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黑茶曲霉属和散囊菌属真菌产胞外水解酶能力的比较分析

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广东农业科学 2019年第1期46卷 108-114页

作者：李若曦方洪枫王国红杨民和福建师范大学生命科学学院福建福州350108 工业微生物教育部工程研究中心福建福州350108

【目的】曲霉属和散囊菌属真菌是黑茶渥堆中的优势微生物,对形成黑茶风味、品质和生理功能起关键作用。但在茶叶发酵过程中这些真菌水解酶的差异尚不清楚。【方法】采用鉴别培养基平板检测和酶活性检测相结合,分析曲霉属和散囊菌属不同... 详细信息

【目的】曲霉属和散囊菌属真菌是黑茶渥堆中的优势微生物,对形成黑茶风味、品质和生理功能起关键作用。但在茶叶发酵过程中这些真菌水解酶的差异尚不清楚。【方法】采用鉴别培养基平板检测和酶活性检测相结合,分析曲霉属和散囊菌属不同菌株在合成培养基上和茶叶发酵条件下胞外水解酶活性的差异。【结果】鉴别培养基平板检测结果显示:供试的9个菌株均不同程度呈现纤维素酶、木聚糖酶和单宁酶活性,7个菌株显示淀粉酶活性,2个菌株显示果胶酶活性,1个菌株显示蛋白酶活性。同一菌株可以同时分泌多种胞外水解酶,多个菌株也可以表现同一水解酶的活性,不同菌株产生胞外水解酶能力存在显著差异。在茶叶发酵过程中,黑曲霉菌株PE-3水解大分子碳水化合物酶活性显著高于冠突散囊菌菌株PE-1。其中,淀粉酶活力达到33.81 U/mL。而菌株PE-1的单宁酶和蛋白酶活性则显著高于菌株PE-3。其中,单宁酶活力达到132.09 U/mL。【结论】在茶叶发酵过程中,曲霉属和散囊菌属的菌株可能具有对不同茶叶成分的选择性,水解酶的协同作用影响菌株对茶叶成分的利用效率。

关键词：黑茶黑曲霉冠突散囊菌胞外水解酶

北极海洋沉积物细菌群落结构及其胞外水解酶研究

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北极海洋沉积物细菌群落结构及其胞外水解酶研究

作者：张良国家海洋局第一海洋研究所

学位级别：硕士

北极地区的低温、寡营养、强辐射等特殊环境因素,造就了独特的微生物生态系统,北极微生物可以通过代谢功能的调整和适冷酶的合成来适应这种极端环境。本文利用高通量测序技术对中国第七次北极科学考察采集的14个站位的海洋沉积物样品进... 详细信息

北极地区的低温、寡营养、强辐射等特殊环境因素,造就了独特的微生物生态系统,北极微生物可以通过代谢功能的调整和适冷酶的合成来适应这种极端环境。本文利用高通量测序技术对中国第七次北极科学考察采集的14个站位的海洋沉积物样品进行了细菌群落结构分析,探讨了其与沉积物理化因子之间的关系;并利用改良的海水ZoBell 2216E培养基和稀释涂布培养法对37个站位的海洋沉积物和24个站位的上覆水样品进行了可培养细菌的分离纯化与多样性分析,并对其中部分菌株进行了胞外水解酶的活性测定。通过对14个站位北极海洋沉积物的基于16S rRNA V3+V4的高通量测序,总共得到了1,416,738个有效序列,在97%相似性水平上共计获得了1283个OTUs。在门水平上,变形杆菌门具有较高的序列丰度(29.79%–62.86%),蓝细菌门的序列丰度也比较高,但各站位之间差异较大(0.03%–38.64%)。在纲水平上,γ-变形杆菌纲和δ-变形杆菌纲的丰度较大,其相对含量分别为6.82%–39.47%和6.98%–35.22%;α-变形菌纲在不同站位的相对丰度差异也较为明显(0.48%–34.29%)。在属水平上,各站位的优势菌属差异更为明显,总体上以脱硫球菌属、邻单胞菌属和Lutimonas等占优势。PCoA和PCA分析显示,不同站位的细菌群落结构与取样站位的深度有着密切关系,蓝细菌门的相对含量与采样站位的深度显著负相关。CCA分析显示,取样深度、NO-N和NO-N是影响细菌门类的主要沉积物理化因子。从37个站位的北极海洋沉积物以及24个站位的上覆水样品中共分离获得了428株细菌;基于16S rRNA基因序列的分子鉴定与系统发育分析表明,其分属于4个门、6个纲、12个目、24个科、51个属和101个种;其中,从沉积物样品中分离获得的298株菌株分属于4个门、6个纲、12个目、22个科、44个属和80个种,从上覆水样品中分离获得的130株菌株分属于4个门、5个纲、11个目、18个科、30个属和49个种。γ–变形杆菌的数量与种类最为丰富,占总菌株数的50.00%和总种数的53.47%;从沉积物和上覆水中分别获得了33株和3株与模式菌株的16S rRNA基因序列的相似性小于97%的菌株,分别代表4个和2个潜在的新种。北极海洋沉积物和上覆水中可培养细菌具有丰富的多样性与新颖性,具有巨大的潜在应用价值。基于筛选培养基平板,对分离到的352株细菌进行了蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶等9种胞外水解酶的活性初筛。结果表明,绝大多数菌株(81.53%)可产生至少1种以上的胞外水解酶,其中10.51%的菌株可产生7种以上的胞外水解酶;产明胶酶的菌株数量最多,可达64.49%,产β–半乳糖苷酶的菌株次之,达54.55%;产卵磷脂酶的菌株数量最少,仅占10.51%。对初筛活性较强的部分产酪蛋白酶、卡拉胶酶、琼胶酶和脂肪酶菌株进行了培养液上清酶活性的测定,发现各菌株之间的酶活差异性很大。对产蛋白酶活性较强的菌株的酶促抑制试验和酶谱分析表明,其产生的蛋白酶至少受到两种酶促抑制剂的显著抑制,并能产生至少三种分子量不同的蛋白酶。总之,本研究丰富了极地产胞外水解酶菌株的菌种资源库,为北极微生物资源的开发和利用打下了基础。

关键词：北极细菌群落结构微生物多样性胞外水解酶

天麻栽培用蜜环菌的遗传多样性、生长和水解酶

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菌物学报 2020年第2期39卷 265-279页

作者：王洋洋涂璇王传华卢杉邓啟玉孙小兵三峡大学生物与制药学院湖北宜昌443002 天然产物研究与利用湖北省重点实验室湖北宜昌443002 三峡大学湖北省生物酵素工程技术研究中心湖北宜昌443002 三峡地区地质灾害与生态环境湖北协同创新中心湖北宜昌443000

蜜环菌Armillaria是一种广泛分布的担子菌,是栽培中药天麻所必须的共生菌。为揭示我国天麻栽培用和鄂西地区部分野生蜜环菌资源的遗传多样性和生物学特性,本文收集了9个省市EF-1-α的19个蜜环菌商品菌株和鄂西地区20株野生蜜环菌菌株,以... 详细信息

蜜环菌Armillaria是一种广泛分布的担子菌,是栽培中药天麻所必须的共生菌。为揭示我国天麻栽培用和鄂西地区部分野生蜜环菌资源的遗传多样性和生物学特性,本文收集了9个省市EF-1-α的19个蜜环菌商品菌株和鄂西地区20株野生蜜环菌菌株,以IGS、ITS和elongationfactor-1-alpha(EF-1-α)为分子标记对这些菌株进行系统发育与遗传多样性分析,并对影响与天麻共生的生物学特性(菌索发育和胞外水解酶活性)进行对比研究。结果表明,这19株蜜环菌商品菌株分别归属于2个clade。其中,有18个菌株聚在cladeⅢ,说明不同来源的蜜环菌商品菌株之间系统发育关系很近;通过对蜜环菌的系统发育、菌索生长以及胞外水解酶活性的研究,总体上商品种优于鄂西的野生蜜环菌生物种。从鄂西野生蜜环菌中筛选出4个具有潜在栽培价值的菌株。本研究为天麻栽培生产中蜜环菌菌种的选择提供参考。

关键词：蜜环菌遗传多样性根状菌索胞外水解酶

盐单胞菌水解酶系及其在船舶生活污水净化处理中的应用研究

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盐单胞菌水解酶系及其在船舶生活污水净化处理中的应用研究

作者：梁晓雅大连海事大学

学位级别：硕士

盐单胞菌(Halomonas)是中度嗜盐菌,最适生长Na Cl浓度范围为3～15%。绝大多数Halomonas菌株因为能够在高盐胁迫下合成渗透压补偿溶质Ectoine(1,4,5,6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸)而具有显著的耐盐性。海洋船舶生活废水的特点是盐浓度和有... 详细信息

盐单胞菌(Halomonas)是中度嗜盐菌,最适生长Na Cl浓度范围为3～15%。绝大多数Halomonas菌株因为能够在高盐胁迫下合成渗透压补偿溶质Ectoine(1,4,5,6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸)而具有显著的耐盐性。海洋船舶生活废水的特点是盐浓度和有机物浓度较高。海洋船舶废水生物净化处理中亟待解决的问题是高盐抑制微生物的生长代谢效率,降低酶活性特别是胞外水解酶活性,导致有机物等大分子降解速率缓慢。本文考察14株Halomonas菌株胞外水解酶(淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶、脲酶)酶活性,表征其极端条件(包括高盐条件)酶性质,并利用Halomonas进行活性污泥耐盐强化,用于模拟海洋船舶生活废水的净化处理,考察净化处理过程中活性污泥胞外水解酶活性,并采用16S r DNA多样性分析技术进行Halomonas强化活性污泥系统微生物多样性分析。籍此,为提高海洋船舶生活废水生物净化处理效率提供理论和技术支持。本文分别测定14株Halomonas菌株淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶和脲酶的活性,同时考察了Halomonas菌株在极端p H(p H 3、p H 11)、极端温度(10℃、80℃)和极端盐浓度(120 g/L)条件下上述四种水解酶酶活性,分别获得了四种水解酶在不同极端条件下呈最高酶活性的菌株。结果表明,Halomonas菌株具有极端条件下高酶活性的特点,特别是具有显著的耐盐性。本文筛选出一株产碱性蛋白酶能力较强的菌株Halomonas sp.B01,使用响应面法对其产酶条件进行优化,得到的最佳产酶条件为(g/L):硫酸铵10,干酪素2,谷氨酸钠20.46,Na Cl 49.33,葡萄糖33.01,p H 9,在35℃下培养48 h。优化条件下的碱性蛋白酶活性达到7.45 U,是优化前的2.30倍。利用Halomonas进行活性污泥耐盐强化,用于模拟海洋船舶生活废水的净化处理,考察净化处理过程中活性污泥胞外水解酶活性,并采用16S r DNA多样性分析技术进行Halomonas强化活性污泥系统微生物多样性分析。结果表明,净化处理过程中淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶和脲酶的最高活性可达到13.33 U、3.33 U、7.79 U和82.03 U,对COD、NH-N、NO-N、NO-N、淀粉、蛋白质和尿素的去除率分别为60.56%、61.23%、30.45%、52.78%、86.50%、52.61%和100.00%。采用微生物多样性分析手段对处理过程进行研究,结果表明在属分类水平上强化污泥中的优势菌有Halomonas、Enterococcus、Lactobacillus、Proteus、Escherichia-Shigella,Halomonas属的相对丰度达到23.27%。强化污泥系统的Pielou＿e、Simpson和Shannon指数最终分别为0.57、6.26、0.94,表明该系统有较高的微生物丰富度与多样性。Halomonas强化菌群使活性污泥中的原生微生物更加耐受高盐环境的影响,微生物的生长代谢功能得到显著提高,从而使船舶生活污水中的污染物得到高效降解。

关键词： Halomonas 胞外水解酶响应面法船舶生活污水微生物多样性

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重楼中一株产纤维素酶内生真菌的分离及鉴定

生物技术通报 2022年第2期38卷 95-104页

作者：张功友王一涵郭敏张婷婷王兵刘红美贵州医科大学医药生物技术工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵阳550025 贵州省高校免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

从重楼根茎中分离、鉴定具有产纤维素酶活性的内生真菌。采用表面消毒法从重楼块茎中分离内生真菌;用纤维素酶活性CMC平板检测分离菌株的产纤维素酶活性;对高产菌株进行形态学观察和分子生物学测序鉴定;探究影响纤维素酶活力的因素;利... 详细信息

从重楼根茎中分离、鉴定具有产纤维素酶活性的内生真菌。采用表面消毒法从重楼块茎中分离内生真菌;用纤维素酶活性CMC平板检测分离菌株的产纤维素酶活性;对高产菌株进行形态学观察和分子生物学测序鉴定;探究影响纤维素酶活力的因素;利用平板法检测该株菌产其他胞外水解酶的活性。从3个来源的重楼中分离出41株内生真菌,通过平板检测发现AS-5、AS-7、AS-9和AS-18菌株能产生纤维素酶,其中AS-9菌株活性最强;通过形态学观察和ITS、LSU序列分析将AS-9菌株鉴定为Setophoma terrestris;该菌在pH值为7.0和温度为28℃时表现出最大纤维素酶活性,紫外线照射对产纤维素酶活性无明显作用;检测发现AS-9菌株同时具有产酪蛋白酶、脂肪酶、天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶和脲酶活性。首次在重楼中发现内生真菌Setophoma terrestris,且具有较好的产纤维素酶能力,值得深入研究。

关键词：纤维素酶重楼分离鉴定 Setophoma terrestris 胞外水解酶

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柑橘溃疡病菌Ⅱ型分泌通道基因xpsD突变体的鉴定及功能分析

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微生物学通报 2015年第7期42卷 1248-1252页

作者：卓涛郭静范晓静孙东玲邹华松福建农林大学植物保护学院福建福州350002 上海交通大学农业与生物学院上海200240

【目的】鉴定柑橘溃疡病菌胞外水解酶减弱突变体Mxac56-20的Tn5插入位点,及其在柑橘上的致病力。【方法】采用质粒拯救方法获得Tn5旁侧序列,与基因组信息比对后明确突变体的插入位点;构建功能互补载体对突变体进行功能互补,检测互补菌... 详细信息

【目的】鉴定柑橘溃疡病菌胞外水解酶减弱突变体Mxac56-20的Tn5插入位点,及其在柑橘上的致病力。【方法】采用质粒拯救方法获得Tn5旁侧序列,与基因组信息比对后明确突变体的插入位点;构建功能互补载体对突变体进行功能互补,检测互补菌株胞外蛋白水解酶、纤维素酶和淀粉酶的恢复情况;在寄主植物柑橘上观察致病力变化。【结果】Mxac56-20的Tn5插入位点是II型分泌系统xpsD基因,所构建的互补载体使突变体的胞外水解酶活性和致病力得到恢复。【结论】柑橘溃疡病菌xpsD基因的突变,导致胞外水解酶活性降低,在寄主上的致病力减弱,说明柑橘溃疡病菌的II型分泌系统在与寄主互作过程中起到致病因子的作用。

关键词：柑橘溃疡病菌 xpsD基因功能互补胞外水解酶致病力

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酒鬼酒发酵车间空气源可培养细菌多样性研究

酒鬼酒发酵车间空气源可培养细菌多样性研究

作者：刘荷吉首大学

学位级别：硕士

本研究采用自然沉降法(natural precipitation method)收集酒鬼酒窖体发酵车间空气源微生物,采用纯培养(culture-dependent method)的方法进行分离纯化,运用基于16S r RNA基因序列的系统发育分析法(phylogenetic analysis)研究样品中可... 详细信息

本研究采用自然沉降法(natural precipitation method)收集酒鬼酒窖体发酵车间空气源微生物,采用纯培养(culture-dependent method)的方法进行分离纯化,运用基于16S r RNA基因序列的系统发育分析法(phylogenetic analysis)研究样品中可培养细菌(含放线菌)的类群多样性、物种多样性和遗传多样性,采用常规方法对其进行产胞外水解酶特征研究,采用多相分类方法(polyphasic taxonomic approach)对部分代表潜在新分类单元(potential new taxa)的菌株进行系统分类学(systematic taxonomy)研究,以初步了解酒鬼酒发酵车间空气样品中的可培养细菌的系统发育多样性和水解酶学特征,并确定部分潜在新类群在微生物分类上的地位,为深入研究、保护以及利用酒鬼酒酿造微生物资源提供了理论依据和实践指导。用添加10%酒鬼酒混合浸汁的营养琼脂培养基、MN培养基、ISP 2培养基和高氏Ⅰ号培养基从酒鬼酒发酵车间空气样品中分离到127株纯培养物。根据形态特征观察和部分生理生化实验结果去冗余,选取73个代表性菌株进行基于16S r RNA基因序列的系统发育多样性分析。分析结果表明,这些分离菌株具有较高的类群多样性,分属于细菌域的4个大的系统发育类群(门;phylum)(Actinobacteria,Deinococcus-Thermus,Firmicutes,Proteobacteria)中的16个科(Aurantimonadaceae,Bacillaceae,Bacillales,Corynebacteriaceae,Deinococcaceae,Intrasporangiaceae,Microbacteriaceae,Moraxellaceae,Nocardiaceae,Planococcaceae,Propionibacteriaceae,Pseudomonadaceae,Rhizobiaceae,Rhodobacteraceae,Sphingomonadaceae,Xanthomonadaceae)的24个属(Acinetobacter,Agrococcus,Arsenicicoccus,Arthrobacter,Aurantimonas,Bacillus,Corynebacterium,Deinococcus,Exiguobacterium,Janibacter,Kocuria,Luteococcus,Microbacterium,Micrococcus,Paracoccus,Pararhodobacter,Pseudomonas,Rhodococcus,Shinella,Sphingomonas,Sporosarcina,Staphylococcus,Virgibacillus,Xanthomonas)。优势类群为Actinobacteria门(34株,46.58%),其中Micrococcaceae为优势科,含15株菌株;其次是Proteobacteria门(24株,32.89%)和Firmicutes门(12株,16.44%),还分离到3株属于分类名称尚未确定且目前根据伯杰氏手册暂称为异常球菌-栖热菌门(Deinococcus-Thermus)的细菌。这些菌株可分为54个物种,大部分菌株与其系统发育关系最密切的已知物种的典型菌株之间存在一定的遗传差异(16S r RNA基因序列相似性为96.37%–99.88%)。其中至少有5株(JSM 2215019、JSM 2215034、JSM 2215039、JSM 2215042和JSM 2215109)可能代表潜在的新的分类单元(potential new taxa),它们可能分别代表Sphingomonas,Corynebacterium,Arthrobacter,Paracoccus和Deinococcus属的潜在新种。采用常规方法对分离菌株进行产胞外水解酶特征研究,并对其中具有较强酶活性的菌株进行物种多样性和生物学特性的研究。结果表明,从酒鬼酒发酵车间空气样品中分离的73个菌株有59株可以不同程度地至少产淀粉酶、酯酶、明胶酶或脲酶中的一种或多种,占总受试菌种的80.82%。其中只产1种酶(所测酶类)的菌株26株,分别产2、3、4种酶的菌株依次为19、10和4株。综合分析形态特征、生理生化特征和基于16S r RNA基因序列的系统发育分析数据,对产酶能力较强的菌株及其类群分布进行了分析。结果表明,有9株菌株具有较强淀粉水解酶活性(JSM 2215002、JSM 2215012、JSM 2215017、JSM 2215018、JSM 2215076、JSM 2215104、JSM

关键词：酒鬼酒发酵车间空气微生物系统发育分析生物多样性胞外水解酶

水稻品种（系）对细菌性条斑病的抗性及条斑病菌的致病力分化

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水稻品种（系）对细菌性条斑病的抗性及条斑病菌的致病力分化

作者：郭亚辉南京农业大学

学位级别：硕士

水稻细菌性条斑病（简称条斑病或细条病）是我国南方稻区的重要病害，也是国内植物检疫性病害之一。为了探讨利用水稻品种的抗性来控制细条病危害的可能性，分别测定了各类水稻品种的抗性;收集了南方各稻区的条斑病菌，在鉴别品种上比... 详细信息

水稻细菌性条斑病（简称条斑病或细条病）是我国南方稻区的重要病害，也是国内植物检疫性病害之一。为了探讨利用水稻品种的抗性来控制细条病危害的可能性，分别测定了各类水稻品种的抗性;收集了南方各稻区的条斑病菌，在鉴别品种上比较了它们的致病力，根据菌株与品种间的互作关系，提出了利用抗病品种控制病害的策略。先后收集了国内南方稻区和江淮流域稻区的水稻品种（系）115个，其中杂交稻三系材料21个，杂交组合15个，常规籼稻41个，常规粳稻38个。采用成株期针刺接种的方法，判断各品种的抗扩展能力，结果表明，不育系和保持系的抗性低于恢复系，三系材料中既有高抗品种，也有高感品种，不同胞质类型及其不育系之间的抗病性存在差异，BT型不育系的抗性最强，D型、龙型不育系的抗性较差。常规品种和杂交稻中，粳稻的抗性明显比籼稻强，粳型杂交稻的抗性比籼型杂交稻强，籼型杂交稻几乎都是高感品种，但是，粳型品种中有高度感染的品种，如丰锦、双龙，籼型品种中也有高抗的品种，如DV85、川贵6号。测定了国内南方稻区细条病菌80多个菌株的致病力分化，以金刚30、JV14等9个常规品种和国际水稻研究所和中国农科院转育的抗白叶枯病的近等基因系的28个材料为供试鉴别品种，在孕穗期的剑叶上用针刺接种的方法，根据病菌与品种互作反应和亲和性的类型差异，挑选出6个品种（IRBB5、IRBB14、IR24、IRBB4、IRBB21和金刚30）作为鉴别品种，将国内供试条斑病菌株区分为7个小种群，每个类型都包括5个以上的菌株，代表性强，它们在6个鉴别品种上的反应模式分别为：（1）RRRRRR，（2）RRRRRS，（3）RRRRSS，（4）RRRSSS，（5）RRSRSS，（6）RRSSSS，（7）RSSSSS。大多数条斑病菌株在鉴别品种上的互作反应表现为弱互作模式，只有部分菌株与品种间存在强互作关系，因此，有关水稻细条病菌的致病力分化类型可称为“小种”分化。同时测定了IRBB材料对水稻白叶枯病和水稻条斑病的抗性，比较了它们之间的抗性差异，证明广谱抗白叶枯病的IRBB7（Xa-7）、IRBB13（xa-13）和IRBB21（Xa-21）对条斑病菌表现为感病;而高感白叶枯病的IRBB10（Xa-10）、IRBB14（Xa-14）则抗条斑病菌。首次从抗病基因角度阐明了同一品种对两种细菌病害的抗性是由不同的抗性基因控制的。有关细条病菌小种分化的详细研究以及同时比较众多鉴别品种对两种细菌病害的抗性，这在国内还是第一次。在含有酶基质的平板上测定了23个菌株的胞外蛋白酶、酯酶和淀粉水解酶的活性及病菌游动性与菌株致病力的关系，结果表明：蛋白酶活性、酯酶活性与菌株的致病力呈正相关;淀粉水解酶活性与菌株的致病力呈负相关;病菌游动性与菌株的致病力没有明显的相关性。

关键词：水稻条斑病菌 Xanthomonas oryzae pv. oryzicola 品种抗性致病力分化小种胞外水解酶

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酒鬼酒制曲车间空气源可培养细菌多样性研究

酒鬼酒制曲车间空气源可培养细菌多样性研究

作者：钟小娟吉首大学

学位级别：硕士

本研究采用自然沉降法(natural precipitation method)收集酒鬼酒制曲车间空气源微生物,采用传统的纯培养法(culture-dependent method)分离其中的细菌(含放线菌),运用基于16S r RNA基因序列的系统发育分析法(phylogenetic analysis)研... 详细信息

本研究采用自然沉降法(natural precipitation method)收集酒鬼酒制曲车间空气源微生物,采用传统的纯培养法(culture-dependent method)分离其中的细菌(含放线菌),运用基于16S r RNA基因序列的系统发育分析法(phylogenetic analysis)研究分离菌株的系统发育多样性(类群多样性、物种多样性和遗传多样性),采用水解法对其进行产胞外水解酶特征研究,采用多相分类方法(polyphasic approach)对潜在新分类单位(potential new taxa)的代表性菌株进行系统分类学(taxonomy)研究,以便较系统地了解酒鬼酒制曲车间空气中的可培养细菌的系统发育多样性和产水解酶特征,确立部分潜在新类群代表菌株的分类地位,为进一步研究、保护及利用酒鬼酒酿造微生物资源奠定基础。用添加10%酒鬼酒混合浸汁的营养琼脂、ISP 2和高氏Ⅰ号培养基、采用自然沉降法从酒鬼酒制曲车间空气中分离到83株纯培养物。根据部分形态和生理生化特征,去除部分重复菌株,获得65个菌株用于进一步研究。系统发育多样性分析结果表明,这65个酒鬼酒制曲车间空气源菌株可以分为39个物种,归属于细菌域的4个门(Firmicutes,Actinobacteria,Proteobacteria,Deinococcus-Thermus)的14个科(Deinococcaceae,Bacillaceae,Microbacteriaceae,Brevibacteriaceae,Moraxella,Moraxellaceae,Neisseriaceae,Nocardiopsaceae,Paenibacillaceae,Phyllobacteriaceae,Rhizobium/Agrobacterium group,Rhodobacteraceae,Sphingomonadaceae,Staphylococcaceae)、24个属(Agrococcus,Aliihoeflea,Arthrobacter,Bacillus,Brevibacterium,Closest,Deinococcus,Halobacillus,Kocuria,Paenibacillus,Paracoccus,Prolinoborus,Pseudoclavibacter,Psychrobacter,Rathayibacter,Rhizobium,Staphylococcus,Sphingomonas,Macrococcus,Microbacterium,Micrococcus,Moraxella,Nocardiopsis,Zhihengliuella)。多数菌属于Actinobacteria门(28株,43.1%),其中Micrococcaceae为优势科(12株);其次是Proteobacteria门(19株,29.2%)和Firmicutes门(14株,21.5%);还分离到4株属于分类地位尚未确定、目前根据伯杰氏手册暂称为异常球菌-栖热菌门(Deinococcus-Thermus)的细菌。相似性分析结果显示,大多数菌株与它们的系统发育关系最密切的已知物种之间,存在一定的遗传差异(序列相似性为95.9%9.9%),初步确定其中有6株(JSM 2155001,JSM 2175001,JSM 2175016,JSM 2185017,JSM 2195010,JSM 2195026)可能代表4个已知属(Deinococcus,Sphingomonas,Pseudoclavibacter,Paenibacillus)的6个新的分类单元/物种(potential new taxa/species)。这些结果均表明了酒鬼酒制曲车间空气样品中存在较高的类群多样性和物种多样性。采用水解法对分离自酒鬼酒制曲车间空气样品的细菌(含放线菌)进行产胞外酶(淀粉酶、酯酶、明胶酶和脲酶)的酶学特性研究。结果表明,至少产生一种酶的菌株共54株,占总受试菌株的83.1%。其中有19株对淀粉有水解作用,8株对4种吐温(Tween 20,40,60,80)均有水解作用,17株对明胶有水解作用,26株对尿素有水解作用;有27株产胞外水解酶广谱菌株,能同时至少产生2类水解酶。系统发育分析结果表明这些阳性菌株类群多样性较高。有4株菌株具有较强淀粉水解酶活性(JSM 2145008、JSM 2155001、JSM 2155017、JSM 2175012)属于3个门(Deinococcus-Thermus,Firmicutes,Actinobacteria)的3个科(Deinococcaceae,Bacillaceae,Microbacteriaceae);有8株菌株具有较强酯酶活性(降解

关键词：酒鬼酒制曲车间空气微生物生物多样性胞外水解酶系统发育分析多相分类