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芒果畸形病的巢式PCR检测

广东农业科学 2012年第22期39卷 162-164页

作者：贾静蒲金基吕延超占魏王芳谢艺贤海南大学环境与植物保护学院海南海口570228 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南儋州571737

建立了检测芒果畸形病的有效方法。利用Fusarium proliferatum的钙调蛋白基因序列设计外侧引物PRO1/PRO2和内侧引物O1/O2,采用引物PRO1/PRO2可以从芒果畸形病病原菌基因组中扩增出527 bp的特异性基因片段,采用引物O1/O2可获得477 bp的... 详细信息

建立了检测芒果畸形病的有效方法。利用Fusarium proliferatum的钙调蛋白基因序列设计外侧引物PRO1/PRO2和内侧引物O1/O2,采用引物PRO1/PRO2可以从芒果畸形病病原菌基因组中扩增出527 bp的特异性基因片段,采用引物O1/O2可获得477 bp的基因片段。巢式PCR的检测灵敏度达5×10-5ng/μL,是常规PCR的100倍。此法具有良好的特异性和检测灵敏度,为芒果畸形病的早期诊断和及时有效的防治提供技术方法和理论依据。

关键词：芒果畸形病巢式PCR 检测

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芒果畸形病的研究概况

中国植保导刊 2011年第8期31卷 11-15页

作者：周俊岸黄国弟广西亚热带作物研究所广西南宁530001

芒果畸形病是对芒果生产最具破坏性的病害之一。目前国际上虽对其进行了大量的研究,但对其病原、发病因子、侵染循环等仍未有定论,且尚未找到有效的防治方法。笔者结合国外相关研究资料,介绍了对芒果畸形病的研究概况,以期引起芒果生产... 详细信息

芒果畸形病是对芒果生产最具破坏性的病害之一。目前国际上虽对其进行了大量的研究,但对其病原、发病因子、侵染循环等仍未有定论,且尚未找到有效的防治方法。笔者结合国外相关研究资料,介绍了对芒果畸形病的研究概况,以期引起芒果生产者的重视,并供研究者参考。

关键词：芒果畸形病研究概况

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芒果畸形病的病因学及综合防治研究进展

西南农业学报 2010年第3期23卷 968-971页

作者：王万东龙亚芹黄家雄刘光华王美存解德宏陈于福陈华蕊尼章光云南省农业科学院热带亚热带经济作物研究所云南保山678025

芒果畸形病在中国作为一种新兴的病害,正在各芒果产区不断蔓延,如何有效地控制该病害的发生和蔓延已成为农业科研工作者和广大芒果种植户面临的重大难题。本文在查阅大量研究论文的基础之上,对芒果畸形病的致病因子和防治措施进行了综述... 详细信息

芒果畸形病在中国作为一种新兴的病害,正在各芒果产区不断蔓延,如何有效地控制该病害的发生和蔓延已成为农业科研工作者和广大芒果种植户面临的重大难题。本文在查阅大量研究论文的基础之上,对芒果畸形病的致病因子和防治措施进行了综述,以期对中国芒果畸形病的防治提供一定的理论依据。

关键词：芒果畸形病病因学综合防治

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芒果畸形病与DON和ZEN的关系初析

热带作物学报 2010年第5期31卷 815-818页

作者：杨顺锦詹儒林柳凤赵艳龙常金梅何衍彪海南大学环境与植物保护学院海南儋州571737 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所广东湛江524088

运用酶联免疫吸附法,对芒果畸形病组织中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)含量进行检测。结果显示:病组织中,DON含量达6296.77ng/mL,ZEN含量达278.80ng/mL;健康芒果组织中,二者含量分别为2327.27ng/mL和134.49ng/mL。说明... 详细信息

运用酶联免疫吸附法,对芒果畸形病组织中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)含量进行检测。结果显示:病组织中,DON含量达6296.77ng/mL,ZEN含量达278.80ng/mL;健康芒果组织中,二者含量分别为2327.27ng/mL和134.49ng/mL。说明高浓度毒素可能导致芒果植株叶芽大量畸形增生而不发育,花序畸形,花胚退化等症状。

关键词：芒果畸形病 DON ZEN

芒果畸形病病原菌鉴定与病原菌的GFP基因标记

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芒果畸形病病原菌鉴定与病原菌的GFP基因标记

作者：吕延超海南大学

学位级别：硕士

芒果畸形病(mango malformation disease)是世界性芒果重要病害,根据受害部位不同,芒果畸形病可分为营养器官畸形和花序畸形,畸形花序几乎不能结果,严重时可导致果树发育不良,植株矮小,产量锐减。该病害在国外芒果产区发生日益普遍,危... 详细信息

芒果畸形病(mango malformation disease)是世界性芒果重要病害,根据受害部位不同,芒果畸形病可分为营养器官畸形和花序畸形,畸形花序几乎不能结果,严重时可导致果树发育不良,植株矮小,产量锐减。该病害在国外芒果产区发生日益普遍,危害渐趋严重,但目前尚无有效的防治措施。国外报道,芒果畸形病由镰刀菌侵染引起,不同地区病原镰刀菌种类有所不同。在国内,该病在四川攀枝花和云南华坪芒果园已有发生为害,个别果园为害严重,有蔓延趋势,国内对此病害的病因尚未明确。为明确国内芒果畸形病病原,以便为防治提供理论依据和为今后开展更深入的研究工作奠定基础,本论文对发生在我国四川和云南的芒果畸形病开展了病原学研究,并对其中一个菌株做了绿色荧光蛋白(GFP)基因标记。研究结果如下：1、首次明确层出镰刀菌为芒果畸形病病原菌。四川攀枝花和云南华坪两地芒果园采集的芒果畸形病标本,通过组织分离、柯赫法则验证,病原菌形态学鉴定、ITS序列及β-tubulin基因序列分析辅助鉴定,确认其病原菌均为层出镰刀菌[Fusarium proliferatum (Matsushima) Nirenberg]。并在国际上首次证实该镰刀菌可以引起芒果畸形病。2、较为系统地测定了芒果畸形病病原菌的生物学特性。发现该病原菌生长的最适温度为24℃,最适pH为10;分生孢子萌发最适温度为24℃,最适pH值为5。病原菌能够利用供试的各种碳源和氮源生长,其中碳源以果糖最好,氮源以蛋白胨最好;连续光照处理菌丝生长速率高于交替光照或持续黑暗处理;分生孢子的致死温度为55℃,20min或者60℃,5min。3、在国内外首次用绿色荧光蛋白(GFP)基因标记层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)。通过溶壁酶酶解菌丝体成功制备了病原菌原生质体,用抗潮霉素基因作为选择标记,采用PEG介导的原生质体转化法,用绿色荧光蛋白表达载体(pCT74-sGFP)转化原生质体,获得表达GFP的转化子;转化子在含潮霉素平板上经多次单孢纯化后,在无选择压下连续继代培养仍能发出稳定而强烈的绿色荧光,用GFP特异性引物PCR扩增转化子基因组DNA获得预期大小片段,表明GFP基因已成功导入芒果畸形病病原菌基因组且稳定遗传;GFP标记菌株生长正常,致病性和野生菌株无明显差别。本论文明确了发生在四川攀枝花和云南华坪两地的芒果畸形病病原菌,并阐明了该病原菌基本的生物学特性,有助于更好地指导该病害的防控;获得GFP标记的病原菌菌株,为进一步深入研究该病原菌侵染方式、扩展过程、传播途径等奠定了基础。

关键词：芒果畸形病病原菌层出镰刀菌生物学特性绿色荧光蛋白基因

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芒果畸形病病原鉴定及致病机理初步研究

芒果畸形病病原鉴定及致病机理初步研究

作者：杨顺锦海南大学

学位级别：硕士

芒果畸形病是芒果的主要病害。早在20世纪六十年代,南非、巴西和马来西亚等国家和地区就报道了该病是由镰刀菌引起的。我国最早在云南和四川等省区发现了芒果畸形病,但对该病病原菌的分离、鉴定以及发病机制等方面的研究至今尚未有报道... 详细信息

芒果畸形病是芒果的主要病害。早在20世纪六十年代,南非、巴西和马来西亚等国家和地区就报道了该病是由镰刀菌引起的。我国最早在云南和四川等省区发现了芒果畸形病,但对该病病原菌的分离、鉴定以及发病机制等方面的研究至今尚未有报道。本研究从四川攀枝花一发病果园内采集芒果畸形病病组织,运用柯赫氏法则证实分离物MG6为该病的致病菌。为明确该菌的分类地位及致病机理,利用常规形态观察和EF-1α延伸因子、β-微管蛋白及ITS序列分析对菌株进行了鉴定,测定了芒果感染畸形病后内源激素的含量变化,并观察和比对了芒果健感病组织的解剖形态,以期从内源激素和组织病理学角度初步探索病原物对寄主的致病机理。 MG6菌株在PSA上气生菌丝无色,不产生色素。在SNA和CLA上,分生孢子梗简单分枝,复瓶梗,瓶状小梗细长,近圆柱形,(9.9～33.1)μmx(1.3～1.5)有时对生形成三叉状;小型分生孢子大多数为无隔,椭圆形或者卵形,大小(3.1～10.2)μm×(1.5～2.2)μm,主要以假头状产生,不产生小型分生孢子链;大型分生孢子镰刀形,3-5分隔,典型3隔,顶端细胞逐渐而均匀的狭细,圆锥形,足孢不明显,大小(18～38)μmx(1.8～2.4)μm,主要以以假头状产在复瓶梗上。在FUSARIUM-ID数据库里,菌株EF-1α延伸因子序列与***同源性达99.68%。结合形态学鉴定结果,将MG6菌株初步鉴定为*** Britz, Wingfield & Marasas。运用酶联免疫吸附法(ELISA)对芒果畸形病畸形芽与正常芽间内源激素的含量进行了测定。结果表明：病、健组织中内源生长素(IAA)、玉米素核苷(ZR)、赤霉素(GA)、脱落酸(ABA)的含量在感病组织中分别为1734.32 ng/ml、987.31 ng/mL、36.25 ng/mL、22951.20 ng/mL,而在健康组织中则分别为571.99 ng/mL、556.40 ng/mL、7.05ng/mL、13151.99 ng/mL。在感病组织中的上述激素的含量分别比在健康组织中高出3.03、1.77、5.14、1.74倍,其中赤霉素(GA)浓度相差最大。采用石蜡切片制片法观察芒果幼茎的解剖形态。结果显示：在病健组织中存在明显差异。畸形组织皮层薄壁细胞有9.13层,而对照只有4-7层。与对照相比,畸形组织中维管束扁长,韧皮纤维数量多,排列紧密,在形成层的区域发现许多色素沉淀,木质部在幼茎中占的面积较大,导管分化少,孔径较小,髓部细胞排列紧密,体积较小,特别在垂直方向上,细胞长度骤减,约为对照的1／3。

关键词：芒果畸形病病原内源激素石蜡切片

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贵州芒果畸形病病原菌的分离与鉴定

西南农业学报 2018年第3期31卷 494-499页

作者：赵玳琳王廿卯婷婷陶刚贵州省农业科学院植物保护研究所贵州贵阳550006

【目的】确定引起贵州兴义芒果畸形病的病原菌种类,为防治该病提供理论依据。【方法】以典型的芒果畸形病株花序为试验材料,采用组织分离法获得纯化菌株,通过离体接种和活体接种方法进行分离菌株的致病性测定、采用形态学结合r DNA-ITS... 详细信息

【目的】确定引起贵州兴义芒果畸形病的病原菌种类,为防治该病提供理论依据。【方法】以典型的芒果畸形病株花序为试验材料,采用组织分离法获得纯化菌株,通过离体接种和活体接种方法进行分离菌株的致病性测定、采用形态学结合r DNA-ITS序列的分子系统学方法鉴定病原菌的种类。【结果】分离真菌菌株MGXJB-1在离体条件下能侵染芒果果实,形成褐色的水渍状圆形病斑,在活体条件下能侵染芒果花序并引起畸形病害,根据培养特征和显微形态学特征结合r DNA-ITS序列的分子系统学鉴定该菌株为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)。【结论】贵州兴义芒果畸形病的病原菌为腐皮镰刀菌(***),是国内首次报道腐皮镰刀菌(***)能够引起芒果畸形病害。

关键词：芒果畸形病腐皮镰刀菌 ITS序列贵州

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海南省芒果畸形病的发现与鉴定

热带作物学报 2015年第7期36卷 1302-1306页

作者：张贺韦运谢漆艳香刘晓妹谢艺贤喻群芳蒲金基中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南海口571101 海南大学环境与植物保护学院海南海口570228

从海南省东方市、三亚市采集芒果畸形病组织,运用柯赫氏法则证实分离物为该病的致病菌。采用Fusarium mangiferae的特异性鉴别引物1-3F/R和AF1对致病菌进行PCR鉴别,结合形态特征将其鉴定为***,这是芒果畸形病在海南省的首次报道。

关键词： Fusarium mangiferae 芒果畸形病海南省

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绿色荧光蛋白基因标记芒果畸形病病原菌研究

广东农业科学 2010年第8期37卷 194-195页

作者：吕延超蒲金基谢艺贤漆艳香陆英张欣张贺占魏中国热带农科院环境与植物保护研究所海南儋州571737 海南大学环境与植物保护学院海南儋州571737

芒果畸形病是世界性的芒果重要病害。采用PEG介导的原生质体转化法用绿色荧光蛋白(GFP)表达载体(pCT74-sGFP)转化芒果畸形病病原菌(Fusarium proliferatum),获得了表达GFP的转化子。转化子经过单孢纯化后连续继代培养仍能发出稳定而强... 详细信息

芒果畸形病是世界性的芒果重要病害。采用PEG介导的原生质体转化法用绿色荧光蛋白(GFP)表达载体(pCT74-sGFP)转化芒果畸形病病原菌(Fusarium proliferatum),获得了表达GFP的转化子。转化子经过单孢纯化后连续继代培养仍能发出稳定而强烈的荧光,通过GFP特异性引物PCR扩增转化子基因组获得预期片段,表明GFP基因已成功转入芒果畸形病病原菌基因组中且稳定遗传。GFP标记菌株生长正常,致病性和野生菌丝无差别。获得GFP标记的转化子,为应用发绿色荧光的芒果畸形病病原菌研究病原菌的侵染方式、扩展过程等奠定了基础。

关键词：芒果畸形病层出镰刀菌绿色荧光蛋白基因转化