检索结果-南通市图书馆

膜融合微球及界面的构建及其对细胞外囊泡中microRNA超灵敏检测应用研究

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

膜融合微球及界面的构建及其对细胞外囊泡中microRNA超灵敏检测应...

作者：冯健洲扬州大学

学位级别：硕士

细胞外囊泡是细胞释放的一种小型囊泡,携带着许多的生物标志物。其中,miRNA对癌症早期诊断和治疗监测具有重要作用。然而,直接裂解细胞外囊泡提取miRNA存在降解和污染的问题。为解决这一问题,膜融合技术被广泛应用。该技术通过将自制的... 详细信息

细胞外囊泡是细胞释放的一种小型囊泡,携带着许多的生物标志物。其中,miRNA对癌症早期诊断和治疗监测具有重要作用。然而,直接裂解细胞外囊泡提取miRNA存在降解和污染的问题。为解决这一问题,膜融合技术被广泛应用。该技术通过将自制的脂质体囊泡与细胞外囊泡融合,实现miRNA的检测。膜融合方法简单、快速、高效,避免了 miRNA直接暴露于体液中,提高了检测准确性。在这种方法中,脂质体囊泡作为载体,并携带信号报告分子,如荧光染料或电化学标记物。在与细胞外囊泡发生融合后,发出信号,用于miRNA的检测。膜融合技术具有广泛的应用前景,可用于癌症早期诊断、预测疾病进展和指导治疗方案等。它为非侵入性的细胞外囊泡miRNA检测提供了一种可行的方法,为临床诊断提供了有力支持。然而,目前的利用膜融合的方法仍然存在以下弊端:1、由于缺少特异性靶向分子,体液中存在的大量正常细胞分泌的细胞外囊泡会增加信号的背景噪音,降低的检测的准确率。2、无法同时对多种miRNA进行检测,导致对癌症的检测准确率下降。针对上述问题,本文设计并组装一种膜融合微球。一方面,通过在微球表面修饰靶向肿瘤细胞的识别分子,实现对肿瘤细胞来源的细胞外囊泡中的miRNA的检测,降低了信号的背景。另一方面,通过尺寸和荧光双编码微球,实现对多种miRNA同时检测,大大提高诊断的准确率。具体工作如下:(1)采用自组装的方式将分子信标负载到介孔硅的介孔内,并在表面形成一层支持的脂质双层。利用疏水作用,在脂质双层上修饰针对肿瘤来源的细胞外囊泡的识别分子,实现了对肿瘤来源的细胞外囊泡的靶向捕获,在捕获肿瘤来源的细胞外囊泡,细胞外囊泡上的磷脂双分子层和微球上的磷脂双层发生膜融合,miRNA和分子信标杂交发出信号。以A375细胞系的细胞外囊泡作为模型,此融合微球的有优异的miRNA的检测性能,检测限达到14fM,同时在对临床样本的检测上,能够成功区分胰腺癌患者和健康人。(2)通过将两种荧光分子按照不同比例修饰到不同尺寸的微球上,制备了一个荧光和尺寸双编码的微球库。将针对不同miRNA的分子信标分别负载到微球后,结合第一章的工作,修饰支持的脂质双层和适配体。再和检测细胞外囊泡中的miRNA后,通过流式细胞仪进行解码和信号读出,实现对6种miRNA 同时检测。随后应用到临床样本,我们选取了 10个健康人,6个胰腺炎患者和20个胰腺癌患者的血浆,利用此方法检测,对胰腺癌患者的诊断准确率达到98%,展现较好的临床应用潜力。(3)我们综合前两章的研究成果,将融合微球的经验与鱼骨状微流控芯片相结合,构建了一种融合芯片。相较于超速离心等传统分离方法,此融合芯片显著提高了对肿瘤来源细胞外囊泡的捕获效率,达到了 77%的高分离效率,同时,其对非肿瘤来源的细胞外囊泡只有17%的非特异性捕获。同时,我们还成功验证了该芯片可用于检测细胞外囊泡中的miRNA-21。此外,该融合芯片对样本需求更小,显示出其在癌症早期诊断方面的潜力。

关键词：肿瘤诊断液体活检细胞外囊泡小分子核糖核酸膜融合

Syntaxin17在自噬膜融合中的作用及调控机制的研究进展

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2022年第4期52卷 531-536页

作者：赵玉梦曲华艺卞宇生刘宗平邹辉扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

自噬是一种细胞自我降解和循环利用胞内组分的过程,对细胞应对外界环境变化、维持自身稳态至关重要。目前有关自噬的作用与机制已经有了广泛的研究,SNARE蛋白(SNAREs)参与自噬的整个过程,是自噬过程中物质运输及膜融合的关键蛋白。Synta... 详细信息

自噬是一种细胞自我降解和循环利用胞内组分的过程,对细胞应对外界环境变化、维持自身稳态至关重要。目前有关自噬的作用与机制已经有了广泛的研究,SNARE蛋白(SNAREs)参与自噬的整个过程,是自噬过程中物质运输及膜融合的关键蛋白。Syntaxin17(STX17)是SNARE蛋白中重要的蛋白之一,也是目前研究较为广泛的一个蛋白。本文将近年来STX17对自噬调控的相关进展进行综述,为后续研究自噬的机制提供参考。

关键词：自噬 SNARE蛋白 STX17 膜融合

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猪繁殖与呼吸综合征病毒膜融合机制研究进展

动物医学进展 2021年第2期42卷 88-91页

作者：李睿乔松林张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的高度接触性传染疫病,对全球尤其是我国养猪业危害巨大。然而,目前对PRRS防控并未取得实质性成效,究其原因是PRRSV具有独特而且复杂的感染机制。作为一种具有囊膜的病毒... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的高度接触性传染疫病,对全球尤其是我国养猪业危害巨大。然而,目前对PRRS防控并未取得实质性成效,究其原因是PRRSV具有独特而且复杂的感染机制。作为一种具有囊膜的病毒,PRRSV感染宿主细胞必须经病毒囊膜与宿主靶细胞膜的融合(membrane fusion),这是由病毒膜融合蛋白(fusion protein)介导,宿主细胞受体、蛋白酶等诸多因素共同参与的复杂过程。干扰PRRSV膜融合将会有效阻止病毒的感染与传播。论文通过总结PRRSV膜融合机制最新研究进展,旨在为防控PRRS提供新的理论依据,同时为PRRSV新型药物开发、新型疫苗研制提供参考。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染膜融合膜融合蛋白蛋白酶

低pH值诱导的直接膜融合介导BmNPV入侵研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

低pH值诱导的直接膜融合介导BmNPV入侵研究

作者：李陈亚江苏科技大学

学位级别：硕士

家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nnucleopolyhedrovirus,BmNPV）引发的家蚕脓病是蚕业生产中最严重的的病害。BmNPV属于Group I杆状病毒,已有研究表明BmNPV的出芽型病毒粒子以巨胞饮内吞方式入侵宿主细胞。Ac MNPV（Autographa califo... 详细信息

家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nnucleopolyhedrovirus,BmNPV）引发的家蚕脓病是蚕业生产中最严重的的病害。BmNPV属于Group I杆状病毒,已有研究表明BmNPV的出芽型病毒粒子以巨胞饮内吞方式入侵宿主细胞。Ac MNPV（Autographa californica nucleopolyhedrovirus）和BmNPV同为Group I杆状病毒代表性病毒,也是研究比较清楚的两种病毒,Ac MNPV以Clathrin介导的内吞方式入侵宿主细胞,低pH值诱导的直接膜融合方式也能促使Ac MNPV有效感染宿主细胞,而直接膜融合方式能否BmNPV入侵宿主细胞尚不清楚。第一章:文献综述。首先介绍了杆状病毒的分类、病毒感染循环过程及病毒入侵方式;其次,综述了包膜病毒入侵过程,膜融合发生过程的分子机制;最后,比较分析了国内外在Ac MNPV以及BmNPV的一些研究进展及入侵机制方面的研究成果。第二章:低pH值诱导的直接膜融合方式介导BmNPV入侵宿主细胞研究。首先确定BmNPV GP64适合的pH。在Bm N细胞中瞬时表达BmNPV膜融合蛋白GP64,而后利用不同pH的条件诱导其发生膜融合,通过统计膜融合指数确定GP64的最佳融合pH。结果表明,在pH值5.0时细胞膜相互融合,形成较大合胞体,pH值为4.5时合胞体数量最多;统计结果显示,融合率随pH值降低而上升。推到得知BmNPV GP64介导发生膜融合条件为pH值小于5.0。接下来,利用氯化铵处理Bm N细胞,再用BmNPV进行感染,使用pH 4.5条件诱导其发生膜融合后正常培养,细胞流式结果分析低pH条件下病毒感染性变化;结果显示低pH值诱导会导致病毒感染率降低;最后,利用e GFP融合VP39的标记病毒,示踪了病毒以直接膜融合方式入侵后核衣壳的转运,结果表明病毒粒子虽然进入细胞质内,但没有被运送到细胞核内,导致了病毒的感染失败。第三章:直接膜融合介导BmNPV感染细胞的转录组分析。为了探索病毒核衣壳转运失败的原因,研究以BmNPV正常感染细胞样品为对照,对低pH诱导BmNPV直接膜融合的方式入侵后0/15/60分钟的样品进行高通量测序,以寻找参与该过程的宿主因子。通过对差异表达基因的GO、KEGG分析,共获得了95个差异基因,其中参与核糖体通路中有22个差异基因,内质网蛋白加工途径中有6个差异基因,剪切体通路中4个,吞噬体通路中有3个。其中热激蛋白Hsp90、钙网蛋白CRT、重链结合蛋白Bi P是差异表达的热点蛋白。第四章:差异蛋白的分析与验证。为了确定差异表达蛋白在BmNPV入侵过程中的作用,利用荧光定量PCR验证了Hsp90、CRT、Bi P的表达,并利用RNAi技术敲低Hsp90、CRT及Bi P的表达,测定病毒的感染效率。q PCR结果验证了细胞免疫相关基因Hsp90、蛋白分泌折叠相关基因CRT、Bi P的表达,所得结果与转录组测序结果相吻合;RNAi有效降低细胞内CRT、Bi P及Hsp90的表达,进而导致BmNPV感染效率降低。本研究表明低pH诱导的直接膜融合会导致BmNPV感染失败,而这是由于核衣壳不能被转运到细胞核内引起的,高通量测序分析确定的差异表达的宿主细胞因子参与BmNPV入侵,为深入了解BmNPV入侵机制奠定基础。

关键词：杆状病毒 BmNPV 低pH值膜融合细胞因子转录组分析入侵机制

短链阳离子多肽引发pH敏感的非泄漏膜融合（英文）

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国科学技术大学学报 2018年第7期48卷 519-526,593页

作者：汪凤宇惠丽伟徐路路高峰赵智阳丽华中国科学技术大学材料科学与工程系安徽合肥230026

介绍了两种短链多肽,它们可以引发pH敏感的、不泄露的、完全的膜融合.利用这两种特定的融合多肽,观察到不同pH范围内的膜融合现象发生.

关键词：膜融合多肽囊泡 pH敏感

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

呼吸道合胞病毒膜融合机制的研究进展

病毒学报 2015年第5期31卷 565-572页

作者：刘晓瑜魏永伟绍兴文理学院医学院绍兴312000 宁波大学海洋学院宁波315211

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种在世界范围内引起儿童急性下呼吸道感染的最为常见的重要病原。RSV介导的膜融合不需要吸附蛋白的参与,融合蛋白可单独完成膜融合过程,这与其它副粘病毒显著不同,其它主要副粘病... 详细信息

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种在世界范围内引起儿童急性下呼吸道感染的最为常见的重要病原。RSV介导的膜融合不需要吸附蛋白的参与,融合蛋白可单独完成膜融合过程,这与其它副粘病毒显著不同,其它主要副粘病毒介导的膜融合需要融合蛋白和吸附蛋白的共同参与。本综述就RSV膜融合相关研究的最新高水平论文加以综述,对目前流行的几种RSV膜融合理论解释模型加以比较分析,同时根据自己的研究心得对当前相关膜融合研究的热点和争议加以讨论,以期对我国在这方面的研究有所借鉴和参考。

关键词：副粘病毒 RSV 膜融合机制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于膜融合的囊泡内凝聚体制备

基于膜融合的囊泡内凝聚体制备

作者：闫琳哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

凝聚体是细胞中存在的无膜细胞器,也被用于模拟原始细胞。膜融合是细胞中普遍存在的过程,具有重要的生理功能。通过融合肽、电击穿以及静电相互作用均可实现磷脂囊泡的膜融合。本论文利用不同电性的囊泡通过静电相互作用使其发生膜融合... 详细信息

凝聚体是细胞中存在的无膜细胞器,也被用于模拟原始细胞。膜融合是细胞中普遍存在的过程,具有重要的生理功能。通过融合肽、电击穿以及静电相互作用均可实现磷脂囊泡的膜融合。本论文利用不同电性的囊泡通过静电相互作用使其发生膜融合,融合后两个腔室变成一个,导致各室的物质发生混合,在融合后的囊泡内部生成凝聚体。通过调节聚（二烯丙基二甲基氯化铵）（PDDA）与三磷酸腺苷（ATP）的浓度和比例,制备出不同尺寸的凝聚体。由ATP:PDDA=1:4（PDDA=80 m M）制备的凝聚体,尺寸较大便于观察可作为化学反应的隔室。由ATP:PDDA=1:16或1:2（PDDA=80m M）制备的凝聚体尺寸较小,可在囊泡内生成。凝聚体与带正电荷的囊泡发生静电相互作用,使囊泡在凝聚体内部聚集。进而在凝聚体内部实现了酶的级联反应:葡萄糖在葡萄糖氧化酶（GOx）的作用下生成过氧化氢,过氧化氢在辣根过氧化物酶（HRP）的作用下将Amplex Red氧化生成具有红色荧光的试卤灵分子。利用1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-胆碱磷酸（DLPC）/二油酰基磷脂酰丝氨酸（DOPS）制备出巨型磷脂囊泡（Giant unilamellar vesicles,GUVs）。利用1,2-二油酰基磷脂酰胆（DOPC）/（2,3-二油酰基-丙基）-三甲胺（DOTAP）（1:X mg/mg）制备出小尺寸单层磷脂囊泡（Small unilaminar vesicles,SUVs）,其中DOTAP是带正电的磷脂。DOTAP的掺杂质量比例（DOTAP:DOPC）分别为0.1:1,0.15:1,0.35:1,1:1。发现在以上条件下,SUVs均可与GUVs发生膜融合。接下来拟在GUVs中载入ATP,SUVs中载入PDDA,通过囊泡融合在最终囊泡中制备凝聚体。由于新冠疫情后续无法返校完成相关实验。

关键词：静电相互作用凝聚体磷脂囊泡膜融合人工细胞器

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

短链阳离子多肽引发pH敏感的非泄漏膜融合

短链阳离子多肽引发pH敏感的非泄漏膜融合

作者：汪凤宇中国科学技术大学

学位级别：硕士

膜融合是所有活细胞生命过程中的重要进程。包膜病毒通过与细胞膜的融合完成入侵宿主细胞的第一步,受精作用首先需要精子和卵子的膜融合,还有细胞内部的膜融合如胞吐、蛋白质转运和线粒体重塑等。因而,膜融合的研究尤其是其分子机理的... 详细信息

膜融合是所有活细胞生命过程中的重要进程。包膜病毒通过与细胞膜的融合完成入侵宿主细胞的第一步,受精作用首先需要精子和卵子的膜融合,还有细胞内部的膜融合如胞吐、蛋白质转运和线粒体重塑等。因而,膜融合的研究尤其是其分子机理的研究是许多学科关注的重要课题。为了实现膜融合,要先拉近原本独立的两个膜,然后在膜上产生局部的扰动和变形,最后融合成单个膜,整个过程需要克服巨大的能量势垒。在生物系统里,膜融合蛋白负责克服这些能量势垒。许多对膜融合蛋白的研究发现,膜融合时膜蛋白会发生构型转变,伴随着融合蛋白的重排会暴露出一段融合多肽,融合多肽会靠近靶向的磷脂双分子层引发融合反应。融合多肽是一个短的,相对疏水的多肽,它可以实现和融合蛋白一样的膜融合功能。毋庸置疑,膜融合对细胞生命体有着至关重要的影响。但是目前人们对于膜融合在分子层面上的机理知之甚少。由于活细胞的复杂性,对于观察到的情况难以进行详尽的解释。因此,为了深入了解融合过程,需要开发组分简单的人工膜融合体系。在这种情况下,简单的融合多肽相比于复杂的融合蛋白显然是一个更好的选择。在这之中,有许多工作是借助源自天然融合蛋白的融合多肽来研究膜融合,如流感病毒的融合多肽。也有人工开发的合成融合多肽,如被广泛研究的GALA是由谷氨酸-丙氨酸-亮氨酸-丙氨酸的重复单元组成的结构。但是,相比于膜融合蛋白,大部分融合多肽都有一个缺点,即它们在诱导囊泡融合时,都会伴随着囊泡内物质的外泄。尤其是,目前膜融合体系在药物输送和基因转染等方面的应用发展也受到很多关注,pH敏感的GALA多肽诱导的泄漏融合可以帮助破坏细胞膜,甚至杀死细胞,但是并非所有的治疗都需要破坏细胞膜,比如基因运输。众所周知,破坏细胞膜的完整性会导致细胞坏死,释放出细胞内物质从而引起炎症。所以不管是为了探究融合蛋白的融合机制,还是寻找药物输送需要的非泄漏融合多肽,我们都迫切需要开发非泄漏的融合多肽。在本课题的研究工作中,我们介绍了两种融合多肽ORB-KK和ORB-KKopen,目前尚未见文献报道。它们源自臭蛙皮肤分泌的一种抗菌肽ORB的衍生多肽。其中ORB-KK是一种发卡状多肽,通过一个分子内二硫键固定,序列为LKGCWTKSIPPKPCFK。ORB-KKopen是基于ORB-KK的开环形式。它们可以在不同pH下诱导大的单层脂质体囊泡发生pH选择性的不泄露的完全膜融合。

关键词：膜融合融合多肽 pH选择性不泄露

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

疱疹病毒膜融合的分子机制

生物化学与生物物理进展 2010年第6期37卷 583-588页

作者：王晓佳中国农业大学动物医学院农业部人畜共患病重点开放实验室北京100193

囊膜病毒与宿主细胞的膜融合是病毒入侵宿主细胞的重要过程,这一过程涉及到病毒囊膜表面糖蛋白与宿主细胞表面受体之间的相互作用和构象变化.疱疹病毒有多个糖蛋白及不同类型的细胞作用受体,相应的受体-糖蛋白复合体构成方式也有多种,... 详细信息

囊膜病毒与宿主细胞的膜融合是病毒入侵宿主细胞的重要过程,这一过程涉及到病毒囊膜表面糖蛋白与宿主细胞表面受体之间的相互作用和构象变化.疱疹病毒有多个糖蛋白及不同类型的细胞作用受体,相应的受体-糖蛋白复合体构成方式也有多种,其引致的膜融合机制被认为是目前病毒融合机制研究中最复杂的,近年来被广泛研究并取得突破性进展.从病毒糖蛋白与相应受体的结构与功能、受体-糖蛋白复合体的形成与入侵途径,以及膜融合模式几个方面,全面综述疱疹病毒膜融合的分子机制,并展望了未来研究趋势.

关键词：疱疹病毒受体-糖蛋白复合体结构与功能膜融合