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生理科学进展 2003年第2期34卷 142-143页

作者：王晓静辛华张衡朱庆均山东大学医学院细胞生物学研究所山东大学医学院生理学研究所济南250012

近十多年来 ,人们对神经干细胞的研究进展迅速。本文从生长因子EGF和bFGF的反应性、分化特点、临床应用前景三个方面来综述脊髓神经干细胞的研究进展。

关键词：脊髓神经干细胞生长因子分化临床应用

脊髓神经干细胞在Sapeptide材料上增殖与分化的研究

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中华创伤杂志 2005年第9期21卷 679-683页

作者：侯天勇伍亚民龙在云第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第三研究室重庆400042

目的观察脊髓神经干细胞在Sapeptide材料上的增殖和分化情况,并对分化的细胞进行一定功能检测,探讨其细胞假体在脊髓损伤中应用的可能性。方法观察塑形的Sapeptide材料,将培养的脊髓神经干细胞接种其上,然后鉴定干细胞并通过体积分数5%... 详细信息

目的观察脊髓神经干细胞在Sapeptide材料上的增殖和分化情况,并对分化的细胞进行一定功能检测,探讨其细胞假体在脊髓损伤中应用的可能性。方法观察塑形的Sapeptide材料,将培养的脊髓神经干细胞接种其上,然后鉴定干细胞并通过体积分数5%胎牛血清诱导分化,鉴定分化细胞的类型及比例,并与无材料的干细胞的分化情况相比较,最后对材料上的分化细胞进行缝隙连接蛋白32(CX32)和生长相关蛋白43(GAP-43)染色评价。结果Sapeptide材料在等渗盐水中可塑形,扫描电镜示具有规则的网状排列,脊髓神经干细胞在其上可增殖和分化,分化的细胞较无材料的差异无统计学意义(P>0.05),并且具有大量的CX32和GAP-43阳性细胞。结论脊髓神经干细胞在Sapeptide材料上增殖和分化良好,假体在脊髓损伤的修复中可能具有潜在的应用前景。

关键词：脊神经干细胞脊髓损伤修复 Sapeptide 脊髓神经干细胞诱导分化材料增殖生长相关蛋白

LINGO-1在脊髓神经干细胞分化过程中的表达特征及效应

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中国组织工程研究 2017年第33期21卷 5394-5399页

作者：许刚赵晨光孙玮琚芬袁华牟翔解放军新疆军区总医院全军骨科中心新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830000 空军军医大学第一附属医院康复医学科陕西省西安市710032

背景:研究LINGO-1在脊髓神经干细胞分化过程中的表达及效应对调控神经干细胞分化及修复脊髓损伤有着重要的意义。目的:观察LINGO-1在脊髓神经干细胞分化过程中的表达特征及生物学作用。方法:体外培养大鼠脊髓神经干细胞,并对培养细胞进... 详细信息

背景:研究LINGO-1在脊髓神经干细胞分化过程中的表达及效应对调控神经干细胞分化及修复脊髓损伤有着重要的意义。目的:观察LINGO-1在脊髓神经干细胞分化过程中的表达特征及生物学作用。方法:体外培养大鼠脊髓神经干细胞,并对培养细胞进行Nestin染色干性鉴定及诱导分化多能性鉴定。于分化第0天及第5天进行LINGO-1与Nestin(神经干细胞)、β-TubulinⅢ(神经元细胞)、GFAP(星形胶质细胞)及O4(少突胶质细胞)免疫荧光双染色,观察LINGO-1的表达特征。体外培养的大鼠脊髓神经干细胞分为对照组及干扰组,干扰组脊髓神经干细胞感染LINGO-1 sh RNA慢病毒下调LINGO-1表达,对照组脊髓神经干细胞感染Scramble-sh RNA慢病毒,于感染第5天免疫荧光染色检测神经元突起长度。结果与结论:(1)脊髓神经干细胞可以分化成为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞;(2)LINGO-1在脊髓神经干细胞及其分化的神经元、少突胶质细胞中表达,但不在星形胶质细胞中表达;(3)下调LINGO-1表达后,干扰组神经元突起长度较对照组明显增长,差异有显著性意义(P脊髓神经干细胞具有多项分化潜能,LINGO-1在脊髓神经干细胞及分化早期的神经元、少突胶质细胞中表达,但不在星形胶质细胞中表达。LINGO-1对分化后神经元突起生长具有负性调控作用。

关键词：干细胞神经干细胞 LINGO-1 脊髓神经干细胞克隆球突起新疆维吾尔自治区自然科学基金

胚胎大鼠脊髓神经干细胞体外培养和分化的研究

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中国修复重建外科杂志 2004年第4期18卷 247-249页

作者：王德华徐建光姜浩李继峰汪洋王劼周国民顾玉东复旦大学华山医院手外科上海200032 复旦大学医学院解剖与组织胚胎学教研室

目的　探讨脊髓源性神经干细胞的培养方法和体外分化特性。　方法　从孕龄 15天的胚胎大鼠脊髓组织中分离获得神经干细胞 ,采用含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的无血清限定性培养基培养并进行干细胞体外分化 ,细胞免疫荧光化... 详细信息

目的　探讨脊髓源性神经干细胞的培养方法和体外分化特性。　方法　从孕龄 15天的胚胎大鼠脊髓组织中分离获得神经干细胞 ,采用含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的无血清限定性培养基培养并进行干细胞体外分化 ,细胞免疫荧光化学方法鉴定分化结果。　结果　胚胎脊髓中可分离得到大量的神经干细胞 ,培养 10天左右可获得干细胞球 ;用细胞免疫荧光化学法鉴定干细胞分化 ,可见其中含有神经元和星形胶质细胞。　结论　无血清限定性培养基是脊髓源性神经干细胞的良好培养基 ;

关键词：胚胎大鼠脊髓神经干细胞体外培养分化研究免疫组织化学细胞培养

LINGO-1在脊髓神经干细胞分化中的表达及影响

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中国脊柱脊髓杂志 2017年第9期27卷 832-838页

作者：赵晨光许刚琚芬孙玮袁华牟翔空军军医大学第一附属医院康复医学科陕西省西安市710032 新疆军区总医院全军骨科中心新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830000

目的 :观察LINGO-1在大鼠脊髓神经干细胞(spinal cord derived neural stem cells,SpNSCs)分化过程中的表达特征及其对SpNSCs分化的影响。方法:分别在体外分离培养3只10周龄Fischer 344大鼠SpNSCs,培养至第3代对其进行干性Nestin表达鉴... 详细信息

目的 :观察LINGO-1在大鼠脊髓神经干细胞(spinal cord derived neural stem cells,SpNSCs)分化过程中的表达特征及其对SpNSCs分化的影响。方法:分别在体外分离培养3只10周龄Fischer 344大鼠SpNSCs,培养至第3代对其进行干性Nestin表达鉴定和观察在其分化过程中LINGO-1的表达量(分化第0、1、3、5天)。随后用包装好的LINGO-1 shRNA慢病毒及Scramble shRNA慢病毒感染SpNSCs,观察感染效率及对比感染后下调LINGO-1蛋白表达的效果。在确定LINGO-1 shRNA的下调效果后,将第4代SpNSCs分为干扰组及对照组,干扰组感染LINGO-1 shRNA慢病毒,对照组感染Scramble-sh RNA慢病毒,于分化5d后使用免疫荧光染色检测神经元及星形胶质细胞的比例。结果:体外分离培养的SpNSCs表达Nestin阳性。LINGO-1蛋白的积分光密度(integrated option density,IOD)在第0、1、3、5天分别为514±45、715±68、1017±92、654±61,LINGO-1从SpNSCs分化第1天起表达量上升,为第0天表达量的1.39倍,至分化第3天为第0天表达量的1.98倍,随后表达下降,至第5天为第0天表达量的1.36倍,以上4个时间点LINGO-1蛋白表达量有统计学差异(P90%,感染LINGO-1 shRNA慢病毒的SpNSCs的LINGO-1蛋白表达量为感染Scramble-sh RNA慢病毒Sp NSCs的26%。干扰组神经元分化比例为对照组的3.85倍,星形胶质细胞分化比例为对照组的0.65倍,两组神经元分化比例及星形胶质细胞分化比例的差异均有统计学意义(P神经细胞分化,减少其向星形胶质细胞分化。

关键词： LINGO-1 脊髓神经干细胞分化大鼠

出生后不同时间大鼠脊髓神经干细胞的培养特点

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基础医学与临床 2007年第4期27卷 455-456页

作者：王丰朱悦中国医科大学第一附属医院骨科辽宁沈阳110001

神经干细胞研究一直是神经科学领域的热点。目前国内外学者已经建立了神经干细胞的分离和培养技术。本研究分析大鼠出生后不同时间大鼠脊髓神经干细胞的培养特点，为应用神经干细胞积累经验。

关键词：脊髓神经干细胞培养技术同时间大鼠生后神经科学国内外

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胚胎脊髓神经干细胞的培养和鉴定

中国临床康复 2002年第22期6卷 3334-3335,I001页

作者：刘媛龙在云伍亚民廖维宏解放军第三军医大学大坪医院重庆400042

目的从胚胎脊髓组织中分离、培养并鉴定神经干细胞。方法采用无血清培养和单克隆培养的方法获得大量细胞克隆并对其进行诱导分化,同时应用免疫细胞化学的方法对上述克隆及分化后的细胞进行鉴定。结果从脊髓分离的细胞克隆具有较强的增... 详细信息

目的从胚胎脊髓组织中分离、培养并鉴定神经干细胞。方法采用无血清培养和单克隆培养的方法获得大量细胞克隆并对其进行诱导分化,同时应用免疫细胞化学的方法对上述克隆及分化后的细胞进行鉴定。结果从脊髓分离的细胞克隆具有较强的增殖能力,呈Nestin抗原阳性;对其诱导后能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论所获得的细胞具有自我更新和多向分化的潜能,是脊髓来源的神经干细胞。

关键词：胚胎脊髓神经干细胞培养鉴定

基因重组BDNF感染脊髓神经干细胞及其表达

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中国矫形外科杂志 2005年第17期13卷 1326-1328页

作者：曹延林罗卓荆叶正旭第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032

[目的]探讨脊髓神经干细胞(NSC)被重组逆转录病毒感染后目的基因的表达。[方法]用人脑源性神经生长因子(hBDNF)基因重组逆转录病毒上清液感染脊髓NSCs,取感染后的NSCs培养液(BDNF条件培养液)培养背根神经结(DRG)和小鼠嗜铬瘤细胞(PC12细... 详细信息

[目的]探讨脊髓神经干细胞(NSC)被重组逆转录病毒感染后目的基因的表达。[方法]用人脑源性神经生长因子(hBDNF)基因重组逆转录病毒上清液感染脊髓NSCs,取感染后的NSCs培养液(BDNF条件培养液)培养背根神经结(DRG)和小鼠嗜铬瘤细胞(PC12细胞)检测培养液中BDNF活性;酶联免疫吸附反应(ELISA)检测培养液中BDNF浓度;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测BDNFmRNA。[结果]感染hBDNF基因重组逆转录病毒的NSCs上清中有BDNF的表达,经hBDNF条件培养液培养的PC12细胞,数量增多,突起明显变长。经hBDNF条件培养液培养背根神经结,神经元突起伸出,逐渐增多,长度大于神经节直径。[结论]脊髓NSC可直接作为基因靶细胞,被BDNF基因重组逆转录病毒有效感染而表达和分泌有生物学活性的BDNF。

关键词：脊髓神经干细胞脑源性神经生长因子基因转染表达基因重组逆转录病毒脊髓神经干细胞 hBDNF 病毒感染后神经干细胞(NSC)

小鼠脊髓神经干细胞分离培养、分化及其影响因素研究

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小鼠脊髓神经干细胞分离培养、分化及其影响因素研究

作者：袁婧昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]神经退行性疾病是由神经元或其髓鞘的丧失所致的疾病,随着时间的推移而加重,最终导致功能障碍。因其发病机理复杂,其病理机制至今尚未阐明,临床治疗尚无肯定而有效的措施。神经干／祖细胞治疗为这类疾病治疗带来了希望,但在干细... 详细信息

[目的]神经退行性疾病是由神经元或其髓鞘的丧失所致的疾病,随着时间的推移而加重,最终导致功能障碍。因其发病机理复杂,其病理机制至今尚未阐明,临床治疗尚无肯定而有效的措施。神经干／祖细胞治疗为这类疾病治疗带来了希望,但在干细胞临床应用之前,需要我们清楚干细胞增殖和分化的调控机制及干细胞定向分化策略,从而使之向指定的方向分化。调控干细胞增殖信号通路中,Rho/Rho(Ras homologue)激酶信号传导通路是焦点之一。本实验选择Rho激酶抑制剂Y-27632将其运用于小鼠脊髓神经干细胞的培养和分化之中,研究Rho激酶抑制剂Y-27632对于小鼠脊髓源性神经干细胞增殖及分化的影响。[方法]选择13-15天的C57胚胎期小鼠,分离获得脊髓组织,使用胰酶消化并悬浮培养后获得神经干细胞,用免疫荧光染色法鉴定带有神经干细胞特异标记物Nestin和Sox2的细胞,将所获得的神经干细胞分为实验组与对照组,在实验组中加入Y-27632 (10μoml/L),研究Y-27632对神经千细胞增殖、分化的作用。在神经干细胞培养体系中,持续5-7代加入Y-27632,通过免疫荧光染色法、定量RT-PCR及Western-Blot蛋白水平检测法等,检测神经干细胞干性标记、分化细胞标记以及BrdU与Nestin双阳性的细胞。在神经干细胞含0.5%FBS的分化培养体系中加入Y-27632,用免疫荧光染色法、western blo、 RT-PCR检测神经干细胞及其各分化细胞的情况,分析Y-27632对神经干细胞分化的影响。[结果]从13-15天胚胎期小鼠脊髓中分离培养获得神经干细胞,神经干细胞特异性标记Nestin(巢蛋白)阳性细胞纯度高于90%。通过免疫荧光染色法、Western Blot和RT-PCR等方法,从细胞数量、蛋白表达水平和RNA水平比较发现：对悬浮培养的神经干细胞,Y-27632抑制其增殖能力而促进其分化。为进一步验证Y-27632促进分化的作用,在神经干细胞自发分化体系中加入Y-27632。Y-27632促进神经干细胞分化为GFAP阳性细胞。[结论]Y-27632 (10μoml/L)对小鼠脊髓神经干细胞的增殖无促进作用;Y-27632有促进小鼠脊髓神经干细胞向星形胶质细胞分化的作用。[目的]长期以来人们认为哺乳动物成体神经细胞及神经通路出生后就固定不变的,中枢神经系统脑及脊髓受损将导致永久性的功能损失。然而,1992年Reynolds成功从成年小鼠纹状体中培养出神经干细胞及1996年脊髓神经干细胞的成功培养,说明出生以后神经再生还持续存在,干细胞治疗为神经退行性疾病治愈提供了可能。人们对神经干细胞的研究经历了从胚胎干细胞、胚胎时期培养获得的神经干细胞到从成体动物神经组织内直接获得神经干细胞的研究过程。对前二者的研究,由于不可避免的移植排斥反应,应用时需大剂量的免疫抑制剂。而从成体动物体内获得神经干细胞则没有此方面的问题。但脊髓神经干细胞的培养较脑源性神经干细胞培养困难。成体脊髓长度较长,含有大量的神经纤维及髓鞘,本实验将研究成体脊髓各节段的神经干细胞情况,系统比较各节段神经干细胞的差异,寻找能更有效的培养出神经干细胞的方法。[方法]选择8-12周的C57成年小鼠,分离获得脊髓组织,按照颈、胸、腰、骶尾分为四段,经酶消化并培养后获得神经干细胞,用免疫荧光染色法鉴定带有神经干细胞特异标记物Nestin和Sox2的细胞,并进行计数比较;分别进行传代后,比较倍增数。各节段的神经干细胞予以含0.5%FBS的分化培养基自然分化7天后,用免疫荧光染色法观察形态。将小鼠的脊髓组织各节段分别进行提取蛋白及RNA,通过Western Blot、 RT-PCR检测比较其神经干细胞含量。对脊髓各节段经冰冻切片后,行免疫荧光染色后,比较神经干细胞的数量情况。[结果]从8-12周的C57成年小鼠中,分离脊髓组织经酶消化培养,成功获得神经干细胞,经免疫荧光染色法鉴定带有神经干细胞特异标记物Nestin和Sox2的细胞,计数后比较培养的神经干细胞数量：胸段细胞传代倍增数上比较：胸段脊髓组织不同节段在蛋白及RNA水平比较神经干细胞含量：颈段脊髓组织进行切片染色后细胞计数神经干细胞含量：颈段脊髓各节段干细胞含量：颈段细胞培养的有效性上,骶尾段含有的神经纤维及髓鞘较颈、胸、腰段的少,神经干细胞含量最多,体外培养的神经干细胞也最多。

关键词：脊髓神经干细胞 Y-27632 增殖分化 GFAP 成体 Nestin 脊髓节段

脊髓神经干细胞定向分化为神经元过程中生长相关蛋白-43和钙调蛋白的表达

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中华实验外科杂志 2006年第7期23卷 880-880页

作者：张伟国杜喆陶凯朴成哲沈阳医学院奉天医院骨一科 110024 沈阳医学院组胚学教研室

我们通过本实验在分离培养大鼠脊髓神经干细胞（NSCs）的基础上，研究其在定向分化为神经元过程中生长相关蛋白-43（GAP-43）和钙调蛋白（CaM）的表达及两者相关性，为神经干细胞的研究和应用奠定理论基础。

关键词：生长相关蛋白-43 脊髓神经干细胞细胞定向分化钙调蛋白神经元分离培养