检索结果-南通市图书馆

用反向遗传操作技术产生致弱的H5亚型重组流感病毒

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微生物学报 2005年第1期45卷 53-57页

作者：卢建红龙进学邵卫星韦栋平刘秀梵张艳梅扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

选择一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒 (AIV) ,缺失其HA基因裂解序列的 4个碱性氨基酸、使HA裂解模式由高致病性的PQRERRRKKR↓GL突变为低致病性的PQRESR↓GL ,将修饰的HA基因克隆入转录表达载体pHW2 0 0 0、构建质粒pHW5 2 4_HA ,将该毒株... 详细信息

选择一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒 (AIV) ,缺失其HA基因裂解序列的 4个碱性氨基酸、使HA裂解模式由高致病性的PQRERRRKKR↓GL突变为低致病性的PQRESR↓GL ,将修饰的HA基因克隆入转录表达载体pHW2 0 0 0、构建质粒pHW5 2 4_HA ,将该毒株和H9N2亚型毒株的NA全基因分别克隆入pHW2 0 0 0 ,构建质粒pHW5 0 6_NA和pHW2 0 6_NA。将pHW5 2 4_HA与pHW5 0 6_NA或pHW2 0 6_NA组合、均用A WSN 33(H1N1)提供 6个内部基因 ,两个组合的 8个质粒分别共转染COS_1细胞 ,产生了H5N1和H5N2两个亚型的基因重排病毒。通过在鸡胚中的连续传代和适应 ,2个重组病毒血凝价上升到 1∶2 9、表面基因稳定、对 6周龄SPF鸡不表现致病性 ,H5N2重组病毒对鸡胚的毒力低于H5N1病毒。

关键词：禽流感病毒 H5亚型反向遗传操作技术基因重排致弱

用反向遗传技术致弱基因VIId型鹅源新城疫病毒ZJI株

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微生物学报 2007年第2期47卷 197-200页

作者：胡顺林孙庆吴艳涛张艳梅刘秀梵刘玉良王曲直扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与3个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫... 详细信息

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与3个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫病毒粒子。设计两对引物,经overlapPCR方法将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸后,替换pNDV/ZJI上的对应序列,构建了转录载体pNDV/ZJIFM,将pNDV/ZJIFM与3个辅助表达质粒共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了致弱的基因VIId型鹅源新城疫病毒NDV/ZJIFM,获救病毒的鸡胚最小致死剂量平均死亡时间(MDT)大于120h,同时该病毒的脑内接种致病指数(ICPI)为0.16,上述结果表明,获救病毒的毒力已被致弱,是一个较为理想的疫苗候选株。

关键词：新城疫病毒拯救致弱基因Ⅶd型

PRRSV CH-1a株致弱过程中不同代次病毒结构蛋白基因遗传变异分析

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中国预防兽医学报 2009年第5期31卷 346-351,387页

作者：刘永刚蔡雪辉石文达马平王淑杰李成君武佳斌徐敏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株致弱过程中不同代次病毒(S39、S70、S148、S171)及国内分离株(GD3、JS1、JS5)的结构蛋白基因(ORF2～ORF7)进行了克隆和测序,并与国内外毒株序列进行比较和系统发育进化分析。结果表明,PRRSV CH-1... 详细信息

对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株致弱过程中不同代次病毒(S39、S70、S148、S171)及国内分离株(GD3、JS1、JS5)的结构蛋白基因(ORF2～ORF7)进行了克隆和测序,并与国内外毒株序列进行比较和系统发育进化分析。结果表明,PRRSV CH-1a株各传代毒株和国内分离毒株各个结构蛋白序列均存在不同程度的变异,与GenBank上的登录序列进行了比对,发现GP2～GP5同源性在83.1%～100%,M蛋白同源性在95.4%～100%,N蛋白同源性在87%～100%,其中以GP2、GP3和GP5发生突变几率较大;另外,发现PRRSV CH-1a不同代次病毒GP5的H38突变为Q38(S70),L146突变为Q146(S148),而2006年分离的PRRSV变异毒株由F39突变为I39,而且分离毒株的毒力明显强于经典毒株。进化分析表明,GD3毒株与2006年～2007年分离的毒株以及PRRSV CH-1a株的亲缘关系均较近,处于二者的中间位置。

关键词： PRRSV CH-1a株致弱编码结构蛋白遗传变异

I型犬腺病毒黑龙江株(CAV-H)的分离、鉴定及致弱的研究

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中国预防兽医学报 2010年第12期32卷 956-959页

作者：刘大飞王牟平曲连东高艳刘立奎柴洪亮刘春国杨天阔华育平张洪英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为研究犬腺病毒(CAV)致弱疫苗的免疫原性,本研究将病犬的组织样品接种于MDCK细胞内,进行病毒分离及鉴定。鉴定结果显示,分离的病毒在MDCK细胞内产生明显的细胞病变(CPE),电镜下可见典型的腺病毒粒子;回归动物试验显示,该分离株可导致犬... 详细信息

为研究犬腺病毒(CAV)致弱疫苗的免疫原性,本研究将病犬的组织样品接种于MDCK细胞内,进行病毒分离及鉴定。鉴定结果显示,分离的病毒在MDCK细胞内产生明显的细胞病变(CPE),电镜下可见典型的腺病毒粒子;回归动物试验显示,该分离株可导致犬出现明显的CAV感染症状;PCR鉴定结果表明分离的病毒为CAV,命名为CAV-H株;将CAV-H株接种MDCK细胞连续传代至110代,在传代过程中,病毒滴度由初始105.0 TCID50/0.1 mL上升至107.0 TCID50/0.1 mL,而CAV对犬的致病力逐渐降低;免疫效力试验结果表明,CAV-H可对同源强毒攻击的犬提供完全的免疫保护作用,可作为理想的疫苗候选毒株。

关键词：犬细小病毒分离与鉴定致弱

猪霍乱沙门菌疫苗株C500毒力致弱的主要原因是rpoS基因的缺失（英文）

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中国人兽共患病学报 2015年第10期31卷 908-913页

作者：徐黎娟李求春刘杰胡亚辰陶明新谢晓蕾耿士忠焦新安扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

目的猪霍乱沙门菌疫苗株C500在我国应用于仔猪副伤寒的防控已长达50多年,然而由于C500是通过化学诱变法获得,因此其遗传背景仍不清楚。本文从基因组水平揭示C500疫苗株毒力致弱的主要原因。方法利用MOH-SSH方法比较了强毒株C78-2与C500... 详细信息

目的猪霍乱沙门菌疫苗株C500在我国应用于仔猪副伤寒的防控已长达50多年,然而由于C500是通过化学诱变法获得,因此其遗传背景仍不清楚。本文从基因组水平揭示C500疫苗株毒力致弱的主要原因。方法利用MOH-SSH方法比较了强毒株C78-2与C500之间的基因组差异,结合荧光定量PCR与动物实验检测缺失基因对疫苗株毒力的影响。结果发现C500缺失了6个基因(asr、ydgF、ydgD、ydgE、rpoS和ptsG)。其中,作为调控基因的rpoS在沙门菌致病过程中发挥着重要的作用。荧光定量PCR检测发现rpoS调控的基因在C500中的表达出现不同程度的下调。此外,动物实验结果显示rpoS缺失的C78-2突变株C78-2ΔrpoS毒力下降了100 000倍。结论 rpoS基因的缺失是导致C500致弱的主要因素。

关键词：猪霍乱沙门菌疫苗致弱镜像选择(MOS) 抑制差减杂交(SSH)

传染性法氏囊病超强毒Gx株VP3基因在病毒致弱过程中的变异研究

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中国预防兽医学报 2006年第2期28卷 128-132页

作者：张厚双王笑梅高宏雷付朝阳包晓玮彭志伟鞠玉琳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院动物医学系吉林龙井133400

利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDVGx株进行培育,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱,对其结构蛋白VP3基因核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析,从而揭示vvIBDVGx从超强毒力向弱毒力转化过程中基因的序列变化规律。对不同代... 详细信息

利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDVGx株进行培育,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱,对其结构蛋白VP3基因核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析,从而揭示vvIBDVGx从超强毒力向弱毒力转化过程中基因的序列变化规律。对不同代次细胞毒序列分析的结果表明,细胞毒在第8代以前,VP3基因序列没有改变,与标准超强毒HK46株氨基酸同源性达99%以上;细胞毒第9代核苷酸和氨基酸序列发生了改变;10代毒VP3基因与标准弱毒P2株氨基酸序列同源性达100%;细胞适应毒传至20代,其VP3基因序列不再改变。从而说明,vvIBDVGx株在致弱过程中,VP3基因也随之改变。

关键词：传染性法氏囊病超强毒VP3基因致弱变异

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QX基因型鸡传染性支气管炎病毒致弱研究

中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 177-180页

作者：霍亚飞许传田崔言顺杨少华黄庆华张琳黄艳艳李建亮胡北侠张秀美山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室山东济南250100 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

为了解QX基因型鸡传染性支气管炎病毒(QX-IBV)致弱的分子机制,本研究对SDZB0808分离株在鸡胚中连续传100代的子代病毒P100进行了致病性试验和全基因组测序分析。致病性试验结果显示P100对3日龄SPF鸡无明显致病性,而亲本株SDZB0808对3日... 详细信息

为了解QX基因型鸡传染性支气管炎病毒(QX-IBV)致弱的分子机制,本研究对SDZB0808分离株在鸡胚中连续传100代的子代病毒P100进行了致病性试验和全基因组测序分析。致病性试验结果显示P100对3日龄SPF鸡无明显致病性,而亲本株SDZB0808对3日龄SPF鸡致死率为40%。序列比对结果显示,以亲本株SDZB0808为参考株,P100基因组发生3个有义突变,导致ORF 1a编码的蛋白(I3 047L)、S蛋白(N76Y)、E蛋白(L29I)发生了氨基酸替换;此外,P100在第3 244 nt^3 273 nt位点连续性缺失30个核苷酸,导致ORF 1a编码的蛋白在906~915位缺失10个氨基酸。本研究结果表明QX-IBV分离株SDZB0808毒力致弱可能与其基因组序列突变和缺失有关。

关键词：传染性支气管炎病毒缺失致弱

传染性法氏囊病超强毒Gx株VP5基因在病毒致弱过程中的变异研究

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中国预防兽医学报 2005年第1期27卷 25-28页

作者：张厚双王笑梅高宏雷付朝阳曾祥伟鞠玉琳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所延边大学农学院动物医学系吉林龙井133400 延边大学农学院动物医学系

利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒 (vvIBDV)Gx株进行培育 ,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱 ,对其非结构蛋白VP5基因核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析 ,从而揭示vvIBDVGx从超强毒力向弱毒力转化过程中基因的序列变化规律。... 详细信息

利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒 (vvIBDV)Gx株进行培育 ,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱 ,对其非结构蛋白VP5基因核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析 ,从而揭示vvIBDVGx从超强毒力向弱毒力转化过程中基因的序列变化规律。对不同代次细胞毒序列分析的结果表明 ,细胞毒在第 8代以前 ,VP5基因序列没有改变 ,与欧洲标准超强毒氨基酸同源性达 98%以上 ;细胞毒第 9代核苷酸和氨基酸序列发生了改变 ;10代毒VP5基因与欧洲标准弱毒Cu_1氨基酸序列同源性达 99% ;细胞适应毒传至 2 0代 ,其VP5基因序列不再改变。从而说明。

关键词：鸡传染性法氏囊病超强毒VP5基因致弱变异

犬细小病毒黑龙江株(CPV-YN)的分离、鉴定及致弱的研究

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中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 875-878页

作者：刘大飞王牟平司微曲连东高艳刘立奎柴洪亮林欢刘春国刘大程华育平张洪英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 莱阳市城厢兽医站山东莱阳265200

为研制犬细小病毒(CPV)致弱疫苗,本研究通过将犬的组织样品接种CRFK细胞进行病毒分离,并对分离毒株进行了一系列鉴定。鉴定结果显示,分离的病毒在CRFK细胞上可产生明显的细胞病变(CPE),并且电镜下可以观察到典型的细小病毒粒子;HA效价... 详细信息

为研制犬细小病毒(CPV)致弱疫苗,本研究通过将犬的组织样品接种CRFK细胞进行病毒分离,并对分离毒株进行了一系列鉴定。鉴定结果显示,分离的病毒在CRFK细胞上可产生明显的细胞病变(CPE),并且电镜下可以观察到典型的细小病毒粒子;HA效价可达到1∶256。回归动物试验显示该分离株可导致犬出现明显的CPV感染症状,PCR鉴定也进一步确定所分离的病毒为CPV(命名为CPV-YN株)。将CPV-YN株接种CRFK细胞连续传代至110代,在传代过程中,病毒的滴度逐渐提高,由初始的105.5 TCID50/0.1 mL逐渐增加到107.1 TCID50/0.1 mL。同时,CPV对犬的致病力逐渐降低。免疫效力试验结果表明,CPV-YNR可以对用同源强毒攻击的犬提供免疫保护作用,可作为理想的疫苗候选病毒株。

关键词：犬细小病毒分离与鉴定致弱