用反向遗传操作技术产生致弱的H5亚型重组流感病毒

作     者：卢建红 龙进学 邵卫星 韦栋平 刘秀梵 张艳梅 LU Jian-hong LONG Jin-xue SHAO Wei-xing WEI Dong-ping LIU Xiu-fan * (Animal Infectious Disease Laboratory, School of Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China)

作者机构：扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2005年第45卷第1期

页      面：53-57页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 1002[医学-临床医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：江苏省"十五"科技攻关项目 (BE2 0 0 2 0 16) 农业部农办牧 2 0 0 183资助项目~~ 

主　　题：禽流感病毒 H5亚型 反向遗传操作技术 基因重排 致弱 

摘      要：选择一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒 (AIV) ,缺失其HA基因裂解序列的 4个碱性氨基酸、使HA裂解模式由高致病性的PQRERRRKKR↓GL突变为低致病性的PQRESR↓GL ,将修饰的HA基因克隆入转录 表达载体pHW2 0 0 0、构建质粒pHW5 2 4_HA ,将该毒株和H9N2亚型毒株的NA全基因分别克隆入pHW2 0 0 0 ,构建质粒pHW5 0 6_NA和pHW2 0 6_NA。将pHW5 2 4_HA与pHW5 0 6_NA或pHW2 0 6_NA组合、均用A WSN 33(H1N1)提供 6个内部基因 ,两个组合的 8个质粒分别共转染COS_1细胞 ,产生了H5N1和H5N2两个亚型的基因重排病毒。通过在鸡胚中的连续传代和适应 ,2个重组病毒血凝价上升到 1∶2 9、表面基因稳定、对 6周龄SPF鸡不表现致病性 ,H5N2重组病毒对鸡胚的毒力低于H5N1病毒。