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胞内抗体和胞内因子技术与疾病的分子治疗

华西药学杂志 2009年第1期24卷 99-101页

作者：傅刘鹏马伟峰张彦东蔡绍晖暨南大学药学院广东广州510632 南方医科大学公共卫生与热带医学学院广东广州510515

胞内抗体和胞内因子技术是一种新颖的基因治疗策略,也是用于表型敲除研究的又一有力工具。胞内抗体/因子通过基因重组技术在细胞内表达并被定位于特定的亚细胞器中,能够特异性地结合细胞内靶分子,进而影响靶分子的加工或分泌过程及其生... 详细信息

胞内抗体和胞内因子技术是一种新颖的基因治疗策略,也是用于表型敲除研究的又一有力工具。胞内抗体/因子通过基因重组技术在细胞内表达并被定位于特定的亚细胞器中,能够特异性地结合细胞内靶分子,进而影响靶分子的加工或分泌过程及其生物学效应,已在人艾滋病、恶性肿瘤、移植排斥和神经变性等疾病的分子治疗领域彰显出潜在的应用前景。

关键词：胞内抗体胞内因子分子治疗

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胞内抗体肿瘤基因治疗

科学通报 2000年第12期45卷 1233-1235页

作者：邵荣光甄永苏中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050

自杂交瘤和单克隆抗体技术问世以来, 人们一直尝试将该技术用于肿瘤治疗. 抗体工程的进展使得人们能够对抗体分子进行改造, 研制具有高亲和力和特异结合力的基因工程抗体.

关键词：胞内抗体肿瘤基因治疗基因工程抗体

抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体对K562细胞在裸鼠体内生长的影响

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中国医学科学院学报 2002年第1期24卷 11-14页

作者：徐冬宋俊敏呼莹郭虹曹德骏汪萍刘辉赵春华中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的观察人慢性粒细胞白血病细胞转导抗ＡＢＬ蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体基因后，对其在裸鼠体内生长的影响。方法应用基因重组技术构建逆转录病毒载体ＭＳＣＶ－ｉｂＥ－ＩＲＥＳ－ｅＧＦＰ，将胞内抗体基因转导Ｋ５６２细胞，观察胞内... 详细信息

目的观察人慢性粒细胞白血病细胞转导抗ＡＢＬ蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体基因后，对其在裸鼠体内生长的影响。方法应用基因重组技术构建逆转录病毒载体ＭＳＣＶ－ｉｂＥ－ＩＲＥＳ－ｅＧＦＰ，将胞内抗体基因转导Ｋ５６２细胞，观察胞内抗体的表达和细胞内ｃ－ＡＢＬ及ＢＣＲ／ＡＢＬ蛋白酪氨酸激酶活性的变化；将表达胞内抗体的细胞与对照组Ｋ５６２细胞及转导空载体的细胞分别移植裸鼠，动态观察肿瘤的生长。结果获得表达胞内抗体基因的细胞模型：Ｋ５６２－ｉｂＥ，其靶蛋白酪氨酸激酶活性明显受抑。移植裸鼠后第１４，２１，２８天肿瘤体积均小于对照组的１／２。结论转导抗ＡＢＬ蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体的细胞在裸鼠体内生长明显受抑制，这可能与胞内抗体显著抑制细胞内ＢＣＲ／ＡＢＬ蛋白酪氨酸激酶活性，阻断ＢＣＲ／ＡＢＬ信号途径，促进细胞凋亡，降低了细胞的体内致肿瘤性有关。

关键词：胞内抗体 K562细胞 BCR/ABL 酪氨酸激酶致肿瘤性慢性粒细胞白血病裸鼠体内生长

9.1C3胞内抗体基因的克隆及其对9.1C3分子表达的抑制作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第1期21卷 58-61页

作者：欧阳为明金伯泉夏海滨刘飞李德敏张建平第四军医大学免疫教研室西安710032

目的　获得 9 1C3胞内抗体基因的真核表达载体 ,观察胞内抗体对 9 1C3分子表达的抑制作用 ,为进一步研究 9 1C3分子对NK细胞功能的影响打下基础。方法　设计引物 ,以 9 1C3ScFv基因为模板进行PCR扩增 ,引入蛋白质内质网定位所需的信号肽... 详细信息

目的　获得 9 1C3胞内抗体基因的真核表达载体 ,观察胞内抗体对 9 1C3分子表达的抑制作用 ,为进一步研究 9 1C3分子对NK细胞功能的影响打下基础。方法　设计引物 ,以 9 1C3ScFv基因为模板进行PCR扩增 ,引入蛋白质内质网定位所需的信号肽、KDEL以及作为表达检测标记的E tag序列。回收纯化PCR产物 ,酶切后连接到pUC19载体上 ,并进行序列测定。序列正确后切下胞内抗体基因片段 ,重组到真核表达载体pRc/CMV中 ,酶切鉴定后用DEAE dextran方法瞬时转染真核细胞COS7,用胞内染色和Westernblot方法检测胞内抗体的表达。接着用Lipofectamine把胞内抗体基因转入 9 1C3阳性的Jurkat细胞 ,用FCM观察胞内抗体对 9 1C3分子表达的影响。结果　DNA序列测定证明 ,通过PCR成功地为 9 1C3ScFv引入了内质网定位所需的信号肽、KDEL及E tag序列 ,成功地构建了胞内抗体真核表达载体 ,通过胞内染色方法和Westernblot证明胞内抗体在COS7中得到表达。转入Jurkat细胞后发现胞内抗体能下调 9 1C3分子的表达水平。结论　以 9 1C3ScFv基因为模板PCR扩增得到 9 1C3胞内抗体基因 ,并构建了真核表达载体。

关键词：聚合酶链反应 SCFV 胞内抗体表达载体 JURKAT细胞

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胞内抗体研究进展及临床应用前景

现代免疫学 2012年第4期32卷 343-347页

作者：吴标赵国屏王颖上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海200025 上海人类基因组研究中心上海市疾病与健康基因组重点实验室上海20120

胞内抗体(intracellular antibody,intrabody)是一类在细胞内表达、特异性地靶向胞内抗原以期实现对相应功能的调节甚至阻断的新型基因工程抗体。最常见的胞内抗体形式为单链抗体(ScFv)。通过相应定位信号肽序列,胞内抗体能定位于胞浆... 详细信息

胞内抗体(intracellular antibody,intrabody)是一类在细胞内表达、特异性地靶向胞内抗原以期实现对相应功能的调节甚至阻断的新型基因工程抗体。最常见的胞内抗体形式为单链抗体(ScFv)。通过相应定位信号肽序列,胞内抗体能定位于胞浆、胞核、内质网、线粒体、高尔基体、细胞膜和过氧化酶体等各种细胞器,以实现对靶标抗原的功能性调控。其应用也由早先的干扰病毒复制和抑制肿瘤生长,逐渐拓展至治疗中枢神经系统退行性疾病、自身免疫病以及抑制免疫排斥等方面。本文对胞内抗体的作用机制、筛选策略、优缺点、应用及跨膜抗体作一综述。

关键词：胞内抗体单链抗体跨膜抗体 PTD

抗Cyclin D1胞内抗体AD5N对宫颈癌HeLa细胞的影响

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中国肿瘤临床 2008年第16期35卷 942-944,948页

作者：周立宏朱迅曹玉华陈勇田宇王磊李桂英吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室长春市130021 吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林大学中日联谊医院神经外科吉林大学第一医院普外科

目的:抗Cyclin D1胞内抗体AD5N对宫颈癌细胞增殖的抑制效应分析。方法:将携带抗Cyclin D1胞内抗体AD5N的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,利用脂质体介导法稳定转染宫颈癌HeLa细胞,G418筛选阳性细胞株,进一步通过Westernblot、MTT法及流式细... 详细信息

目的:抗Cyclin D1胞内抗体AD5N对宫颈癌细胞增殖的抑制效应分析。方法:将携带抗Cyclin D1胞内抗体AD5N的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,利用脂质体介导法稳定转染宫颈癌HeLa细胞,G418筛选阳性细胞株,进一步通过Westernblot、MTT法及流式细胞术分析该胞内抗体的细胞内表达和抗肿瘤效应。结果:AD5N在稳定筛选的细胞株中有效表达,与空细胞和空质粒转染的细胞株相比,明显抑制HeLa细胞增殖,并诱导细胞凋亡(P胞周期G0-G1期指数增高10.35%,S期指数下降15.77%,凋亡细胞指数上升6.38%。结论:抗Cyclin D1胞内抗体AD5N基因的表达,抑制宫颈癌细胞的增殖,阻滞细胞周期进展,并诱导细胞凋亡。

关键词： CyclinD1 胞内抗体增殖宫颈癌

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胞内抗体及其研究进展

细胞生物学杂志 2006年第3期28卷 425-428页

作者：洪美亚曾冬云龚兴国浙江大学生物大分子与酶工程研究所杭州310027

胞内抗体是指在细胞内表达并被定位于亚细胞区室的一类新的工程抗体。目前胞内抗体的研究主要集中于ScFv,ScFv基因结构简单,易导入细胞内表达且便于体外重组操作。胞内抗体作为一种新的基因治疗工具,在肿瘤基因治疗、人艾滋病基因治疗... 详细信息

胞内抗体是指在细胞内表达并被定位于亚细胞区室的一类新的工程抗体。目前胞内抗体的研究主要集中于ScFv,ScFv基因结构简单,易导入细胞内表达且便于体外重组操作。胞内抗体作为一种新的基因治疗工具,在肿瘤基因治疗、人艾滋病基因治疗的实验研究及潜在的临床治疗方面展示了广泛的应用前景。同时,胞内抗体可以用作分析靶蛋白功能的研究工具,是对传统的“基因剔除”转基因动物的一种有效补充。现从胞内抗体的设计及载体选择、肿瘤基因治疗、人艾滋病基因治疗等方面对胞内抗体的研究进展进行综述。

关键词：胞内抗体基因治疗 HIV-1 ScFv

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MG_7胞内抗体的表达及活性鉴定

免疫学杂志 2001年第6期17卷 410-412页

作者：喻召才丁杰樊代明张学庸第四军医大学西京医院全军消化疾病研究所陕西西安710032

目的制备 MG7胞内抗体并鉴定其分子量和抗原结合活性。方法以含 MG7sc Fv基因的质粒 p CANTAB5 E为模板 ,PCR扩增 MG7sc Fv基因 ,并在其 3’端引入一段内质网滞留序列 (SEKDEL ) ,即形成 MG7胞内抗体基因。 DNA测序后 ,将 MG7胞内抗体... 详细信息

目的制备 MG7胞内抗体并鉴定其分子量和抗原结合活性。方法以含 MG7sc Fv基因的质粒 p CANTAB5 E为模板 ,PCR扩增 MG7sc Fv基因 ,并在其 3’端引入一段内质网滞留序列 (SEKDEL ) ,即形成 MG7胞内抗体基因。 DNA测序后 ,将 MG7胞内抗体基因克隆到表达载体 p GEX- 3X中 ,转化宿主菌 HB2 15 1,IPTG诱导 ,SDS- PAGE分析产物分子量 ,EL ISA检测产物的 MG7抗原结合活性。结果电泳分析发现融合基因片段长约 780 bp。DNA序列分析显示 ,SEKDEL与 MG7sc Fv基因正确融合 ;SDS- PAGE分析发现 MG7胞内抗体的分子量为 32 0 0 0 u;EL ISA检测发现 MG7胞内抗体具有明显的抗原结合活性。结论我们成功地制备并表达了 MG7胞内抗体 ,为利用其探讨

关键词：胞内抗体 MG7 基因治疗胃癌

内质网滞留型抗Ⅳ型胶原酶胞内抗体对肿瘤细胞侵袭和增殖的抑制作用

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癌症 2004年第9期23卷 1005-1010页

作者：沈恩允王维刚李毅张胜华甄永苏中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050

背景与目的:侵袭转移是恶性肿瘤细胞的重要特性,Ⅳ型胶原酶(包括基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9)在恶性肿瘤转移扩散中发挥着极其重要的作用。我们通过胞内抗体技术,阻断Ⅳ型胶原酶的分泌,以期达到抑制恶性肿瘤细胞侵袭转移的效果。... 详细信息

背景与目的:侵袭转移是恶性肿瘤细胞的重要特性,Ⅳ型胶原酶(包括基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9)在恶性肿瘤转移扩散中发挥着极其重要的作用。我们通过胞内抗体技术,阻断Ⅳ型胶原酶的分泌,以期达到抑制恶性肿瘤细胞侵袭转移的效果。方法:构建编码可在内质网滞留的抗Ⅳ型胶原酶单链抗体的表达载体***,并转染入人巨细胞肺癌PG细胞系内。Westernblot检测***的表达,免疫共沉淀实验分析胞内抗体***在PG细胞内与靶蛋白相互作用情况,明胶酶谱检测Ⅳ型胶原酶的分泌,以及体外侵袭和增殖实验。结果:***在PG细胞内表达,而且能够识别和结合靶蛋白基质金属蛋白酶9。通过胞内抗体的基因转染,显著抑制了Ⅳ型胶原酶的功能和活性。***转染的PG细胞较野生型和空白质粒组,侵袭能力明显降低,抑制率为76.3%(P胞培养,***对PG细胞有明显的抗增殖效果。结论:内质网滞留型胞内抗体技术可以在蛋白加工、分泌这一关键通路中抑制肿瘤细胞Ⅳ型胶原酶的活性,进而抑制了肿瘤侵袭和增殖,在肿瘤基因治疗中具有应用前景。

关键词： Ⅳ型胶原酶胞内抗体肿瘤侵袭增殖基因治疗