植株3株，转化率最高，为1.42%。阳性植株经PCR-Southern检测到阳性条带，证明外源基因Gus整合到小麦的基因组中。通过本研究，初步建立了小麦花粉电穿孔转化法和花药愈伤组织基因枪转化法技术体系，为下一步开展相关功能基因的转化奠定基础。

关键词：小麦花粉电穿孔转化花药愈伤组织基因枪轰击

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小麦花药愈伤组织耐盐变异体的筛选

华北农学报 1988年第3期 7-12页

作者：赵瑞堂朱惠梅毕艳娟高书国乔亚科河北省农业技术师范学院河北省农业技术师范学院昌黎

在培养基中加入一定浓度NaCl,对小麦F1花药愈伤组织的耐盐变异体,进行细胞水平上的筛选.采用直接筛选法及逐渐增加盐浓度筛选法,结果表明,后者是提高耐盐变异体频率的有效措施.C17+0.1%NaCl（转移愈伤组织）C17+0.3%NaCl及C17+0.1%NaCl... 详细信息

在培养基中加入一定浓度NaCl,对小麦F1花药愈伤组织的耐盐变异体,进行细胞水平上的筛选.采用直接筛选法及逐渐增加盐浓度筛选法,结果表明,后者是提高耐盐变异体频率的有效措施.C17+0.1%NaCl（转移愈伤组织）C17+0.3%NaCl及C17+0.1%NaCl（转移愈伤组织）C17+0.5%NaCl处理的绿苗分化率,较直接筛选法分别提高5.06及15.0倍.在较高（加0.3%NaCl）盐含量的培养基上分化的花粉植株及其后代（H2、H3）表现耐盐性较强.获得了在0.4%含盐量土壤上种植能正常或基本正常生长的高耐盐株系3个.

关键词：小麦花药愈伤组织耐盐变异体