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牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导不同细胞分泌炎性细胞因子的差异性

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浙江大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 622-628,633页

作者：陈云芳严杰张迪亚陈莉丽浙江大学医学院附属第二医院口腔科浙江杭州310009 浙江省人民医院口腔科浙江杭州310014 浙江大学医学院病原生物学系浙江杭州310058

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(LPS),诱导人口腔上皮细胞KB和人牙龈成纤维细胞HGF-1及人单核-巨噬样细胞THP-1,分泌炎性细胞因子的能力及其差异。方法:采用酚水法提取PgATCC33277株的脂多糖(Pg-LPS)。采... 详细信息

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(LPS),诱导人口腔上皮细胞KB和人牙龈成纤维细胞HGF-1及人单核-巨噬样细胞THP-1,分泌炎性细胞因子的能力及其差异。方法:采用酚水法提取PgATCC33277株的脂多糖(Pg-LPS)。采用鲎试验和红外光谱对提取的Pg-LPS进行鉴定。采用ELISA试剂盒,定量检测不同浓度和时间Pg-LPS作用的上述3种细胞培养物上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8变化水平。实验中采用商品化大肠杆菌O111:B4脂多糖(E-LPS)为对照。结果:Pg-LPS和E-LPS凝固鲎试剂所需最低浓度均为15ng/ml,其红外光谱也极为相似。在Pg-LPS或E-LPS作用下,HGF-1细胞分泌的TNF-α和IL-1β水平呈单峰形增高(P<0.01),但THP-1细胞为持续性升高(P<0.01)。Pg-LPS或E-LPS具有促HGF-1和THP-1细胞持续性增强IL-6分泌的作用(P<0.01)。Pg-LPS和E-LPS均可诱导THP-1细胞增强IL-8的分泌(P<0.01),但对HGF-1细胞仅Pg-LPS有促IL-8分泌的效应(P<0.01)。Pg-LPS和E-LPS均不能诱导KB细胞分泌上述细胞因子。结论:Pg-LPS有很强的促靶细胞分泌多种炎性细胞因子的生物学活性,从而引发初始的局部炎症反应。Pg-LPS致炎作用与E-LPS相似,但诱导不同炎性细胞因子的模式颇有差异。KB细胞不能作为LPS致炎作用的效应靶细胞。

关键词：脂多糖类/药理学牙龈卟啉单胞菌致炎作用细胞因子

槲皮素对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的影响及其机制

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医学临床研究 2021年第5期38卷 647-652页

作者：马丽肖敏务军冯鹏玖董良黄一丹广西壮族自治区柳州市人民医院广西柳州545006 广西壮族自治区柳州市中医院麻醉科广西柳州545006 遵义医科大学附属医院麻醉科广西遵义563000

[目的]探讨槲皮素(quercetin,QUE)对脂多糖(Lipopolyaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的影响及其机制。[方法]将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组(每组15只):正常对照组(CON组)、QUE单独处理组(QUE组)、LPS模型组(LPS组)和QUE治疗组(LPS+QUE组)。采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)构建小鼠ALI模型;CON组及QUE组给予等量生理盐水。QUE组只预先接受灌胃法给予QUE(25 mg/kg);LPS+QUE组在给予LPS之前2h预先灌胃QUE 25 mg/kg;CON组和LPS组灌胃等量二甲基亚碸(dimethylsulfoxide,DMSO)。采用HE染色检测肺组织病理学改变,蛋白质免疫印迹检测肺组织双链RNA依赖的蛋白激酶ER激酶(PERK)和细胞凋亡途径关键蛋白的表达。通过检测肺组织丙二醛(MDA)/谷胱甘肽(GSH)改变反映氧化应激水平,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β]及肺组织中髓过氧化物(MPO)活性反映炎症程度。[结果]QUE单独处理(QUE组)对小鼠肺组织的组织病理学和炎症指标无影响。腹腔注射LPS可诱导小鼠肺组织病理损伤,增加BALF中细胞总数和中性粒细胞的数量,升高MPO活性,同时增加BALF中TNF-α、IL-6和IL-1β等炎症因子含量。而给予QUE预处理(LPS+QUE组),可显著性减轻上述改变;WB检测结果发现,QUE预处理可抑制内质网应激PERK信号途径相关蛋白的表达,减轻细胞凋亡途径关键蛋白caspase3的表达。[结论]槲皮素可通过抑制内质网应激、氧化应激及炎症反应,减轻LPS诱导的小鼠ALI,其机制与抑制内质网应激PERK信号途径有关。

关键词：急性肺损伤小鼠,裸槲皮素/治疗应用脂多糖类/药理学

促血小板生成素在小胶质细胞炎症模型中的表达及与NF-κB的关系

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中国误诊学杂志 2011年第13期11卷 3033-3035页

作者：李乔俊王卉王建文解放军总医院第一附属医院儿科北京100048 解放军总医院儿内科 100001

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预小胶质细胞后细胞内NK-κB及促血小板生成素(thrombopoietin,TPO)的分泌。方法将BV2细胞分为6组:(1)空白12 h组;(2)LPS 0.5μg/ml 12 h组;(3)LPS 1μg/ml12 h组;(4)空白24 h组;(5)LPS 0.5μg/ml 24 h组;(6)LPS 1μg/ml 24 h组。采用ELISA法检测细胞内NF-κB和TPO的表达;实时荧光定量PCR法检测细胞内NF-κB及TPO mRNA的表达水平。结果 NF-κB和TPO的表达和mRNA均较空白组升高,且12 h组高于24 h组(P<0.05)。TPO与NF-κB的表达呈显著的正相关(P<0.01)。结论 LPS干预小胶质细胞后NF-κB和TPO表达升高,参与炎症、凋亡和神经元保护等多种调控机制。

关键词：脂多糖类/药理学小神经胶质细胞/药物作用血小板生成素/代谢炎症/代谢 NF-κB/代谢

脂多糖通过NF-κB信号途径上调大鼠腹膜间皮细胞表达IP-10

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中国医师杂志 2018年第7期20卷 990-994,998页

作者：张云芳冯俊霞赵世莉徐嘉琪李红艳广州市花都区人民医院肾病学科 510800

目的观察脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞表达干扰素诱导蛋白(IP)-10的情况及核因子(NF)KB信号通路在其中的作用。方法分离及培养大鼠腹膜间皮细胞。于脂多糖不同浓度(0、10、100、1 000、10 000 ng/ml)作用3 h及脂多糖(100 ng/ml)作用不... 详细信息

目的观察脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞表达干扰素诱导蛋白(IP)-10的情况及核因子(NF)KB信号通路在其中的作用。方法分离及培养大鼠腹膜间皮细胞。于脂多糖不同浓度(0、10、100、1 000、10 000 ng/ml)作用3 h及脂多糖(100 ng/ml)作用不同时间点(0、1、3、6、12、24、48 h)收集细胞;脂多糖(100 ng/ml)或BAY 11-7085(一种IκBα的磷酸化抑制剂)不同浓度(5μmol/L)预处理2 h加脂多糖,作用3 h后收集细胞;采用RT-PCR方法检测IP-10 mRNA表达。采用蛋白印迹检测NF-κB p65(p65)蛋白表达,采用ELISA方法测定IP-10蛋白的表达。结果与常规培养基对照组相比,10 ng/ml脂多糖组IP-10 mRNA表达显著升高(P 脂多糖组最高,但与10 ng/ml脂多糖组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。脂多糖(100 ng/ml)作用下,IP-10 mRNA表达从1 h开始升高,3 h达到高峰,之后逐渐降低。常规培养的大鼠腹膜间皮细胞结构性表达p-p65蛋白;加入脂多糖后,p-p65蛋白表达显著增加,其中30 min至1 h表达最强,之后逐渐降低,至2 h仍显著高于常规培养组(P 脂多糖诱导的IP-10基因和蛋白表达显著降低(P脂多糖以时间依赖和浓度依赖模式上调IP-10的表达。NF-κB信号途径参与调节脂多糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞IP-10的表达。

关键词：脂多糖类/药理学腹膜/细胞学上皮/药物作用趋化因子CXCLIO/代谢 NF-κB 大鼠

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脂多糖对人皮肤成纤维细胞胶原代谢的影响

中国医师杂志 2012年第1期14卷 1-4页

作者：李凤玉王舒琦贾国洪万立杨红明河北省张家口解放军第二五一医院肿瘤科075000

目的探讨脂多糖（1ipopolysaccharide，LPS）对人皮肤成纤维细胞胶原代谢的影响，以了解LPS在增生性瘢痕形成中的生物学作用。方法取正常皮肤行成纤维细胞培养后，分为1个对照组及6个实验组。实验组分别与终浓度为0．005、0．010、0．05... 详细信息

目的探讨脂多糖（1ipopolysaccharide，LPS）对人皮肤成纤维细胞胶原代谢的影响，以了解LPS在增生性瘢痕形成中的生物学作用。方法取正常皮肤行成纤维细胞培养后，分为1个对照组及6个实验组。实验组分别与终浓度为0．005、0．010、0．050、0．100、0．500和1．000μg／ml大肠杆菌LPS（Ecoli055：B5）培养，对照组DMEM培养。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及胶原酶mRNA的表达，并以同一个体相同代数的瘢痕组织成纤维细胞做对照。结果与对照组比较，LPS刺激浓度在0．005-0．1μg／ml时，促进正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达（0．323±0．041，0．303±0．063，0．391±0．071，0．344±0．086，0．488±0．059，0．401±0．087，0．616±0．107，0．434±0．084，0．823±0．092，0．542±0．082），抑制胶原酶mR-NA表达（0．598±0．068，0．556±0．049，0．441±0．043，0．372±0．083，0．260±0．027），且呈一定的剂量依赖性；当LPS刺激浓度为0．5μ／ml，上述作用下降（0．451±0．063，0．374±0．072，0．360±0．062）；而当LPS刺激浓度到达1．0μg/ml时，抑制正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达（0．162±0．025，0．171±0．061），促进胶原酶mRNA表达（0．444±0．114）。LPS刺激浓度在0．1μg／ml时，成纤维细胞（0．823±0．092，0．542±0．082，0．260±0．027）Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达与同一个体增生性瘢痕组织成纤维细胞（0．829±0．049，0．569±0．038，0．277±0．059）近似。结论LPS对人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA的表达，其直接调节可能是参与增生性瘢痕形成的重要机制。

关键词：脂多糖类/药理学胶原/代谢皮肤/细胞学/药物作用成纤维细胞/代谢/药物作用

LPS预处理PMN提取液对脑微血管内皮细胞通透性的影响及机制研究

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中国医师杂志 2009年第3期11卷 321-325页

作者：段元冬尹飞杨丽芬董丽芬彭镜吴丽文中南大学湘雅医院儿科湖南长沙410008

目的探讨脂多糖（LPS）预处理多形核中性粒细胞（PMN）提取液对大鼠脑微血管内皮细胞（BMEC）通透性改变的影响及感染性脑水肿时血脑屏障（BBB）通透性改变的可能发病机制。方法提纯PMN，测定上清液谷氨酸（Glu）浓度；培养大鼠BMEC，评... 详细信息

目的探讨脂多糖（LPS）预处理多形核中性粒细胞（PMN）提取液对大鼠脑微血管内皮细胞（BMEC）通透性改变的影响及感染性脑水肿时血脑屏障（BBB）通透性改变的可能发病机制。方法提纯PMN，测定上清液谷氨酸（Glu）浓度；培养大鼠BMEC，评价BMEC通透性；检测N-甲基-D-天冬氨酸受体1（NMDAR1）的表达变化。结果LPS预处理PMN 5min亚组Glu浓度最高；LPS预处理PMN提取液组BMEC的通透性增加，与其它实验组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）；LPS预处理PMN提取液可使BMEC的NMDAR1表达上调。结论LPS预处理可以使PMN释放高浓度Glu，同时其Glu可导致BMEC通透性增高并破坏BBB，其机制可能与BMEC上的NMDAR1的表达上调有关。

关键词：脂多糖类/药理学中性白细胞毛细血管通透性内皮细胞

脂多糖对人正常皮肤成纤维细胞增殖周期及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响

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中国医师杂志 2011年第7期13卷 865-868页

作者：王舒琦李凤玉万立闫淑英张建宇杨红明解放军第二五一医院肿瘤科河北省张家口075000 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所

目的观察大肠杆菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激后，皮肤成纤维细胞增殖周期和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达变化规律。方法体外培养正常人皮肤成纤维细胞，加入不同浓度（0．005～1．0μg／m1）的大肠杆菌LPS（Ecoli055：B5），于LP... 详细信息

目的观察大肠杆菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激后，皮肤成纤维细胞增殖周期和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达变化规律。方法体外培养正常人皮肤成纤维细胞，加入不同浓度（0．005～1．0μg／m1）的大肠杆菌LPS（Ecoli055：B5），于LPS加入后第7天细胞处于对数生长期时，采用流式细胞术观察细胞增殖周期；用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及胶原酶mRNA的表达。结果LPS刺激浓度在0．005～0．1μg／ml时，S期细胞比例随着刺激浓度增加而增高，且呈浓度依赖性；当LPS浓度为0．5μg／ml时，上述作用开始降低，但仍高于空白对照；当浓度达到1．0μg／ml时，s期细胞比例均低于空白对照；LPS刺激浓度在0．005～0．1μg／ml时，促进正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达，抑制胶原酶mRNA表达，且呈一定的剂量依赖性；当LPS刺激浓度为0．5μg／ml，上述作用下降；而当LPS刺激浓度到达1．0μg/ml时，抑制正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达，促进胶原酶mRNA表达。结论在一定浓度范围内LPS促进皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成，而过高浓度LPS则呈现抑制效应。

关键词：脂多糖类/药理学皮肤/细胞学/药物作用/代谢成纤维细胞/代谢/病理学/药物作用细胞增殖胶原Ⅰ型/代谢胶原Ⅲ型/代谢

脂多糖经MyD88／NF-κB信号途径抑制Bewo细胞中乙型肝炎病毒复制

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中国医师杂志 2011年第11期13卷 1464-1467,1472页

作者：资捷王前郑磊熊石龙王芳深圳市福田妇幼保健院深圳518045 南方医科大学南方医院临床检验中心

目的探讨Toll样受体4（TLR4）配体脂多糖（LPS）抑制人滋养层细胞Bewo中乙型肝炎病毒（rtBv）复制的作用机制，为防治HBV宫内感染提供依据。方法首先将2txg1．3倍HBV全基因重组质粒pcDNA3．1（＋）-HBV1．3转染Bewo细胞12h后，以TLR4配... 详细信息

目的探讨Toll样受体4（TLR4）配体脂多糖（LPS）抑制人滋养层细胞Bewo中乙型肝炎病毒（rtBv）复制的作用机制，为防治HBV宫内感染提供依据。方法首先将2txg1．3倍HBV全基因重组质粒pcDNA3．1（＋）-HBV1．3转染Bewo细胞12h后，以TLR4配体LPS处理3d。尔后用LPS处理Bewo细胞，观察IFN—β、TNF-a表达的动力学、NF—KB拮抗剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对LPS诱导Bewo细胞产生细胞因子的作用。采用微粒子酶免疫分析法（MEIA）和荧光定量PCR法分别检测HBsAg、HBeAg和HBVDNA水平，并以ELISA和RT—PCR分别检测IFN-β、TNF—a水平及TIR结构域的转接蛋白（TRIF）、髓样分化蛋白（MyD88）表达。结果与对照组比较，LPS可显著抑制Bewo细胞中HBV复制（P〈0．01），且LPS可显著诱导Bewo细胞产生TNF-a（P〈0．05），呈时间和剂量依赖性。PDTC可抑制LPS诱导细胞产生TNF-a，显著低于对照组（P〈0．01），但对IFN—β无显著作用（P〉0．05）。与对照组比较，LPS可诱导HBV重组质粒转染的Bewo细胞表达MyD88（P〈0．01）。结论通过MyD88／NF—KB信号途径诱导Bewo细胞产生TNF—a，TLR4配体LPS可显著抑制HBV复制。

关键词：脂多糖类/药理学髓样分化因子88/代谢 NF—KB/代谢肝炎病毒,乙型/药物作用/代谢病毒复制/药物作用信号传导

脂多糖诱导肾小管上皮细胞 HK-2损伤后自噬相关蛋白LC3、p-Akt 、T-Akt 的表达变化及其意义

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医学临床研究 2015年第11期32卷 2238-2240页

作者：刘潇欧阳繁陈鹏卢秀兰祝益民湖南省儿童医院急救中心湖南长沙410007 中南大学湘雅二医院湖南长沙410011 湖南省儿童医院脓毒症研究中心湖南长沙410007 湖南省人民医院湖南长沙410005

【目的】探讨脂多糖诱导肾小管上皮细胞HK‐2损伤后自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3（microtubule‐associated protein light chain 3，LC3）Ⅱ、磷酸化蛋白激酶B （p‐Akt）、总蛋白激酶B （T‐Akt）的表达变化及其意义。【方法】采用... 详细信息

【目的】探讨脂多糖诱导肾小管上皮细胞HK‐2损伤后自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3（microtubule‐associated protein light chain 3，LC3）Ⅱ、磷酸化蛋白激酶B （p‐Akt）、总蛋白激酶B （T‐Akt）的表达变化及其意义。【方法】采用脂多糖诱导建立肾小管上皮细胞 HK‐2急性损伤模型，采用Western blot定量法检测损伤后不同时间点自噬相关蛋白LC3Ⅱ、Beclin‐1和Akt的表达；使用不同浓度的P13K抑制剂LY294002预处理 HK‐2细胞1 h后，Western blot检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ、p‐Akt 、Beclin‐1的表达情况。【结果】自噬相关蛋白LC3Ⅱ在诱导HK‐2细胞损伤3 h后表达开始逐渐增加，而Beclin‐1无明显变化，p‐Akt表达于损伤后3 h达到高峰，此后逐渐恢复到正常水平；使用P13K抑制剂LY294002预处理 HK‐2后，自噬相关蛋白LC3Ⅱ和Beclin‐1的表达上调、p‐Akt显著下调。【结论】脂多糖导致肾小管上皮细胞 HK‐2损伤后可诱导自噬发生，且P13K／Akt信号通路在其中可能发挥调节作用。

关键词：脂多糖类/药理学肾小管/细胞学上皮细胞 1-磷脂酰肌醇3-激酶