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秦川牛PLIN2基因参与脂滴形成调节机制的研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2023年第4期51卷 1-7页

作者：李佩韦昝林森陕西省动物研究所陕西西安710032 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

【目的】研究PLIN2基因对秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴形成的功能。【方法】以秦川牛原代脂肪细胞为试验材料,采用高干扰效率的si-PLIN2及对照组si-NC,超表达PLIN2基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-PLIN2及对照pcDNA3.1(+)-empty vector(pc... 详细信息

【目的】研究PLIN2基因对秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴形成的功能。【方法】以秦川牛原代脂肪细胞为试验材料,采用高干扰效率的si-PLIN2及对照组si-NC,超表达PLIN2基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-PLIN2及对照pcDNA3.1(+)-empty vector(pcDNA3.1(+)-EV),转染秦川牛脂肪细胞并进行相关基因mRNA及蛋白水平表达量验证,并对转录因子C/EBPα是否能结合在PLIN2基因启动子区域进行验证。【结果】si-PLIN2处理组中CREB基因表达量无明显变化,C/EBPβ和C/EBPα基因mRNA水平表达量与si-NC对照组相比分别出现显著或极显著下调。与对照组pcDNA3.1(+)-EV相比,过表达组pcDNA3.1(+)-PLIN2 CREB相对表达量极显著上调,C/EBPα和C/EBPβ基因相对表达量上调,但差异不显著。Western blot蛋白表达水平检测发现,si-PLIN2中磷酸化水平CREB(phospho-CREB,p-CREB)、C/EBPβ、C/EBPα的表达量显著低于对照组si-NC,过表达组上述转录因子表达量未出现明显上调。ChIP试验结果表明,转录因子C/EBPα可以结合在PLIN2基因启动子区域,并调控秦川牛PLIN2基因的表达。【结论】下调秦川牛PLIN2基因可反馈抑制上游cAMP-PKA信号通路p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα 3个转录因子的表达,从而抑制秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴生成。

关键词：秦川牛 PLIN2基因脂滴形成调控机制

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白藜芦醇通过ESR1-PI3K信号通路抑制3T3-L1细胞脂滴形成

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南方农业学报 2024年第7期55卷 1916-1924页

作者：王倩杨豹李银蒋钦杨黄艳娜广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室广西南宁530004

【目的】探究白藜芦醇(RES)与雌激素受体1(ESR1)对3T3-L1细胞脂滴形成的影响及调控机制,为RES抑制脂肪沉积潜在机制的研究提供理论依据。【方法】以3T3-L1细胞为试验材料,设计并合成针对ESR1基因的小干扰RNA(siRNA),在3T3-L1细胞培养基... 详细信息

【目的】探究白藜芦醇(RES)与雌激素受体1(ESR1)对3T3-L1细胞脂滴形成的影响及调控机制,为RES抑制脂肪沉积潜在机制的研究提供理论依据。【方法】以3T3-L1细胞为试验材料,设计并合成针对ESR1基因的小干扰RNA(siRNA),在3T3-L1细胞培养基中添加RES,以添加等量二甲基亚砜(DMSO)为对照,利用油红O染色、实时荧光定量PCR检测、Western blotting检测等分析RES与ESR1对3T3-L1细胞分化的影响。【结果】与对照组相比,RES能显著(P脂滴的生成,极显著(P脂肪分解关键基因ATGL相对表达量,极显著下调(P脂肪合成关键基因CEBPα、PPARγ及FAS相对表达量。RES能极显著(P脂滴的生成,极显著(P脂滴与未加入RES相比无显著差异(P>0.05,下同),ATGL、CEBPα、PPARγ及FAS基因相对表达量也均无显著差异。干扰ESR1基因能极显著(P脂肪分解关键基因ATGL相对表达量,下调脂肪合成关键基因CEBPα、PPARγ及FAS相对表达量,从而抑制3T3-L1细胞脂滴形成。

关键词：白藜芦醇雌激素受体1(ESR1) PI3K信号通路脂滴形成

胰岛素对人肾小管上皮细胞SREBP-1、FAS表达及脂质代谢的时效性研究

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中国药理学通报 2010年第4期26卷 517-521页

作者：郝军刘淑霞刘青娟赵松郑书深姚芳刘巍段惠军河北医科大学病理学教研室河北石家庄050017

目的探讨胰岛素对人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubularepithelial cells line,HKCcells)固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)和脂肪酸合成酶(fat acid synthase,FAS)表达以及细胞内脂滴形成的时效性影响。方法给予人肾小管上皮细胞100nmol·L-1胰岛素刺激并根据刺激时间分为0、2、4、6、12和24h组。SREBP-1和FAS mRNA采用RT-PCR检测,SREBP-1蛋白的表达用免疫细胞化学和Western blot检测,细胞内脂滴检测采用油红O染色。结果和0h组相比,2h组HKC细胞未见SREBP-1和FAS mRNA表达变化,而4、6、12h组HKC细胞SREBP-1和FAS mRNA表达均升高,其中6h组升高最明显,分别是0h对照组的3.578倍和4.272倍,差异有统计学意义。Western blot检测显示4、6和12h组HKC细胞SREBP-1蛋白的前体和成熟片段表达均较0h和2h组增强,其中也是6h组表达最强,前体和成熟片段分别是0h组的4.106倍和5.167倍。免疫细胞化学技术显示SREBP-1蛋白在人肾小管上皮细胞株中定位于细胞质,在4、6和12h组HKC内其表达明显强于0、2和24h组。油红O染色提示胰岛素刺激6h后HKC细胞内可见明显红染脂滴颗粒,而其他各组HKC细胞未见着色。结论胰岛素呈时间依赖性引起人肾小管上皮细胞SREBP-1和FAS的上调,且作用在6h达到高峰,并最终导致细胞内脂滴沉积,这可能是代谢综合征引起肾脏脂质沉积的重要机制之一。

关键词：胰岛素人肾小管上皮细胞固醇调节元件结合蛋白-1 脂肪酸合成酶脂滴形成时效性影响

西农萨能羊47kD尾部相互作用蛋白基因(TIP47)的cDNA克隆、序列结构分析与组织表达

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农业生物技术学报 2011年第5期19卷 864-872页

作者：郝娟罗军王紫骞赵旺生孙雨婷钟瑜李君西北农林科技大学动物科技学院陕西省农业分子生物学重点实验室

47kD尾部相互作用蛋白基因(tail-interacting protein47,TIP47)是影响脂滴形成和代谢的重要基因。本实验以西农萨能羊(Capra hircus)的乳腺组织为研究材料,采用RT-PCR和RACE,克隆了山羊TIP47基因的cDNA全长序列。结果得到TIP47基因cDNA... 详细信息

47kD尾部相互作用蛋白基因(tail-interacting protein47,TIP47)是影响脂滴形成和代谢的重要基因。本实验以西农萨能羊(Capra hircus)的乳腺组织为研究材料,采用RT-PCR和RACE,克隆了山羊TIP47基因的cDNA全长序列。结果得到TIP47基因cDNA序列全长1906bp(GenBank收录号为:HQ846827),包括5’UTR82bp,完整编码区1314bp及3’UTR510bp,编码蛋白质的氨基酸数为437,分子量47.36kD,等电点(pI)5.14。对TIP47基因的核苷酸和氨基酸序列分析发现,山羊的TIP47与GenBank中牛(Bos taurus)、人(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)和猪(Sus scrofa)的TIP47相似性较高。蛋白质结构分析显示,TIP47不存在信号肽序列和跨膜结构;疏水性分析发现,其N端疏水性较强,中间靠近C端部分亲水性较强;三级结构分析发现,其C端呈大写的L形;该基因的遗传距离分析发现,山羊与牛的亲缘关系最近,其次是猪和人。通过RT-qPCR技术对TIP47基因进行了组织表达分析,发现所检测的12个组织中均有TIP47mRNA的表达,其中乳腺组织中表达最丰富,且远远高于其它组织,脾脏、肺脏次之,肌肉相对最少。研究结果提示,TIP47基因可能在乳腺组织中对脂滴的形成代谢过程有重要作用。

关键词：西农萨能羊 47kD尾部相互作用蛋白(TIP47) 脂滴形成基因克隆序列结构分析组织表达

硒甲基硒代半胱氨酸对THP-1细胞源性泡沫细胞炎症因子表达的影响及其机制

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中国病理生理杂志 2024年第12期40卷 2218-2225页

作者：陈丹袁林高星星夏燕张宗星李玮怡汪莲开湖北民族大学风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室湖北恩施445000 湖北省肾脏病临床医学研究中心湖北恩施445000 湖北民族大学医学部湖北恩施445000

目的:探究硒甲基硒代半胱氨酸(L-SeMSC)抑制人单核白血病细胞THP-1源性巨噬细胞泡沫化的作用机制。方法:先用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞源性巨噬细胞,再用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型。CCK-8法和流式细... 详细信息

目的:探究硒甲基硒代半胱氨酸(L-SeMSC)抑制人单核白血病细胞THP-1源性巨噬细胞泡沫化的作用机制。方法:先用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞源性巨噬细胞,再用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型。CCK-8法和流式细胞术检测不同浓度L-SeMSC对THP-1细胞活性和凋亡的影响;油红O染色观察脂滴的沉积;并通过qRT-PCR法检测白细胞介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、脂肪酸转位酶(FAT/CD36)、溶质载体家族27成员4(SLC27A4)和超氧化物歧化酶1(SOD1)的mRNA水平;Western blot检测IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、基质金属蛋白酶9(MMP9)及核因子κB(NF-κB)信号相关蛋白水平。结果:25~200μmol/L的L-SeMSC增加细胞活力,不同浓度的L-SeMSC对细胞凋亡没有显著影响。与ox-LDL组相比,LSeMSC组细胞脂滴沉积明显减少;CD36、SLC27A4、IL-1β和ICAM-1的mRNA水平显著降低,同时抗氧化酶SOD1的mRNA水平明显增加;IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP9及磷酸化p65(p-p65)蛋白水平均明显减少。结论:L-SeMSC可能具有抗动脉粥样硬化作用,其通过降低炎性因子的水平、抑制泡沫化的发生、减少巨噬细胞脂滴的形成,相关抗炎机制可能主要是通过调控NF-κB信号通路中的关键蛋白表达。

关键词：硒甲基硒代半胱氨酸动脉粥样硬化炎症因子脂滴形成

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Seipin与先天性全身脂肪营养不良

重庆医科大学学报 2013年第1期38卷 1-4页

作者：刘国庆崔鑫谢元北京大学医学部心血管研究所、教育部分子心血管学重点实验室北京100191

人类Seipin基因又称BSCL2,定位于染色体11q13,由Magre等在2001年通过定位克隆的方法从9个先天性全身脂肪营养不良(congenital generalized lpodystrophy,CGL)的家系中筛选出来。它编码的内质网固有蛋白Seipin在脂肪组织、神经系统中高... 详细信息

人类Seipin基因又称BSCL2,定位于染色体11q13,由Magre等在2001年通过定位克隆的方法从9个先天性全身脂肪营养不良(congenital generalized lpodystrophy,CGL)的家系中筛选出来。它编码的内质网固有蛋白Seipin在脂肪组织、神经系统中高表达。Seipin基因的无效突变与Ⅱ型CGL密切相关,该患者缺失几乎全部的脂肪组织是最严重的一类脂肪营养不良。本文综述了Seipin基因的结构与分布以及该基因缺陷时引起的Ⅱ型CGL的特点和临床表现。并从脂肪细胞分化和脂滴形态两方面探讨了Seipin在Ⅱ型CGL发病机制中的作用。

关键词： Seipin(BSCL2) 先天性全身性脂肪营养不良脂肪分化脂滴形成脂滴形态

固醇调节元件结合蛋白基因的过表达对促进牛胎儿成纤维细胞脂肪形成的影响

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中国畜牧兽医 2013年第5期40卷 133-139页

作者：徐丽郭立平朱淼高雪张路培高会江李俊雅许尚忠中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193

为了研究固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding factor 1,SREBP1)基因的表达与细胞脂肪形成的关系,本研究构建了pEGFP-C1-SREBP1重组质粒,利用脂质体介导法将重组质粒pEGFP-C1-SREBP1及pEGFP-C1空质粒转染至牛胎儿... 详细信息

为了研究固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding factor 1,SREBP1)基因的表达与细胞脂肪形成的关系,本研究构建了pEGFP-C1-SREBP1重组质粒,利用脂质体介导法将重组质粒pEGFP-C1-SREBP1及pEGFP-C1空质粒转染至牛胎儿骨骼肌成纤维细胞培养48h,实时荧光定量PCR和Western blotting分析目标基因表达水平的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果发现,pEGFP-C1-SREBP1重组质粒转染细胞内SREBP1mRNA的表达水平显著高于空白对照组和阴性对照组(P脂肪合成,证实牛胎儿成纤维细胞中SREBP1表达和脂滴形成之间存在直接关系。

关键词：固醇调节元件结合蛋白过表达牛胎儿成纤维细胞脂滴形成质粒转染

黄芪甲苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂质代谢的作用

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实用医学杂志 2018年第24期34卷 4064-4067,4071页

作者：杨小颖胡芳韦晓虹 HEAN Povkanha 孙辽中山大学附属第五医院内分泌与代谢病科广东珠海519000

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠肝脏脂质代谢的影响。方法 5周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为正常饮食组、高脂高糖组、高脂高糖+AS-Ⅳ[30 mg/(kg·d)]组、高脂高糖+AS-Ⅳ[60 mg/(kg·d)]组、高脂高糖+AS-Ⅳ[120 mg/... 详细信息

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠肝脏脂质代谢的影响。方法 5周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为正常饮食组、高脂高糖组、高脂高糖+AS-Ⅳ[30 mg/(kg·d)]组、高脂高糖+AS-Ⅳ[60 mg/(kg·d)]组、高脂高糖+AS-Ⅳ[120 mg/(kg·d)]组。高脂高糖饮食构建NAFLD小鼠动物模型,同时用不同浓度的AS-Ⅳ[30、60、120 mg/(kg·d)]进行灌胃。正常饮食组给予等体积1%羧甲基纤维素(1%CMC)灌胃,每周测体质量、随机血糖,干预13周后,处死小鼠,留取并称量肝脏,采用H&E染色以及油红O染色检测小鼠肝脏脂质沉积情况。结果高脂高糖诱导的NAFLD小鼠较正常饮食组小鼠的体质量、肝脏湿重及随机血糖增加(P 0.05)。与正常饮食组相比,高脂高糖诱导的NAFLD小鼠肝脏脂滴形成增加(P 脂高糖组相比,不同浓度的AS-Ⅳ干预后,小鼠肝脏脂滴形成减少,以浓度为60 mg/(kg·d)的AS-Ⅳ组最明显(P 脂肪肝小鼠的肝脏脂质沉积。

关键词：黄芪甲苷Ⅳ 非酒精性脂肪肝高脂高糖饮食脂滴形成脂质沉积

SREBP-1基因过表达促进人肾小管上皮细胞甘油三酯形成

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中国组织化学与细胞化学杂志 2010年第3期19卷 252-256页

作者：郝军郑书深赵建德刘青娟赵松刘淑霞刘巍段惠军河北医科大学病理学教研室石家庄050017 河北三河市医院骨二科河北065200

目的 SREBP-1重组质粒转染人肾小管上皮细胞(HKC)检测SREBP-1基因表达和细胞内脂滴的关系。方法体外培养人肾小管上皮细胞并随机分为空白对照组、pcDNA3.1空质粒对照组和pcDNA3.1-SC1重组质粒转染组,采用阳离子脂质体法将SREBP-1特异性... 详细信息

目的 SREBP-1重组质粒转染人肾小管上皮细胞(HKC)检测SREBP-1基因表达和细胞内脂滴的关系。方法体外培养人肾小管上皮细胞并随机分为空白对照组、pcDNA3.1空质粒对照组和pcDNA3.1-SC1重组质粒转染组,采用阳离子脂质体法将SREBP-1特异性质粒pcDNA3.1-SC1及pcDNA3.1空质粒转染到细胞内并培养48小时,半定量RT-PCR和Westernblot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果 pcDNA3.1-SC1重组质粒转染的细胞内SREBP-1mRNA表达呈现明显升高,扩增条带积分光密度值分别是空白对照组和阴性对照组的6.158倍和4.194倍,SREBP-1蛋白也出现明显上调,条带积分光密度值为3.092±0.254。空白对照组和pcDNA3.1阴性对照组细胞内均未见有红染脂滴颗粒,而pcDNA3.1-SC1重组质粒转染组中出现了清晰的红染颗粒。结论 SREBP-1表达可增加人肾小管上皮细胞脂肪合成证实HKC细胞中SREBP-1表达和脂滴形成之间存在有直接关系。

关键词：固醇调节元件结合蛋白-1 人肾小管上皮细胞脂滴形成质粒转染