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骆驼刺酸性多糖对小鼠脾脏淋巴细胞免疫增强作用的研究

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南京农业大学学报 2022年第6期45卷 1220-1226页

作者：特列克·阿依恒别克赛福丁·阿不拉萨比热·热夏提况玲德力拜尔·木拉提阿得力江·吾斯曼新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆维吾尔自治区动物疫病预防控制中心新疆乌鲁木齐830011

[目的]本文旨在探讨骆驼刺酸性多糖(acidic Alhagi sparsifolia Shap polysaccharide,aASP)对小鼠脾淋巴细胞的免疫增强作用。[方法]采用醇沉法提取骆驼刺多糖,采用柱层析法对骆驼刺多糖进行分离及纯化,采用苯酚硫酸法、硫酸-咔唑法和BC... 详细信息

[目的]本文旨在探讨骆驼刺酸性多糖(acidic Alhagi sparsifolia Shap polysaccharide,aASP)对小鼠脾淋巴细胞的免疫增强作用。[方法]采用醇沉法提取骆驼刺多糖,采用柱层析法对骆驼刺多糖进行分离及纯化,采用苯酚硫酸法、硫酸-咔唑法和BCA微孔酶标仪法,检测糖、糖醛酸和蛋白含量,采用红外光谱法鉴别多糖性质。采用MTT法确定aASP对小鼠脾脏淋巴细胞的安全浓度,在安全浓度范围内500、125和31.25μg·mL^(-1)3个浓度下检测单独、协同脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和植物血凝素(phytoheamagglutinin,PHA)对脾淋巴细胞的增殖效果;流式细胞术检测aASP对淋巴细胞亚群分化的影响;ELISA法检测aASP对淋巴细胞细胞因子分泌的影响。[结果]骆驼刺多糖提取物中多糖含量为(81.8±1.2)%,糖醛酸含量为(17.34±0.75)%,蛋白含量为(0.54±0.08)%;红外光谱显示aASP在1746.53 cm^(-1)处有较强的吸收峰,结合糖醛酸含量判定aASP为酸性多糖。高、中、低浓度的aASP均可促进脾脏淋巴细胞增殖,协同LPS和PHA能够更显著促进B细胞和T淋巴细胞的增殖(P细胞术和ELISA检测结果显示aASP能够促进CD4^(+)和CD8a^(+)T细胞的分化,并促进脾淋巴细胞分泌IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-4。[结论]aASP可以增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖,诱导小鼠脾脏T淋巴细胞产生Th1(helper T lymphocyte 1)及Th2(helper T lymphocyte 2)混合型免疫应答,免疫细胞偏向CD4^(+)T细胞分化。

关键词：骆驼刺酸性多糖脾脏淋巴细胞免疫增强细胞分化

苦丁茶冬青多糖对小鼠脾脏淋巴细胞的免疫调节和抗氧化作用

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食品工业科技 2022年第17期43卷 387-393页

作者：舒翔程明王辉朱红英谭乐和顾文亮朱科学中国热带农业科学院香料饮料研究所海南万宁571533 国家知识产权局专利局专利审查协作江苏中心江苏苏州215011 海南大学食品科学与工程学院海南海口570100 海南省特色热带作物适宜性加工与品质控制重点实验室海南万宁571533

本文通过体外培养小鼠脾脏淋巴细胞研究苦丁茶冬青多糖对正常小鼠脾脏淋巴细胞免疫调节和抗氧化作用的影响。测定了不同浓度的苦丁茶冬青多糖(polysaccharide from Ilex kudingcha C.J.Tseng)对脾脏淋巴细胞体外增殖能力、抗氧化酶(SOD... 详细信息

本文通过体外培养小鼠脾脏淋巴细胞研究苦丁茶冬青多糖对正常小鼠脾脏淋巴细胞免疫调节和抗氧化作用的影响。测定了不同浓度的苦丁茶冬青多糖(polysaccharide from Ilex kudingcha C.J.Tseng)对脾脏淋巴细胞体外增殖能力、抗氧化酶(SOD、T-AOC、GSH-Px和CAT)活力、丙二醛(MDA)含量及炎性细胞因子(TNF-α、IFN-γ和IL-1β)分泌水平的影响。结果显示,小鼠脾脏淋巴细胞的增殖与苦丁茶冬青多糖浓度呈正相关,在80和160μg/mL浓度时,吸光度值分别为0.38和0.41,与空白对照组(0.31)相比具有极显著差异(P脾脏淋巴细胞分泌TNF-α、IFN-γ和IL-1β。本研究结果表明苦丁茶冬青多糖可通过促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖、增强细胞抗氧化能力及诱导炎性细胞因子分泌等发挥其免疫增强活性,该研究可为苦丁茶冬青的开发和利用提供理论支撑。

关键词：苦丁茶冬青多糖脾脏淋巴细胞抗氧化活性细胞因子免疫调节

饲粮维生素E缺乏对雏鸡生长性能及脾脏淋巴细胞凋亡的影响

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中国畜牧杂志 2023年第11期59卷 286-291页

作者：孟圆伍涵竹苏梦圆俞佳钰李婧娴王奔吉林农业科技学院动物科技学院吉林吉林132101

试验旨在研究饲粮中维生素E缺乏对雏鸡生长性能、脾脏组织和脾脏淋巴细胞形态结构、脾脏淋巴细胞凋亡相关蛋白和基因表达水平的影响。选取1日龄雄性雏鸡160羽,随机分为2组,饲粮维生素E缺乏试验组的预混料中不添加维生素E,对照组额外添... 详细信息

试验旨在研究饲粮中维生素E缺乏对雏鸡生长性能、脾脏组织和脾脏淋巴细胞形态结构、脾脏淋巴细胞凋亡相关蛋白和基因表达水平的影响。选取1日龄雄性雏鸡160羽,随机分为2组,饲粮维生素E缺乏试验组的预混料中不添加维生素E,对照组额外添加维生素E(30 mg/kg),每组各80羽,每组10个重复,每个重复8羽,试验期40 d。结果表明:试验组雏鸡平均日增重低于对照组(P脾脏组织和脾脏淋巴细胞中维生素E含量低于对照组(P脾脏组织和脾脏淋巴细胞结构出现损伤;试验组雏鸡脾脏淋巴细胞中Caspase-3活性高于对照组(P脾脏淋巴细胞中Bcl-2的mRNA表达量低于对照组(P脾脏淋巴细胞中Caspase-3活性,影响Bcl-2、p53和Caspase-3基因表达诱导脾脏淋巴细胞凋亡。

关键词：维生素E 雏鸡脾脏淋巴细胞生长性能细胞凋亡

多房棘球蚴感染相关miR-26a-5p靶基因的鉴定及其对脾脏淋巴细胞凋...

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作者：仲顺虎西北民族大学

学位级别：硕士

多房棘球绦虫的中绦期幼虫(多房棘球蚴)感染人和动物引起的多房棘球蚴病,严重威胁着人类健康和畜牧业的发展。micro RNAs(miRNAs)是一类具有转录后调控功能的非编码小RNA,在调节细胞发育和激活免疫反应等方面扮演重要角色。研究表明,miR... 详细信息

多房棘球绦虫的中绦期幼虫(多房棘球蚴)感染人和动物引起的多房棘球蚴病,严重威胁着人类健康和畜牧业的发展。micro RNAs(miRNAs)是一类具有转录后调控功能的非编码小RNA,在调节细胞发育和激活免疫反应等方面扮演重要角色。研究表明,miRNAs能够通过调节宿主的免疫反应,促进或抑制寄生虫在宿主体内的寄生。因此,开展多房棘球蚴感染相关miRNA的筛选及其功能研究,对寻找新型抗寄生虫药物和诊断靶标具有重要意义。鉴于此,本研究主要开展了以下几个方面的研究:1.多房棘球蚴感染相关miRNAs的筛选及动态表达分析。利用高通量测序技术筛选多房棘球蚴感染前后小鼠脾脏淋巴细胞差异表达的miRNAs,利用q PCR分析其中差异表达最显著的miRNA在感染过程中的动态表达。结果显示:存在195个差异表达的miRNAs。其中miR-26a-5p的差异表达最显著,其在感染的30 d、60 d、90 d的表达水平均显著下调(P脾脏淋巴细胞中的转录和蛋白表达水平;最后通过双荧光素酶报告系统对靶基因进行验证。结果表明:miR-26a-5p具有9个潜在靶基因,分别为:EZH2、WNK1、PATZ1、ZFP608、DDX17、CTSL、FNIP1、EP300以及FA2H。在感染的30 d、60 d、90 d,其中的EZH2的转录和蛋白表达水平均显著上调(P脾脏淋巴细胞凋亡的影响。首先利用流式细胞术检测多房棘球蚴不同感染时期小鼠脾脏淋巴细胞的凋亡水平以及过表达miR-26a-5p对凋亡的影响;最后为了初步探究miR-26a-5p对凋亡的影响机制,将健康小鼠脾脏淋巴细胞与多房棘球蚴外泌体在体外共孵育24 h;同时将多房棘球蚴外泌体通过尾静脉注射到正常小鼠体内,24 h后分离脾脏淋巴细胞。q PCR分别检测miR-26a-5p及EZH2的转录水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果表明:在多房棘球蚴感染的30 d、60 d、90 d,其脾脏淋巴细胞的凋亡水平持续显著下降(P脾脏淋巴细胞中过表达miR-26a-5p后,其凋亡水平显著上调(P脾脏淋巴细胞的miR-26a-5p表达下调、EZH2转录上调、细胞凋亡程度明显降低(P脾脏淋巴细胞miR-26a-5p的表达,导致其靶基因EZH2的表达上调,从而抑制了脾脏淋巴细胞的凋亡。

关键词：多房棘球蚴 miR-26a-5p EZH2 脾脏淋巴细胞细胞凋亡

胚胎植入期二硫化碳暴露对孕鼠脾脏淋巴细胞DNA损伤的影响

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中华劳动卫生职业病杂志 2013年第8期31卷 576-580页

作者：胡程霞张炳珍李春辉吴艳玲杨柳王志萍山东大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系济南250012 济南市天桥区卫生监督所

目的研究胚胎植入期二硫化碳（CS2）暴露对孕鼠脾脏淋巴细胞DNA损伤的影响，从免疫损伤角度探讨CS2致胚胎植入障碍的机制。方法分别建立不同暴露剂量和不同暴露时间2个动物模型：模型1为不同CS2暴露剂量，即在小鼠受孕第4天（GD4），分... 详细信息

目的研究胚胎植入期二硫化碳（CS2）暴露对孕鼠脾脏淋巴细胞DNA损伤的影响，从免疫损伤角度探讨CS2致胚胎植入障碍的机制。方法分别建立不同暴露剂量和不同暴露时间2个动物模型：模型1为不同CS2暴露剂量，即在小鼠受孕第4天（GD4），分别给予4组小鼠一次性腹腔注射低（0．1LD50，157．8mg／kg）、中（0．2LD50，315．7mg／kg）、高（0．4LD50，631．4mg／kg）剂量的CS2和橄榄油对照组；模型2为不同CS2暴露时间，即4组小鼠分别在GD3、GD4、GD5和GD6一次性腹腔注射CS2（0．4LD50，631．4mg／kg），各组设平行对照。两模型对照组均注射等体积橄榄油。实验终点，制备胚胎植入期小鼠脾脏淋巴细胞单细胞悬液，用台盼蓝法检测细胞活性，并进行碱性单细胞凝胶电泳（SCGE）试验，检测孕鼠脾脏淋巴细胞DNA损伤状况。结果（1）中、高剂量组的DNA损伤程度与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．01）；反映DNA损伤程度的各指标与暴露剂量之间均存在回归关系，且差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）GD3、GD4、GD5和GD6暴露组的DNA损伤程度与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01），且GD4暴露组DNA损伤程度最明显。结论胚胎植入期CS2暴露可导致孕鼠脾脏淋巴细胞的DNA损伤，并且呈明显的剂量反应关系；GD4可能是CS2暴露致孕鼠脾脏淋巴细胞DNA损伤的敏感时间点。

关键词：二硫化碳 DNA损伤单细胞凝胶电泳脾脏淋巴细胞

白术多糖通过Toll样受体4/核因子-κB信号通路调控雏鸡脾脏淋巴细胞免疫功能

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动物营养学报 2019年第11期31卷 5192-5201页

作者：李婉雁曹楠田允波相雪莲李冰心黄运茂许丹宁仲恺农业工程学院动物科技学院广州510225 广东省水禽健康养殖重点实验室广州510225

本试验旨在研究白术多糖(PAMK)对雏鸡脾脏淋巴细胞免疫功能的影响及可能的调控机制。体外分离培养21日龄雏鸡脾脏淋巴细胞,以siRNA引物转染淋巴细胞干扰Toll样受体4(TLR4)基因的表达,在此基础上用浓度为12.5 mg/L的PAMK处理转染和非转... 详细信息

本试验旨在研究白术多糖(PAMK)对雏鸡脾脏淋巴细胞免疫功能的影响及可能的调控机制。体外分离培养21日龄雏鸡脾脏淋巴细胞,以siRNA引物转染淋巴细胞干扰Toll样受体4(TLR4)基因的表达,在此基础上用浓度为12.5 mg/L的PAMK处理转染和非转染细胞,36 h后检测TLR4及其信号通路下游基因[髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)抑制物的激酶(IKK)、NF-κB抑制蛋白(IκB)]和细胞因子[白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)、脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-α(LITAF)]的mRNA表达量,并以凝胶迁移试验(EMSA)方法检测淋巴细胞核蛋白中NF-κB的含量。结果显示:PAMK可显著提高淋巴细胞中TLR4及其信号通路下游基因IKK、IκB与细胞因子IL-2、LITAF的mRNA表达量(P淋巴细胞中TLR4的mRNA表达量(P淋巴细胞中1型辅助性T细胞(Th1)分泌的细胞因子[IL-2(P>0.05)、IFN-γ(P0.05)]的表达,对2型辅助性T细胞(Th2)分泌的细胞因子(IL-4)的表达无显著促进作用(P>0.05);EMSA结果显示PAMK能促进转染和非转染淋巴细胞内NF-κB入核,使核蛋白中NF-κB的含量显著升高(P细胞核调控细胞因子的转录水平,进而调控雏鸡脾脏淋巴细胞免疫功能。

关键词：白术多糖脾脏淋巴细胞 RNA干扰 Toll样受体4 核因子-κB

葛根素对急性肝衰竭小鼠脾脏淋巴细胞亚型和肝脏炎症反应的影响

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临床和实验医学杂志 2022年第6期21卷 561-565页

作者：张伟李万军杜芬三二〇一医院感染科陕西汉中723000 三二〇一医院病理科陕西汉中723000 汉中职业技术学院护理学院陕西汉中723002

目的探究葛根素对急性肝衰竭(ALF)小鼠脾脏淋巴细胞亚型和肝脏炎症反应的影响。方法60只8~10周龄C57/BL6雄性小鼠按照随机数字表法分为对照组(正常小鼠,腹腔注射等量的0.9%氯化钠溶液),ALF组(ALF模型小鼠,腹腔注射等量的0.9%氯化钠溶液)... 详细信息

目的探究葛根素对急性肝衰竭(ALF)小鼠脾脏淋巴细胞亚型和肝脏炎症反应的影响。方法60只8~10周龄C57/BL6雄性小鼠按照随机数字表法分为对照组(正常小鼠,腹腔注射等量的0.9%氯化钠溶液),ALF组(ALF模型小鼠,腹腔注射等量的0.9%氯化钠溶液),葛根素治疗组(ALF模型小鼠,腹腔注射100 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量的葛根素),每组各20只,持续治疗10 d。脾脏和胸腺称重计算小鼠的脾脏和胸腺指数;通过稀释后的小鼠血清的吸光度值计算血清半数溶血值(HC50);MTT测定小鼠外周血中T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定小鼠血清细胞因子[γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-17A和IL-10]水平;全自动Aeroset化学分析仪评估小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBil)水平;蛋白质印迹法检测小鼠肝组织信号传导子和转录活化子1(STAT1)、STAT3和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的蛋白表达。结果ALF组小鼠的脾脏指数和胸腺指数较对照组降低,差异均有统计学意义(P脾脏指数和胸腺指数较ALF组升高,差异均有统计学意义(P淋巴细胞和B淋巴细胞增殖较对照组降低,差异均有统计学意义(P淋巴细胞和B淋巴细胞增殖较ALF组升高,差异均有统计学意义(P脾脏淋巴细胞亚型的促炎性免疫反应、减少肝细胞凋亡,并有助于重建STAT1和STAT3信号之间的平衡,从而对ALF的肝损伤发挥保护作用。

关键词：小鼠急性肝衰竭葛根素脾脏淋巴细胞炎症反应

脱氧雪腐镰刀菌烯醇与玉米赤霉烯酮联合暴露对体外培养鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态的影响

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动物营养学报 2017年第8期29卷 2836-2842页

作者：任志华王亚超邓俊良四川农业大学动物医学院成都611130 西南科技大学绵阳621010

本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与玉米赤霉烯酮与(ZEA)联合暴露对体外培养鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态的影响。分别以0.012 50μg/mL DON+0.006 25μg/mL ZEA、0.050μg/mL DON+0.025μg/mL ZEA、0.2μg/mL DON+0.1μg/mL ZEA、0.... 详细信息

本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与玉米赤霉烯酮与(ZEA)联合暴露对体外培养鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态的影响。分别以0.012 50μg/mL DON+0.006 25μg/mL ZEA、0.050μg/mL DON+0.025μg/mL ZEA、0.2μg/mL DON+0.1μg/mL ZEA、0.8μg/mL DON+0.4μg/mL ZEA对体外培养鸡脾脏淋巴细胞进行联合暴露培养,48 h后测定细胞膜ATP酶(Ca^(2+)-ATP酶、Na^+/K^+-ATP酶)活性以及细胞内pH、Ca^(2+)水平和钙调蛋白(CaM)的mRNA表达水平。同时设不添加毒素的空白对照组。结果表明:添加毒素的各试验组间,细胞内Ca^(2+)水平、CaM mRNA表达水平随毒素浓度的升高而增加,且添加毒素的各试验组均显著或极显著高于空白对照组(P细胞内pH以及细胞膜Ca^(2+)-ATP酶与Na^+/K^+-ATP酶活性均随毒素浓度的升高而降低,且添加毒素的各试验组均显著或极显著低于空白对照组(P脾脏淋巴细胞内酸化、离子平衡失调等一系列细胞内环境稳态失衡,且呈剂量依赖性。

关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇玉米赤霉烯酮联合暴露脾脏淋巴细胞内环境稳态

DON、ZEA联合染毒对体外培养鸡脾脏淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的影响

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浙江农业学报 2018年第7期30卷 1110-1115页

作者：张卓辜彦霏阳莎莎王亚超邓俊良任志华四川农业大学动物医学院四川成都611130 西南科技大学四川绵阳621010

旨在研究DON、ZEA联合染毒对体外培养鸡脾脏淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的影响。DON、ZEA联合染毒剂量为0.012 5μg·mL^(-1)和0.006 25μg·mL^(-1)、0.050μg·mL^(-1)和0.025μg·mL^(-1)、0.2μg·mL^(-1)和0.1μg·mL^(-1)、0.8μg·mL^(-1)和0.4μg·mL^(-1),进行DON、ZEA联合染毒48 h对鸡脾脏淋巴细胞上清液IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ含量及其mRNA表达的影响。结果表明,各染毒组细胞上清液IL-10和IFN-γ蛋白含量,细胞内IL-2、IL-4和IL-10 mRNA水平随毒素剂量的升高而增加(P细胞上清液IL-2和IL-4蛋白含量均随毒素浓度的升高而降低(P细胞内IFN-γmRNA表达量均随毒素浓度的升高而先升高后降低(P细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ分泌失衡,且呈剂量依赖性;DON、ZEA联合染毒鸡脾淋巴细胞上调或下降促炎性细胞因子的水平;Th1和Th2细胞因子平衡失调,因此造成细胞免疫损伤,从而对细胞产生毒性。

关键词： DON ZEA 联合染毒脾脏淋巴细胞细胞因子