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富马酸丙酚替诺福韦合成方法的改进

中国医药工业杂志 2023年第6期54卷 884-888页

作者：安明常珍祝江业苏亚军况斌北京华睿鼎信科技有限公司北京100023

以腺嘌呤(2)为起始物料,与(R)-碳酸丙烯酯缩合反应制得(R)-9-[2-(羟基)丙基]腺嘌呤(3);与对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯、叔丁醇镁取代反应,再与三甲基溴硅烷水解制得(R)-9-[2-(膦酰基甲氧基)丙基]腺嘌呤(4);与三乙胺、亚磷酸三苯酯、4-... 详细信息

以腺嘌呤(2)为起始物料,与(R)-碳酸丙烯酯缩合反应制得(R)-9-[2-(羟基)丙基]腺嘌呤(3);与对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯、叔丁醇镁取代反应,再与三甲基溴硅烷水解制得(R)-9-[2-(膦酰基甲氧基)丙基]腺嘌呤(4);与三乙胺、亚磷酸三苯酯、4-二甲氨基吡啶酯化反应制得(R)-9-[2-(苯氧基膦酰基甲氧基)丙基]腺嘌呤(5);与氯化亚砜在甲苯中进行氯代反应,再与L-丙氨酸异丙酯酰胺化反应制得丙-2-基N-[(S)-[[[(2R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-丙-2-基]氧化]甲基](苯氧基)膦酰基]-l-丙氨酸酯(6,即丙酚替诺福韦);6与0.5倍物质的量富马酸,于40~50℃条件加晶种析晶制得富马酸丙酚替诺福韦(1)。化学纯度99.99%,手性纯度99.99%,总收率24%(以2计)。

关键词：富马酸丙酚替诺福韦核苷酸逆转录酶抑制剂抗病毒药工艺改进腺嘌呤

^(1)H-NMR定量测定黄芪注射液中亲水性成分和疏水性成分

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中草药 2024年第10期55卷 3321-3330页

作者：杨嘉誉徐绍静张琪应旭辉李文竹潘坚扬瞿海斌浙江大学药学院药物信息学研究所浙江杭州310058 正大青春宝药业有限公司浙江杭州310023

目的建立黄芪注射液中亲水性成分和疏水性成分的^(1)H-NMR定量分析方法。方法以10%氘代水(10%D2O)和氘代甲醇(CD3OD)为氘代溶剂制备黄芪注射液亲水性成分和疏水性成分的^(1)H-NMR样品。使用Bruker Avance III 600型核磁共振波谱仪采集^(... 详细信息

目的建立黄芪注射液中亲水性成分和疏水性成分的^(1)H-NMR定量分析方法。方法以10%氘代水(10%D2O)和氘代甲醇(CD3OD)为氘代溶剂制备黄芪注射液亲水性成分和疏水性成分的^(1)H-NMR样品。使用Bruker Avance III 600型核磁共振波谱仪采集^(1)H-NMR图谱,具体实验参数如下:Noesygppr1D脉冲序列;温度为298 K,数据点32 K,采集时间(AQ)为2.980 s,脉冲宽度(SW)为7211.54 Hz,弛豫延迟时间(D1)分别为15.0 s和20.0 s,频率偏移(O1)分别为2816.65 Hz和2930.31 Hz,接收器增益(RG)值为57,扫描次数(NS)32次。结果在^(1)H-NMR图谱中归属出33种成分,分别是异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、乳酸、焦谷氨酸、天冬酰胺、γ-氨基丁酸、脯氨酸、甲酸、乙酸、富马酸、苹果酸、琥珀酸、丙二酸、蔗糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、胆碱、甜菜碱、葫芦巴碱、尿苷、腺苷、胞苷、鸟苷、腺嘌呤、黄芪皂苷III、黄芪甲苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮苷、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-葡萄糖苷以及异黄烷苷。对其中27种化学成分(异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、乳酸、焦谷氨酸、天冬酰胺、γ-氨基丁酸、脯氨酸、甲酸、乙酸、富马酸、苹果酸、琥珀酸、丙二酸、蔗糖、果糖、葡萄糖、胆碱、甜菜碱、葫芦巴碱、尿苷、腺苷、鸟苷、腺嘌呤、黄芪皂苷III、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷)进行定量,可定量的成分占注射液固含量90%以上。该方法的精密度、重复性、样品稳定性和耐用性良好,各个成分线性关系良好,r 2大于0.9990,加样回收回收率为98.19%~101.40%。结论建立了一种简单、快速、可靠的^(1)H-NMR定量方法用于测定黄芪注射液中的亲水性成分和疏水性成分,为黄芪注射液的质量评价提供了新的分析手段。

关键词：质子核磁共振黄芪注射液含量测定中药注射剂亲水性成分疏水性成分 ^(1)H-NMR定量分析方法异亮氨酸缬氨酸丙氨酸乳酸焦谷氨酸天冬酰胺 γ-氨基丁酸脯氨酸甲酸乙酸富马酸苹果酸琥珀酸丙二酸蔗糖果糖葡萄糖胆碱甜菜碱葫芦巴碱尿苷腺苷鸟苷腺嘌呤黄芪皂苷III 黄芪甲苷毛蕊异黄酮苷

腺嘌呤对电离辐射诱发AHH-1细胞凋亡的保护作用(英文)

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中国天然药物 2013年第2期11卷 139-144页

作者：王小彦马增春邵帅洪倩王宇光谭洪玲路晓钦董志高月军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 重庆医科大学药学院重庆400016

目的:观察腺嘌呤对淋巴母细胞AHH-1辐射损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法:照射前12h给予不同浓度的腺嘌呤,再经4.0Gy60Coγ射线照射诱发细胞凋亡,采用MTS法计算细胞存活率;AnnexinV-FITC/PI双染法、Caspase3/7发光法检测细胞凋亡率... 详细信息

目的:观察腺嘌呤对淋巴母细胞AHH-1辐射损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法:照射前12h给予不同浓度的腺嘌呤,再经4.0Gy60Coγ射线照射诱发细胞凋亡,采用MTS法计算细胞存活率;AnnexinV-FITC/PI双染法、Caspase3/7发光法检测细胞凋亡率;DNALadder法观察凋亡断裂条带;RT-PCR分析细胞Caspase-9、Bax、Bcl-2mRNA表达的变化。结果:与正常组比较,电离辐射后细胞存活率79.4%显著下降(P腺嘌呤细胞存活率分别为85.4%,89.6%,92.2%明显升高(P腺嘌呤对电离辐射诱发的细胞凋亡有保护作用,并且对细胞凋亡的抑制呈剂量依赖正相关关系。

关键词：腺嘌呤淋巴母细胞AHH-1 细胞凋亡电离辐射

氢氧化镧通过阻断HIF-1α信号通路抑制慢性肾病所致的血管钙化

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中国药理学通报 2023年第12期39卷 2354-2360页

作者：崔雅婷王琪雯王胜男李刚内蒙古自治区呼和浩特市第一医院药剂科内蒙古呼和浩特010110 内蒙古医科大学药学院药理学教研室内蒙古呼和浩特010110

目的研究氢氧化镧对慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)所致大鼠肾损伤及血管钙化的治疗作用及其机制。方法通过给予腺嘌呤构建CKD模型,造模后随机分为模型组、氢氧化镧低、中、高剂量组、碳酸镧组、碳酸钙组。8周后,检测血清磷(Pi)... 详细信息

目的研究氢氧化镧对慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)所致大鼠肾损伤及血管钙化的治疗作用及其机制。方法通过给予腺嘌呤构建CKD模型,造模后随机分为模型组、氢氧化镧低、中、高剂量组、碳酸镧组、碳酸钙组。8周后,检测血清磷(Pi)、钙(Ca)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)、成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TRAP-5b)水平;组织病理学染色评估血管钙化程度;对血管中平滑肌蛋白22α(smooth muscle protein 22α,SM22α)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、低氧诱导因子1(hypoxia inducible factor 1,HIF-1)通路mRNA及其蛋白表达水平进行检测。结果氢氧化镧可明显降低CKD大鼠血清Pi、Scr、BUN、PTH、FGF23及TRAP-5b水平,明显减少CKD大鼠胸主动脉的钙沉积、胞质中BMP-2、VEGF及胞核内RUNX2、HIF-1α的表达,增加SM22αmRNA及蛋白的表达。结论氢氧化镧可明显改善CKD大鼠高磷血症,其可能通过阻断HIF-1α信号通路发挥改善CKD大鼠血管钙化的作用。

关键词：氢氧化镧慢性肾病腺嘌呤高磷血症血管钙化低氧诱导因子1α

腺嘌呤生物金属有机框架的配位化学及超分子识别

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科学通报 2016年第16期61卷 1762-1773页

作者：才红许丽丽李冕李丹汕头大学化学系广东省有序结构材料的制备与应用重点实验室汕头515063 韩山师范学院化学与环境工程学院潮州521041

生物金属有机框架(biological metal-organic framework,Bio MOF)是近十来年发展起来的一类新型晶态多孔材料,它采用生物分子作为有机连接体,本身具有优良的生物相容性,为生物学和医学方面的应用提供新的机遇.本文总结了腺嘌呤作为有机... 详细信息

生物金属有机框架(biological metal-organic framework,Bio MOF)是近十来年发展起来的一类新型晶态多孔材料,它采用生物分子作为有机连接体,本身具有优良的生物相容性,为生物学和医学方面的应用提供新的机遇.本文总结了腺嘌呤作为有机配体与金属离子组装形成Bio MOF的配位化学和结构特点,介绍带有开放WatsonCrick位点(open Watson-Crick site)的Bio MOF及其主客体化学的研究,并展望其在化学和生物领域中的前景.

关键词：生物金属有机框架腺嘌呤开放Watson-Crick位点主客体化学自适应化学

腺嘌呤—过氧化氢—水三元体系的相平衡及腺嘌呤—过氧化氢加合物的热分解动力学研究

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腺嘌呤—过氧化氢—水三元体系的相平衡及腺嘌呤—过氧化氢加合物...

作者：朱长飞扬州大学

学位级别：硕士

过氧化氢具有良好的杀菌、防腐、增氧、漂白和除臭的作用,用途广泛,是一种重要的化工原料。但是过氧化氢易分解、易爆炸且具有一定的致癌性。同时,腺嘌呤是一种营养物质,参与人体内代谢,但其低溶解度大大限制了它的应用。因此若要充分... 详细信息

过氧化氢具有良好的杀菌、防腐、增氧、漂白和除臭的作用,用途广泛,是一种重要的化工原料。但是过氧化氢易分解、易爆炸且具有一定的致癌性。同时,腺嘌呤是一种营养物质,参与人体内代谢,但其低溶解度大大限制了它的应用。因此若要充分发挥过氧化氢和腺嘌呤的优势,过氧化氢与腺嘌呤形成加合物,以加合物的形式进行工业生产以及日常应用是很好的选择。从世界范围来看,过氧化氢加合物的关注度越来越高。在商业和工业生产中,过氧化氢加合物已经有了重要应用,如清洁剂、消毒剂、杀菌剂。在恶劣的环境下也能产生作用,比如伤口、受污染的土壤或容器。且在人体失血性休克导致重要器官的供氧量减少时,过氧化氢加合物既能控制出血,也能使供氧量提升到临界值以上。腺嘌呤-过氧化氢加合物的合成基础是三元体系相平衡的溶解度数据。因此本论文选用腺嘌呤为原料,在控制温度为283.15 K和293.15 K时,测定了三元体系腺嘌呤-过氧化氢-水的相平衡的溶解度数据,并绘制了三元体系相图,为其在工业中的应用提供基础数据和理论依据。本文用NRTL模型对溶解度数据进行了回归,得到了腺嘌呤和过氧化氢之间的相互作用参数和溶度积常数,结果表明关联效果较好。在温度降低时,腺嘌呤和腺嘌呤-过氧化氢加合物的溶解度均减小;并且,共饱和点也降低,腺嘌呤-过氧化氢加合物的结晶区增大。此外,研究了在过氧化氢溶液中加入乙醇时固-液体系的溶解度数据,绘制出相应的相图。结果表明当体系中加入一定量的乙醇时会使体系中的腺嘌呤及腺嘌呤-过氧化氢加合物的溶解度增大。以腺嘌呤-过氧化氢-水三元体系相图为基础,对腺嘌呤-过氧化氢-水三元体系相图进行了理论计算,从三元体系相图中,总结得出反应温度和原料质量配比对腺嘌呤-过氧化氢加合物收率的影响。通过计算,得出在283.15 K和293.15 K下,腺嘌呤与过氧化氢的最佳质量配料比分别为0.79和0.71,从而得出该加合物的最大收率分别为82.32%和78.96%,为工业生产提供了重要参数及理论依据。利用红外光谱、X-射线衍射以及XSP生物显微镜对腺嘌呤-过氧化氢加合物,即对C5H5N5-H2O2进行了表征,得到了 C5H5N5-H2O2的红外光谱与X-射线衍射图谱以及该加合物的形貌结构,上述表征对了解该加合物的结构和性质具有重要意义。利用热分析仪,采用程序升温法研究了 C5H5N5-H2O2在氮气中的热分解动力学,绘制了该加合物在氮气中的分解曲线。此外,排除分解机理的影响,利用Flynn-Wall-Ozawa积分法、Friedman微分法、Kissinger法以及基于Harcount-Esson的无模式函数法求得了C5H5N5-H2O2分解的活化能。四种方法求取的平均活化能分别为98.47 kJ/mol、85.24 kJ/mol、96.36kJ/mol以及40.70kJ/mol。并通过主曲线法确定了 C5H5N5-H2O2的热分解机理为相边界反应模型R2机理。对C5H5N5-H2O2进行的热分解动力学研究,为工业生产中反应装置的设计以及最佳工艺条件的探寻,均具有深远意义。

关键词：腺嘌呤过氧化氢固-液相平衡腺嘌呤-过氧化氢加合物热分解动力学

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散寒化湿颗粒HPLC特征图谱研究

中草药 2023年第13期54卷 4168-4176页

作者：于桂芳胡军华周茆周恩丽戴翠红李海波章晨峰王振中王团结肖伟中药制药过程与智能制造技术全国重点实验室江苏连云港222001 江苏康缘药业股份有限公司江苏连云港222001 中成药智能制造技术国家地方联合工程研究中心江苏连云港222001

目的建立散寒化湿颗粒(Sanhan Huashi Granules,SHG)的HPLC特征图谱,并对全部特征峰进行化学成分指认和药材来源归属,为其整体质量评价提供科学依据。方法采用Waters Atlantis T3 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸水溶... 详细信息

目的建立散寒化湿颗粒(Sanhan Huashi Granules,SHG)的HPLC特征图谱,并对全部特征峰进行化学成分指认和药材来源归属,为其整体质量评价提供科学依据。方法采用Waters Atlantis T3 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min;柱温为30℃;检测波长为250 nm,建立SHG的HPLC特征图谱。采用UHPLC-QTOF MS、NMR、对照品比对及定向分离技术对10个特征峰进行了准确的化学成分指认并归属处方药味来源,并对20批制剂进行一致性评价。结果建立了SHG的HPLC特征图谱,10个特征峰得到明确化学成分指认,分别为腺嘌呤(1号峰)、尿苷(2号峰)、鸟苷(3号峰)、肌苷(4号峰)、5-羟甲基糠醛(5号峰)、木兰苷A(6号峰)、佛手酚-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷峰(7号峰)、紫花前胡苷(8号峰)、6′-O-(反式阿魏酰基)-紫花前胡苷(9号峰)、茴香酸对羟基苯乙酯(10号峰),并归属了特征峰处方药味来源,分别为1号峰归属于麻黄、苦杏仁、羌活、广藿香、苍术、白术、焦六神曲、焦麦芽、地龙、徐长卿、葶苈子,2号峰归属于厚朴、羌活、广藿香、佩兰、苍术、白术、地龙、徐长卿、葶苈子,3号峰归属于羌活、广藿香、地龙、徐长卿、葶苈子,4号峰归属于地龙,5号峰归属于焦三仙(焦山楂、焦麦芽、焦六神曲),6号峰归属于厚朴,7~10号峰归属于羌活。20批制剂均符合特征图谱的规定,批间一致性良好。结论所建立的SHG的HPLC特征图谱方法简便,稳定性、重复性好,初步描绘了SHG的整体化学成分特征,为进一步提升其质量标准奠定了基础,同时也可为其他经典名方质量标准研究提供参考。

关键词：经典名方散寒化湿颗粒 HPLC 特征图谱腺嘌呤尿苷鸟苷肌苷 5-羟甲基糠醛木兰苷A 佛手酚-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷紫花前胡苷 6′-O-(反式阿魏酰基)-紫花前胡苷茴香酸对羟基苯乙酯

基于OS/NF-κB/炎症因子探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭并发心脏病变进展的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2023年第16期29卷 100-113页

作者：张圆圆靳培培宋婧雅郭登洲河北中医药大学研究生学院石家庄050091 河北中医药大学第一附属医院/河北省中医院石家庄050011

目的:通过观察加味真武汤对腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭大鼠血清及肾组织中超氧化物歧化酶1(SOD1)、丙二醛(MDA)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化核转录因子-κB p65(p-p65)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤... 详细信息

目的:通过观察加味真武汤对腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭大鼠血清及肾组织中超氧化物歧化酶1(SOD1)、丙二醛(MDA)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化核转录因子-κB p65(p-p65)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达及心肾组织病理的影响,探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭并发心脏病变进展的可能作用机制。方法:将50只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组10只、造模组40只,将大鼠适应性饲养1周后采用腺嘌呤150 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃的方法建立实验性慢性肾功能衰竭并发心血管病变大鼠模型。造模完成后随机选取正常组和造模组大鼠各3只取材,检测造模是否成功。造模成功后,将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、加味真武汤低剂量组、加味真武汤中剂量组、加味真武汤高剂量组、盐酸贝那普利组各6只,进行药物灌胃,每日1次,治疗4周。于实验第17周末检测24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)、尿肌酐(UCr),第17周末各组大鼠麻醉后取材,腹主动脉取血后离心取上清检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血钙、血钾、血磷、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清AOPP、IL-1β、TNF-α表达水平变化;苏木素-伊红(HE)染色法/马松染色(Masson)法观察心肾组织病理改变;透射电镜观察近端肾小管超微结构变化;免疫组织化学(IHC)法观察肾组织SOD1、MDA、AOPP、NF-κB p65、p-p65、IL-1β、TNF-α表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)观察肾组织SOD1、NF-κB p65、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肾组织SOD1、MDA、NF-κB p65、p-p65表达水平。结果:(1)与正常组比较,模型组实验大鼠24 h-UTP显著增高(P<0.01),UCr显著降低(P<0.01);模型组实验大鼠Cr、BUN、TG、TC、血磷、血钾显著增高(P<0.01);模型组实验大鼠血清中AOPP、IL-1β、TNF-α含量显著升高(P<0.01);模型组实验大鼠肾小球球囊间隙明显增宽,肾间质明显增宽伴有大量炎细胞浸润,大量肾小管官腔有褐色沉淀物阻塞,肾间质有大量胶原纤维沉积,肾脏血管周围、肾小囊壁层囊壁外、肾小球基底膜和肾小管基底膜胶原纤维明显增多,心脏心肌纤维明显增粗,血管周围有少量炎细胞浸润,心脏血管周围和心肌细胞间有大量胶原纤维。模型组实验大鼠近端肾小管上皮细胞内可见高密度菱形针状结晶,溶酶体增多,线粒体增生、线粒体嵴和线粒体外膜致密变;模型组实验大鼠左心室舒张期心室壁厚度和收缩期心室壁厚度均升高;模型组实验大鼠MDA、AOPP、NF-κB p65、IL-1β、TNF-α在近端肾小管上皮细胞表达明显增强(P<0.01),p-p65在近端肾小管上皮细胞的细胞核表达明显增加(P<0.01),SOD1在近端肾小管上皮细胞表达显著减弱(P<0.01);模型组实验大鼠肾组织NF-κB p65、IL-1β、TNF-αmRNA表达显著增强(P<0.01),SOD1 mRNA表达显著减弱(P<0.01);模型组实验大鼠肾组织SOD1蛋白表达显著下降(P<0.01);MDA、NF-κB p65、p-p65蛋白表达显著升高(P<0.01)。(2)与模型组比较,加味真武汤干预后,24 h-UTP显著降低(P<0.01),UCr显著升高(P<0.01);Cr、BUN、TG、TC、血磷、血钾显著降低(P<0.01);血清AOPP、IL-1β、TNF-α含量显著下降(P<0.01);心肾病理损害减轻;近端肾小管上皮细胞线粒体损伤减轻;MDA、AOPP、NF-κB p65、IL-1β、TNF-α在近端肾小管上皮细胞表达显著减弱(P<0.01),p-p65在近端肾小管上皮细胞的细胞核表达显著减弱(P<0.01),SOD1在近端肾小管上皮细胞表达显著增强(P<0.01);肾组织NF-κB p65、IL-1β、TNF-αmRNA表达显著减少(P<0.01),SOD1 mRNA表达显著升高(P<0.01);肾组织SOD1蛋白表达显著升高(P<0.01),MDA、NF-κB p65、p-p65蛋白表达显著降低(P<0.01);中药组表现出明显的量效趋势。结论:加味真武汤可能通过减轻近端肾小管上皮细胞氧化应激和线粒体损伤,从而减少氧化应激产物产生和抑制NF-κB信号通路激活引起的炎症因子释放,减轻对心肾组织及功能的损伤,实现延缓慢性肾功能衰竭并发心脏病变进展的目的,且中药组具有量效趋势。

关键词：加味真武汤腺嘌呤慢性肾功能衰竭心脏病变线粒体损伤氧化应激炎症反应

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米曲霉异源表达合成虫草素

生物技术通报 2024年第6期40卷 290-298页

作者：闫欢欢尚怡彤王丽红田学琴廖海艳曾斌胡志宏江西科技师范大学生命科学学院南昌330013 江西科技师范大学江西省生物加工过程重点实验室南昌330013 南昌市微生物资源与代谢重点实验室南昌330013 深圳技术大学药学院深圳518118

【目的】通过米曲霉中异源表达虫草素合成关键基因,构建米曲霉工程菌株合成虫草素。【方法】以米曲霉尿苷/尿嘧啶和组氨酸双营养缺陷型菌株AoΔpyrGΔHisB为背景菌株,利用农杆菌介导的转化方法对虫草素合成关键基因CmCns1-CmCns3进行过... 详细信息

【目的】通过米曲霉中异源表达虫草素合成关键基因,构建米曲霉工程菌株合成虫草素。【方法】以米曲霉尿苷/尿嘧啶和组氨酸双营养缺陷型菌株AoΔpyrGΔHisB为背景菌株,利用农杆菌介导的转化方法对虫草素合成关键基因CmCns1-CmCns3进行过表达;通过荧光显微镜观察CmCns1和CmCns2在米曲霉中的亚细胞定位;利用高效液相色谱法(HPLC)测定转基因米曲霉虫草素含量,同时对米曲霉发酵液添加合成虫草素的前体甘氨酸和腺嘌呤,探究其在米曲霉中对合成虫草素的影响。【结果】蛹虫草CmCns1和CmCns2在米曲霉中定位于脂滴;并且米曲霉中单独过表达CmCns1、共表达CmCns1和CmCns2以及共表达CmCns1-CmCns3均能合成虫草素,发酵48 h虫草素胞外产量最高达到37.74 μg/mL;向米曲霉发酵液添加甘氨酸和腺嘌呤,不能有效提升虫草素的含量。【结论】成功在米曲霉异源表达合成虫草素。

关键词：虫草素米曲霉异源表达亚细胞定位腺嘌呤甘氨酸