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牛优势卵泡膜细胞黄体化相关基因的筛选

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2022年第3期50卷 1-9页

作者：孟金柱伍春亚潘春威安清明吴震洋赵园园铜仁学院贵州省梵净山地区生物多样性保护与利用重点实验室贵州铜仁554300 湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

【目的】探究牛卵巢小黄体细胞(SLCs)和膜细胞(TCs)中的差异表达基因,进而筛选与TCs黄体化密切相关的基因,为深入研究SLCs、TCs特异性及TCs向SLCs分化的机制提供参考。【方法】利用R软件limma包中的DESeq2,筛选GEO芯片数据库GSE83524数... 详细信息

【目的】探究牛卵巢小黄体细胞(SLCs)和膜细胞(TCs)中的差异表达基因,进而筛选与TCs黄体化密切相关的基因,为深入研究SLCs、TCs特异性及TCs向SLCs分化的机制提供参考。【方法】利用R软件limma包中的DESeq2,筛选GEO芯片数据库GSE83524数据集TCs和SLCs中的差异表达基因,再用goseq软件对筛选出的差异表达基因进行GO功能富集分析,用kobas软件进行KEGG信号通路分析,使用String结合Cytoscape软件进行PPI网络互作分析。采集思南黄牛颗粒细胞(GCs)和TCs,以RPLP0作为内参基因,用荧光定量PCR法对筛选出的与TCs增殖及黄体化相关的基因进行验证。【结果】共筛选获得237个差异表达基因,其中表达上调的基因115个,表达下调的基因122个。GO功能分析结果显示,参与生物学过程的有147个基因,占差异表达基因总数的53.6%,分别富集于30个组;参与细胞组分的有125个基因,占差异表达基因总数的21.4%,分别富集于12个组;参与分子功能的有98个基因,占差异表达基因总数的25.0%,分别富集于14个组。KEGG分析共发现17条通路,其中可能与卵泡内膜细胞黄体化相关的通路为FSHR、PLA2G4A、CYP19A1、CYP17A1等4个基因参与的卵巢类固醇生成通路。经过PPI网络互作分析,筛选出了前10位的hub基因。荧光定量PCR分析结果显示,FSHR、PLA2G4A、CYP19A1、CYP17A1、BUB1B和KIF20A在SLCs和TCs中的转录水平与GEO芯片数据结果一致,表现为FSHR、CYP19A1和CYP17A1在TCs中的表达量极显著高于其在SLCs中的表达量(P<0.01),PLA2G4A、BUB1B和KIF20A在TCs中的表达量亦显著高于其在SLCs中的表达量(P<0.05)。【结论】差异表达基因FSHR、PLA2G4A、CYP19A1、CYP17A1、BUB1B和KIF20A在牛优势卵泡TCs增殖分化形成黄体的过程中发挥关键作用。

关键词：牛差异表达基因膜细胞小黄体细胞黄体化

不同浓度葡萄糖对蛋鸡卵泡膜细胞增殖、雌二醇水平及类固醇合成相关基因表达的影响

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中国家禽 2022年第10期44卷 56-61页

作者：季浩然卢建张欣杨海明王志跃扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125

为研究不同浓度葡萄糖对蛋鸡卵泡膜细胞增殖、雌二醇水平及类固醇合成相关基因表达的影响,试验采集35周龄产蛋高峰期苏禽绿壳蛋鸡的小黄卵泡,通过分离、消化和过滤等得到原代卵泡膜细胞,待细胞长至培养皿70%~80%时,将含10%胎牛血清(FBS... 详细信息

为研究不同浓度葡萄糖对蛋鸡卵泡膜细胞增殖、雌二醇水平及类固醇合成相关基因表达的影响,试验采集35周龄产蛋高峰期苏禽绿壳蛋鸡的小黄卵泡,通过分离、消化和过滤等得到原代卵泡膜细胞,待细胞长至培养皿70%~80%时,将含10%胎牛血清(FBS)培养基更换为含0.5%FBS培养基培养24 h后,随机分成6组,每组3个重复,对照组不添加葡萄糖,试验组分别添加0.5、1.5、3.0、4.5、9.0 mg/mL葡萄糖,继续培养48 h。结果显示:3.0 mg/mL葡萄糖处理组细胞活力显著高于对照组、0.5、4.5和9.0 mg/mL处理组(P细胞类固醇合成急性调节蛋白(StAR)和细胞色素P450单加氧酶11A1(CYP11A1)的mRNA相对表达量显著低于对照组和9.0 mg/mL葡萄糖处理组(P细胞StAR mRNA相对表达量显著低于对照组(P膜细胞效果最优,可提高细胞活力,增加培养液中雌二醇含量。

关键词：葡萄糖浓度蛋鸡膜细胞增殖雌二醇

基于自噬与凋亡机制研究左归丸对化疗损伤颗粒细胞及膜细胞的影响

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生物化学与生物物理进展 2022年第9期49卷 1741-1750页

作者：刘涛孙晓峰曾贵荣黄欣怡曾文卓龚力民阳松威刘梦琳湖南中医药大学医学院长沙410208 湖南中医药大学医学院组织学与胚胎学教研室长沙410208 湖南省药物安全评价研究中心&新药药效与安全性评价湖南省重点实验室长沙410331 中南大学湘雅三医院心内科长沙410006 湖南中医药大学药学院长沙410208

目的探讨左归丸含药血清对化疗损伤性颗粒细胞和膜细胞的影响及作用机制。方法制备左归丸含药血清,培养大鼠卵巢颗粒细胞和膜细胞,使用磷酰胺氮芥造模分组后给药。CCK-8法测定颗粒细胞和膜细胞存活率,实时荧光定量PCR法(RT-PCR)及蛋白... 详细信息

目的探讨左归丸含药血清对化疗损伤性颗粒细胞和膜细胞的影响及作用机制。方法制备左归丸含药血清,培养大鼠卵巢颗粒细胞和膜细胞,使用磷酰胺氮芥造模分组后给药。CCK-8法测定颗粒细胞和膜细胞存活率,实时荧光定量PCR法(RT-PCR)及蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测卵巢自噬启动因子Beclin-1、微管结合蛋白轻链3(LC3B)、自噬受体蛋白p62、凋亡蛋白Bax、Caspase3在转录水平和翻译水平上的表达。结果10%左归丸含药血清对于细胞存活的挽救率最高。Beclin-1、LC3B、Bax、Caspase3在磷酰胺氮芥作用的颗粒细胞和膜细胞中,相对于空白对照组有高表达(P细胞实验组中,激活或抑制自噬途径后,自噬相关蛋白的表达在发生相应改变的同时,凋亡相关蛋白的表达也会发生相应改变。结论磷酰胺氮芥可通过促进凋亡、激活自噬/溶酶体降解途径的机制损伤颗粒细胞和膜细胞。10%左归丸含药血清能缓解由此带来的损伤,同时影响了颗粒细胞和膜细胞自噬和凋亡过程。在磷酰胺氮芥损伤颗粒细胞的过程和10%左归丸含药血清缓解其损伤过程中均存在自噬与凋亡串流(cross-talk)。

关键词：左归丸化疗颗粒细胞膜细胞自噬凋亡

牛优势卵泡颗粒细胞与膜细胞中生殖激素合成相关基因的筛选与分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2021年第7期49卷 11-19页

作者：赵园园吴震洋安清明孟金柱铜仁学院贵州铜仁554300

[目的]探究牛优势卵泡颗粒细胞(GCs)和膜细胞(TCs)中基因的表达差异,筛选并研究与生殖激素合成相关的基因.[方法]在GEO数据库获得GSE83524芯片数据,通过在线软件GEO2R筛选牛优势卵泡中GCs和TCs之间的差异表达基因.使用DAVID软件对获得... 详细信息

[目的]探究牛优势卵泡颗粒细胞(GCs)和膜细胞(TCs)中基因的表达差异,筛选并研究与生殖激素合成相关的基因.[方法]在GEO数据库获得GSE83524芯片数据,通过在线软件GEO2R筛选牛优势卵泡中GCs和TCs之间的差异表达基因.使用DAVID软件对获得的差异表达基因进行GO功能富集分析;使用KOBAS软件进行KEGG信号通路分析,筛选出GCs和TCs之间参与生殖激素合成相关信号通路;使用String结合Cytoscape软件构建蛋白与蛋白之间的相互作用网络(PPI).以牛的优势卵泡为材料,采用Real-time PCR对筛选出的差异表达基因进行验证.[结果]经在线软件GEO2R分析,共获得247个差异表达基因,其中43个表达上调,204个表达下调;247个差异表达基因的GO功能分析结果共分为3大类41组,其中参与生物学过程(BP)的有22组,参与细胞组分(CC)的有12组,参与分子功能(MF)的有7组;KEGG信号通路分析共发现17条通路,其中腺苷酸环化酶3基因(ADCY3)、细胞色素P45017A1基因(CYP17A1)、腺苷酸环化酶8基因(ADCY8)、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白基因(GNAS)、骨形态发生蛋白6基因(BMP6)5个差异表达基因参与了卵巢类固醇生成通路.经PPI网络互作分析,筛选出了前10位的Hub基因;Real-time PCR结果显示,CYP17A1、ADCY8在TCs中的表达量极显著高于GCs(P<0.01);ADCY3、BMP6在TCs中的表达量显著高于GCs(P<0.05),GNAS在GCs中的表达量极显著高于TCs(P<0.01),这5个基因在GCs和TCs中的表达趋势与GEO芯片数据结果一致.[结论]ADCY3、CYP17A1、ADCY8、GNAS、BMP6在GCs与TCs之间表达量存在显著差异,其可能在牛优势卵泡GCs和TCs中对生殖激素的合成及分泌产生了重要作用.

关键词：牛优势卵泡差异表达基因颗粒细胞膜细胞生殖激素

神经束膜细胞的发育及其在周围神经损伤修复中的作用

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解剖学杂志 2018年第1期41卷 88-90页

作者：冷傲刘鹏董明慧杨向群刘芳第二军医大学学员旅临床一队上海200433 第二军医大学解剖学教研室上海200433

周围神经的膜性结构包括神经外膜、神经束膜和神经内膜。其中，神经束膜包裹着神经内大小不等的神经纤维束。神经束膜又分内、外两层，外层为结缔组织，内层由多层扁平上皮样细胞构成，称神经束膜细胞。束膜细胞之间有紧密连接，每层上... 详细信息

周围神经的膜性结构包括神经外膜、神经束膜和神经内膜。其中，神经束膜包裹着神经内大小不等的神经纤维束。神经束膜又分内、外两层，外层为结缔组织，内层由多层扁平上皮样细胞构成，称神经束膜细胞。束膜细胞之间有紧密连接，每层上皮样细胞都有基膜。传统观点认为神经束膜上皮仅仅对进出神经的物质起屏障作用，而事实上，神经束膜上皮样细胞不是简单的上皮细胞。

关键词：神经损伤修复神经束膜周围神经膜细胞上皮样细胞发育神经纤维束神经外膜

Cct6a对鸡卵泡膜细胞Bcl-2和Caspase-3表达的影响

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中国生物化学与分子生物学报 2015年第7期31卷 763-769页

作者：杨春红杜胭脂姜运良山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东农业大学农学院山东泰安271018 曲阜师范大学生命科学学院山东济宁273165

Cct6a基因编码CCT(chaperonin containing tailless complex polypeptide)的ζ亚基,属Ⅱ型伴侣素,是一种广泛存在于细胞浆中的异型寡聚蛋白,在肌动蛋白、微管蛋白的组装和折叠中发挥着重要的作用.Cct6a在鸡性成熟和卵泡发育中发挥重要作... 详细信息

Cct6a基因编码CCT(chaperonin containing tailless complex polypeptide)的ζ亚基,属Ⅱ型伴侣素,是一种广泛存在于细胞浆中的异型寡聚蛋白,在肌动蛋白、微管蛋白的组装和折叠中发挥着重要的作用.Cct6a在鸡性成熟和卵泡发育中发挥重要作用,然而其在卵泡发育中的分子机制尚不十分清楚.本研究采用qRT-PCR分析了Cct6a在鸡卵泡细胞中的表达,结果表明,Cct6a在鸡卵泡膜细胞中高表达,并与卵泡体积的增大相关.利用shRNA对鸡卵泡膜细胞中的Cct6a基因进行了敲低分析,转染48 h后鸡卵泡膜细胞中Bcl-2基因的表达量显著降低(P=0.0429),Caspase-3基因的表达无变化;过表达Cct6a后的鸡卵泡膜细胞中Bcl-2基因的mRNA表达量有增高趋势,Caspase-3基因的mRNA表达量呈下调趋势.因此,在鸡卵泡膜细胞中Cct6a影响Bcl-2基因表达,是否Cct6a可影响Caspase-3基因表达尚需进一步实验证明.

关键词：鸡 Cct6a基因 Bcl-2基因 Caspase-3基因膜细胞

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哺乳动物卵巢卵泡膜细胞功能的研究进展

畜牧兽医学报 2013年第9期44卷 1337-1341页

作者：何珲姜冬梅康波马容四川农业大学动物科技学院雅安625014

卵泡膜细胞在卵泡的发生和发育过程中起了至关重要的作用,在卵泡相关研究中,人们更多的关注颗粒细胞而忽略了膜细胞。研究表明,卵泡膜细胞可为卵泡发育提供所必需的雄激素;参与形成血管系统并为卵泡发育提供营养物质和性激素;介导卵母... 详细信息

卵泡膜细胞在卵泡的发生和发育过程中起了至关重要的作用,在卵泡相关研究中,人们更多的关注颗粒细胞而忽略了膜细胞。研究表明,卵泡膜细胞可为卵泡发育提供所必需的雄激素;参与形成血管系统并为卵泡发育提供营养物质和性激素;介导卵母细胞与颗粒细胞之间的交互作用进而参与调控细胞凋亡和卵泡发育过程。因此,本文就哺乳动物卵巢卵泡膜细胞功能的研究现状进行综述,旨在引起人们对卵泡膜细胞功能研究的关注,并为卵泡膜细胞的深入研究提供参考。

关键词：卵泡膜细胞雄激素生物合成血管发生颗粒细胞卵母细胞

AMH对猪卵泡膜细胞类固醇激素合成酶的影响及其机制研究

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AMH对猪卵泡膜细胞类固醇激素合成酶的影响及其机制研究

作者：朱婷安徽农业大学

学位级别：硕士

抗缪勒氏管激素（anti-müllerian hormone,AMH）是转化生长因子β（transforming growth factor,TGF-β）超家族成员之一,由生长卵泡中的颗粒细胞分泌,能够抑制原始卵泡的募集和降低生长卵泡对促卵泡素的敏感性,但其作用机制尚不清楚... 详细信息

抗缪勒氏管激素（anti-müllerian hormone,AMH）是转化生长因子β（transforming growth factor,TGF-β）超家族成员之一,由生长卵泡中的颗粒细胞分泌,能够抑制原始卵泡的募集和降低生长卵泡对促卵泡素的敏感性,但其作用机制尚不清楚。猪是医学试验上理想的动物模型,为了深入探讨AMH在对猪卵泡膜细胞在类固醇合成上的作用,开展了如下实验:试验一:AMH在猪上的表达模式本试验主要采用RT-qPCR技术,分析了AMH及AMHR在猪不同组织器官上以及在不同卵泡直径上的表达规律;利用ELISA技术,分析了在不同直径卵泡液中AMH的表达规律。试验结果表明:AMH及AMHR2在猪睾丸和卵巢中高表达,而在其它组织中不表达或表达量极低。颗粒细胞中AMH mRNA水平和卵泡中蛋白水平均呈现随着卵泡直径的增大,AMH的表达量逐渐降低;在大卵泡（＞5mm）颗粒细胞中,AMHR2表达量最高（P＜0.05）,而小卵泡及中卵泡（直径1-5mm）的颗粒细胞中AMHR2的表达量最低,且无明显差异（P＞0.05）。这说明,AMH及AMHR2的表达量与卵泡的生长发育阶段有关。试验二:猪卵巢卵泡膜细胞的分离纯化和培养采用三种方法进行了猪卵泡膜细胞的优化,方法A:注射针头刮去颗粒细胞层,方法B:手术剪碎膜细胞层。A和B法均用IV型胶原酶消化后percoll密度梯度离心获取44%和35%中间层为膜细胞,C法直接将膜细胞层用IV型胶原酶消化后采用两次percoll梯度离心获取卵泡膜细胞。利用波形蛋白、角蛋白、因子Ⅷ三种蛋白的抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定和流式细胞术鉴定细胞纯度。结果表明:方法A获得的膜细胞存活率及纯度均显著高于方法B和C（92.00%vs.80.33%,85.00%;95.77%vs.87.87%,90.87%）（P＜0.05）;方法B获得的细胞数显著高于方法A和C（1.06×107vs.0.74×107,0.86×107）（P＜0.05）,但耗时显著低于方法A和C（236.67min vs.260.00min,268.33min）（P＜0.05）。结论:方法A可获得较高膜细胞纯度和细胞活力,本实验为进一步研究膜细胞的功能提供了基础。试验三:AMH对卵泡膜细胞上类固醇激素合成酶的影响及机制研究FSH和AMH单独或是共同添加于卵泡膜细胞中48 h后,通过Real-time qPCR发现:在猪卵泡膜细胞中,FSH和AMH无论是单独作用还是联合作用,对LHCGR、STAR、CYP11A1、CYP17A1以及3β-HSD的表达均无显著影响（P＞0.05）,但FSH或AMH单独作用能够显著提高STAR mRNA的表达（P＜0.05）,FSH和AMH共同作用对STAR mRNA的表达水平无显著影响（P＞0.05）。这表明,FSH和AMH在促进类固醇合成起始过程中可能存在协同作用。LH和AMH单独或共同添加于卵泡膜细胞中48 h后,通过Real-time qPCR发现:在猪卵泡膜细胞中,LH单独作用能够诱导LHCGR、CYP11A1、CYP17A1以及3β-HSD mRNA表达水平上调（P＜0.05）;AMH单独作用对LHCGR、STAR、CYP11A1、CYP17A1以及3β-HSD mRNA表达水平无显著影响（P＞0.05）;LH和AMH联合作用时,LHCGR、CYP17A1、3β-HSD mRNA表达水平与对照组及AMH单独作用组均无显著差异（P＞0.05）,但显著低于LH单独作用组的水平（P＜0.05）,而对STAR、CYP11A1 mRNA表达水平无显著影响（P＞0.05）。Forskolin和AMH单独或共同添加于卵泡膜细胞中48h后,通过Real-time qPCR发现,在猪卵泡膜细胞中,Forskolin能够显著上调LHCGR、CYP11A1、CYP17A1以及3β-HSD mRNA的水平（P＜0.05）;Forskolin和AMH共同作用也可上调LHCGR、CYP11A1、CYP17A1以及3β-HSD mRNA表达水平,且与Forskolin单独作用无显著差异。这表明,在猪卵泡膜细胞上,AMH并不是以cAMP作为通路调控的。通过普通PCR发现,猪卵泡膜细胞上存在AMHR2。在AMHR2被siRNA干扰的膜细胞中添加LH和AMH,通过Real-time qPCR发现:LH能够上调LHCGR、CYP11A1、CYP17A1以及3β-HSD mRNA水平（P＜0.05）;但AMH对LHCGR、STAR、CYP11A1、CYP17A1以及3β-HSD m RNA水平无显著影响（P＞0.05）;LH和AMH共同作用时,LHCGR、CYP11A1和CYP17A1 mRNA表达水平均与对照组无显著差异（P＞0.05）,而3β-HSD mNRA表达水平显著上调（P＜0.05）。这表明,AMH在卵泡膜细胞上是通过3β-HS

关键词：抗缪勒管激素猪膜细胞分离鉴定类固醇合成

鸡miR-1b-3p在卵泡膜细胞中的作用及启动子区多态性分析

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鸡miR-1b-3p在卵泡膜细胞中的作用及启动子区多态性分析

作者：李建波山东农业大学

学位级别：硕士

在家禽中,卵巢作为母鸡最重要的生殖器官之一,与鸡的产蛋性能密切相关,因而其生物学功能备受关注。卵巢的发育不仅受到环境和营养等因素的影响,而且受到下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴的调控。HPG轴在蛋鸡卵巢发育过程中发挥至关重要的作用... 详细信息

在家禽中,卵巢作为母鸡最重要的生殖器官之一,与鸡的产蛋性能密切相关,因而其生物学功能备受关注。卵巢的发育不仅受到环境和营养等因素的影响,而且受到下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴的调控。HPG轴在蛋鸡卵巢发育过程中发挥至关重要的作用,调节机体的生长发育。本实验室前期对性成熟前、后鸡的下丘脑和卵巢组织分别进行了高通量测序,结果表明,性成熟后miR-1b-3p表达量在两个组织中均显著上升,推测miR-1b-3p可能参与了鸡的性成熟及卵巢发育调控。本实验主要研究了miR-1b-3p在鸡卵泡中的表达及其对卵泡膜细胞的作用,鉴定了启动子区的多态性并与产蛋性状进行关联分析。主要结果如下:（1）通过荧光定量PCR检测30个miRNA在60日龄、100日龄、140日龄未开产（140a）和140日龄开产（140b）的济宁百日鸡下丘脑中的表达量,结果发现miR-1b-3p在开产前各时期表达无显著变化,开产后显著升高;在性成熟母鸡的卵泡中,miR-1b-3p主要在等级卵泡膜细胞中高表达。（2）对等级卵泡膜细胞进行瞬时转染miR-1b-3p mimics,转染48h后qPCR检测基因表达量,结果表明,miR-1b-3p能够显著上调MAPK1（P＜0.05）与IGF1（P＜0.05）的表达。（3）CCK-8检测结果表明,miR-1b-3p能促进鸡等级卵泡膜细胞增殖（P＜0.05）。（4）进一步鉴定miR-1b-3p启动子区的多态位点,发现了一个有效的单核苷酸多态性SNP:rs737028527（G＞A）位点。构建不同基因型的荧光报告基因载体和真核表达载体,通过双荧光素酶报告基因和qPCR检测,发现G等位基因的启动子可以显著促进miR-1b-3p的启动活性及成熟体的表达量。基因型与隐性白洛克鸡产蛋性能关联分析结果显示,AA基因型对应较早的开产日龄和较多的32周、48周产蛋数。通过PROMO在线预测,发现转录因子Sp1只结合于miR-1b-3p的G等位基因,双荧光素酶报告基因检测结果表明,转录因子Sp1可以促进miR-1b-3p的G等位基因启动子活性（P＜0.05）。综上所述,通过对miR-1b-3p在鸡卵泡细胞中的表达和功能分析,初步明确其在鸡卵泡发育中可能发挥重要调控作用。对miR-1b-3p启动子区分析,发现了一个与鸡产蛋性状显著关联的SNP位点,该位点受转录因子Sp1的调控并影响miR-1b-3p的表达。

关键词：鸡卵泡膜细胞 miR-1b-3p 单核苷酸多态性