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基因表达谱及其在人体肿瘤研究中的应用

中南大学学报（医学版） 2004年第1期29卷 105-107,115页

作者：刘仲奇田勇泉中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科长沙湖南410078

肿瘤发生是遗传、环境等多种致瘤因子共同作用的结果 ,经历了多个不同的发展阶段。每一阶段中机体机能的改变必然反应一系列基因功能的变化 ,构成机体在每一种机能状态时的特征性基因表达。要揭示肿瘤发生、发展的规律 ,最终找到攻克肿... 详细信息

肿瘤发生是遗传、环境等多种致瘤因子共同作用的结果 ,经历了多个不同的发展阶段。每一阶段中机体机能的改变必然反应一系列基因功能的变化 ,构成机体在每一种机能状态时的特征性基因表达。要揭示肿瘤发生、发展的规律 ,最终找到攻克肿瘤的可靠途径 ,必须从研究肿瘤相关基因入手。基因芯片提供了一种大通量研究手段 ,通过基因芯片构建肿瘤相关基因表达谱 ,研究肿瘤相关基因在肿瘤发生、发展过程中的功能 ,就是找到了研究肿瘤发生、发展规律的金钥匙 ,为肿瘤病原、病因、病理学研究 ,各种肿瘤的临床诊断、治疗药物筛选、预后判断。

关键词：基因表达谱肿瘤基因芯片肿瘤相关基因微阵列技术

肿瘤相关新基因pp4519在肺癌中的表达差异及初步功能研究

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肿瘤 2004年第3期24卷 201-208页

作者：罗金红李锦军张锋锐陈燕冯强覃文新万大方顾健人上海交通大学肿瘤研究所中科院上海生物工程中心上海200233 浙江大学医学院附属第一医院胸外科杭州310003

目的　探讨肿瘤相关新基因 pp4 5 19在肺癌细胞系、人肺癌及癌旁组织中表达差异及其初步生物学功能。方法　合成肿瘤相关新基因pp4 5 19特异性多肽 ,免疫家兔制备兔源性多克隆抗体 ;从体外细胞集落形成试验 ,生长曲线 ,裸鼠体内成瘤试... 详细信息

目的　探讨肿瘤相关新基因 pp4 5 19在肺癌细胞系、人肺癌及癌旁组织中表达差异及其初步生物学功能。方法　合成肿瘤相关新基因pp4 5 19特异性多肽 ,免疫家兔制备兔源性多克隆抗体 ;从体外细胞集落形成试验 ,生长曲线 ,裸鼠体内成瘤试验 ,半定量RT PCR ,蛋白印迹 ,免疫细胞化学及免疫组化检测 pp4 5 19基因的表达差异 ,以及转染肺癌细胞系的细胞凋亡检测等方法研究 pp4 5 19基因对体内外细胞生长和生物学功能的影响。结果　SPC A1肺癌细胞系的体外集落形成试验表明 ,pp4 5 19基因转染组集落形成数明显少于空载体组 (P 基因的肺癌细胞系的裸鼠体内成瘤试验结果表明该基因对SPC A1细胞系的成瘤有明显抑制作用 (P 基因具有促进SPC A1细胞凋亡的作用 ;半定量RT PCR ,蛋白印迹检测结果表明肺癌及癌旁组织中pp4 5 19mRNA和蛋白表达无明显差异(P >0 .0 5 ) ,但免疫组化结果显示PP4 5 19在人肺癌癌旁组织中的表达略高于肺癌。结论　pp4 5

关键词：肿瘤相关基因 pp4519基因肺癌肿瘤生物学细胞凋亡

探讨高表达肿瘤抗原基因OVA66对WISH细胞生物学特征的影响

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免疫学杂志 2007年第1期23卷 1-4页

作者：汤军桥李美星王树军张惠珍王颖张勇葛海良上海交通大学医学院免疫学教研室上海市免疫学研究所上海200025

目的分析转染OVA66基因WISH细胞的生物学特征变化,探讨该基因的功能。方法采用脂质体方法将重组真核表达载体pcDNA3.1-OVA66转染正常人羊膜细胞系WISH,经G418稳定筛选、克隆和扩增。采用RT-PCR、Western blotting和免疫荧光等方法检测... 详细信息

目的分析转染OVA66基因WISH细胞的生物学特征变化,探讨该基因的功能。方法采用脂质体方法将重组真核表达载体pcDNA3.1-OVA66转染正常人羊膜细胞系WISH,经G418稳定筛选、克隆和扩增。采用RT-PCR、Western blotting和免疫荧光等方法检测目的基因及其蛋白的表达,通过电镜分析细胞超微结构,体外侵袭实验检测细胞生长特性和侵袭能力,软琼脂克隆形成实验检测细胞的克隆性生长能力,并应用基因芯片技术检测相关基因差异表达。结果RT-PCR检测显示,转染pcDNA3.1-OVA66细胞OVA66基因呈高表达;Western bloting显示OVA66蛋白处出现明显的条带;电镜检测表明该基因可明显增强WISH细胞增殖能力;体外侵袭实验显示,该基因可增强WISH细胞的侵袭转移能力;软琼脂克隆形成实验表明OVA66基因可以促进单克隆性生长能力;基因芯片提示,该基因高表达影响某些基因的异常表达。结论提示OVA66基因高表达可促进细胞的增殖,利于肿瘤的侵袭和转移。

关键词： OVA66 肿瘤相关基因基因芯片侵袭

肿瘤相关抗原基因OVA66特异的RNA干扰对肿瘤细胞生物学特性的影响

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现代免疫学 2005年第6期25卷 450-455页

作者：李美星王颖王树军张惠珍周光炎尤强葛海良上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海200025

构建OVA66基因的特异小干扰RNA表达载体,转染HeLa细胞,分析对该基因表达和肿瘤生物学特性的影响。以RT-PCR、Westernblot方法检测OVA66基因在多种肿瘤细胞系的表达谱。利用计算机辅助设计和合成针对OVA66的特异小干扰RNA的DNA片段,定向... 详细信息

构建OVA66基因的特异小干扰RNA表达载体,转染HeLa细胞,分析对该基因表达和肿瘤生物学特性的影响。以RT-PCR、Westernblot方法检测OVA66基因在多种肿瘤细胞系的表达谱。利用计算机辅助设计和合成针对OVA66的特异小干扰RNA的DNA片段,定向克隆于特定的干扰载体(pSUPER)。利用脂质体法将重组载体转染于OVA66高表达细胞系HeLa,筛选得到shRNA-OVA66稳定表达细胞。采用Real-timePCR检测目的基因的表达;FACS、Westernblot方法分析目的蛋白的表达。MTT、3H-TdR掺入等方法检测干扰OVA66基因表达后对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。双酶切鉴定得到针对OVA66基因特异的shRNA表达载体(pSUPER-shRNA-OVA66),并经序列分析证实。经检测pSUPER-shRNA-OVA66稳定表达的HeLa细胞(shRNA-OVA66)中目的基因mRNA水平降低;OVA66蛋白表达受到抑制,表明设计的靶片段对目的基因有显著的抑制效果。并显示shRNA-OVA66细胞DNA合成下降;细胞周期分析表明阻断OVA66基因表达可抑制shRNA-OVA66细胞增殖能力,并引发细胞凋亡。OVA66特异的shRNA表达载体构建成功,阻断OVA66基因表达可抑制细胞增殖,促使细胞凋亡,为OVA66蛋白肿瘤生物学功能与肿瘤发生、发展的研究奠定基础。

关键词： OVA66 肿瘤相关基因干扰shRNA 凋亡增殖

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肿瘤抑制基因p53的研究进展

广东医学 2006年第8期27卷 1263-1265页

作者：姚逸临上海中医药大学附属龙华医院上海200032

随着肿瘤发病分子机制的逐步揭示和分子生物学技术的发展，肿瘤基因及其治疗已成为研究热点。现在人们知道，所有肿瘤的发生都是由于一些肿瘤相关基因的改变而产生，为了使癌变细胞能逃避机体免疫机制的控制，最终发展成肿瘤，通常需要... 详细信息

随着肿瘤发病分子机制的逐步揭示和分子生物学技术的发展，肿瘤基因及其治疗已成为研究热点。现在人们知道，所有肿瘤的发生都是由于一些肿瘤相关基因的改变而产生，为了使癌变细胞能逃避机体免疫机制的控制，最终发展成肿瘤，通常需要积聚5—9次基因改变。这些基因的改变通常发生于细胞发育、细胞增殖、细胞分化、细胞存活、细胞休止以及遗传学修复有关的基因中。其中一些涉及细胞生长正调节的基因通常称之为癌基因，而涉及细胞负调节的基因则称之为抑癌基因。一旦癌基因与抑癌基因之间的平衡被打破，控制细胞增殖的癌基因持续或过高表达，同时抑癌基因不表达或失活，会导致各种人类肿瘤的形成和发展。常见的抗癌基因有p53，p21，p27，p16，FTEN，FHIT，BRCA1／BRCA2等。其中p53基因最受瞩目，这是因为在人类恶性肿瘤中至少有50％发生了p53基因的变化。现就将p53基因与肿瘤关系的研究进展综述如下。

关键词：肿瘤抑制基因p53 p53基因分子生物学技术抑癌基因发病分子机制肿瘤相关基因机体免疫机制癌变细胞细胞增殖人类肿瘤

儿童肠息肉相关肿瘤基因的表达及其表现遗传修饰

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儿童肠息肉相关肿瘤基因的表达及其表现遗传修饰

作者：程海英浙江大学

学位级别：硕士

研究背景：肠息肉是引起儿童便血的最常见原因之一,其中幼年性息肉是儿童期最常见的病理类型,发生机制尚不明确,大多数学者认为其预后良好,但仍有一定的复发风险和恶变潜能。近年来,遗传学和表观遗传学机制在肿瘤发生、发展中的作用逐... 详细信息

研究背景：肠息肉是引起儿童便血的最常见原因之一,其中幼年性息肉是儿童期最常见的病理类型,发生机制尚不明确,大多数学者认为其预后良好,但仍有一定的复发风险和恶变潜能。近年来,遗传学和表观遗传学机制在肿瘤发生、发展中的作用逐渐受到重视。对成人的研究表明,由于基因突变等原因,肠干细胞中β-catenin过度积聚,使肠干细胞自我更新、克隆增殖和分化的速度超过正常肠上皮组织细胞凋亡的速度,导致肠上皮组织细胞不断扩增并超过邻近的正常肠隐窝,形成肠息肉。而细胞信号转导通路中的Wnt信号通路、PTEN信号通路和BMP信号通路,共同调节肠干细胞中β-catenin水平,使肠上皮细胞的更新和凋亡处于动态平衡,从而控制肠道上皮细胞再生和正常发育的过程。APC是肿瘤抑制基因,也是经典的Wnt通路的阻滞剂;PTEN是磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路抑制剂,与Wnt通路共同调节细胞的更新和凋亡速度。但对儿童最常见的大肠幼年性息肉,尚未见相应抑癌基因APC、PTEN突变的报导。表观遗传修饰如DNA甲基化、组蛋白乙酰化也是目前肿瘤领域研究的热点。在成人结直肠癌中,许多基因启动子区域CpG岛的甲基化已成为肿瘤检测、治疗和预后评价的分子标记。而组蛋白乙酰化状态由组蛋白乙酰转移酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs)调节。HATs和HDACs之间的动态平衡控制着染色质的结构和基因的表达,它们的功能紊乱是肿瘤发生发展的重要分子机制。但在儿童幼年性息肉的发生中是否也存在着APC基因启动子甲基化的改变,以及组蛋白HATs和HDACs功能紊乱目前尚不清楚。目的：通过检测儿童大肠幼年性息肉、息肉蒂部黏膜及正常大肠黏膜组织中的抑癌基因APC、PTEN和癌基因β-catenin的mRNA和蛋白水平的表达,及息肉组织APC基因启动子甲基化状态、乙酰转移酶和去乙酰化酶表达的差异,探讨儿童肠息肉中相关肿瘤基因APC、PTEN及β-catenin的表达及表观遗传修饰变化,试图阐明儿童肠息肉形成的发病机制,为寻找新的防治策略提供理论依据。方法：留取本院经电子结肠镜检查确诊并切除的新鲜息肉组织、息肉蒂部黏膜和同期结肠镜检查正常的大肠黏膜组织,应用RT-PCR技术检测儿童大肠息肉、息肉蒂部黏膜及正常大肠黏膜组织中的抑癌基因APC、PTEN和癌基因β-catenin及乙酰转移酶(CBP、PCAF、P300)、去乙酰化酶(HDAC4、HDAC1)的mRNA表达;采用免疫组织化学检测APC、PTEN、β-catenin的蛋白表达水平;同时应用亚硫酸氢盐基因组测序法(bisulfite genomic sequencing)检测息肉组织及正常大肠黏膜APC基因启动子甲基化状态。结果：多发息肉与单发息肉β-catenin mRNA表达增加,差异有统计学意义,而PTEN和APC mRNA表达下降,差异无统计学意义。多发息肉与单发息肉蒂部黏膜β-catenin mRNA表达增加,差异有统计学意义;PTEN mRNA表达下降,但差异无统计学意义,而APC的变化不明显。多发息肉和单发息肉APC和PTEN的蛋白表达下降,差异有统计学意义,β-catenin的蛋白表达增加,但差异无统计学意义。无论在息肉、息肉蒂部黏膜还是正常大肠黏膜组织,β-catenin全部为膜线性表达。测序发现APC基因扩增病例中除个别息肉蒂部黏膜样本APC CpG岛甲基化率为10%,其余息肉、息肉蒂部黏膜及正常大肠黏膜APC基因扩增产物所有CpG都变成了TpG,提示未发生甲基化。多发息肉和单发息肉乙酰转移酶CBP下降,差异有统计学意义,去乙酰化酶HDACl增加(P=0.051),其余乙酰化酶的差异无统计学意义。多发息肉和单发息肉蒂部黏膜乙酰转移酶CBP下降,差异有统计学意义,其余乙酰化酶的差异无统计学意义。结论：儿童大肠息肉,无论是单、多发息肉还是其蒂部黏膜,在基因转录水平β-catenin的表达明显增加,而在蛋白质水平APC和PTEN的表达明显下降,同时乙酰化的程度减弱,而APC基因的甲基化事件发生频率较低。表明抑癌基因的表达下降和癌基因的表达增加可能参与了儿童大肠息肉的形成,乙酰化程度下降可能是其表观遗传特点。

关键词：大肠息肉肿瘤相关基因表观遗传学 DNA甲基化组蛋白修饰儿童

基于串联质谱标签的蛋白质组学联合高内涵筛选技术筛选胃癌相关基因的研究

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现代肿瘤医学 2023年第12期31卷 2173-2180页

作者：李德红杨兴文赵凤辉颜丽杨晓燕袁秀梅魏莲花杨伟林鲁彦甘肃省人民医院检验中心甘肃兰州730000 甘肃省人民医院病理科甘肃兰州730000 兰州大学第一医院普外科甘肃兰州730000

目的:应用Tandem mass tag(TMT)技术联合高内涵筛选(HCS)寻找潜在的胃癌相关基因。方法:利用TMT技术从胃癌及癌旁组织中筛选差异表达蛋白质,应用GO和KEGG数据库进行注释和信号通路富集并结合PubMed数据库结果,筛选出胃癌中未见或较少报... 详细信息

目的:应用Tandem mass tag(TMT)技术联合高内涵筛选(HCS)寻找潜在的胃癌相关基因。方法:利用TMT技术从胃癌及癌旁组织中筛选差异表达蛋白质,应用GO和KEGG数据库进行注释和信号通路富集并结合PubMed数据库结果,筛选出胃癌中未见或较少报道的上调目的基因。通过shRNA技术敲减基因,HCS技术比较敲减对细胞增殖的影响,筛选出肿瘤增殖相关基因并通过检测mRNA含量、克隆形成和CCK8进行验证。结果:通过TMT从胃癌和癌旁组织定量到差异表达蛋白1008个(上调649个,下调359个),25个目的基因敲减后HCS结果显示SF3B4敲减抑制细胞增殖,验证发现SF3B4是潜在的胃癌细胞增殖相关基因。结论:TMT技术结合HCS为肿瘤相关基因的筛选提供新的可能性。本研究提示SF3B4是潜在的胃癌增殖相关基因,为研究胃癌发生机制提供新线索。

关键词：胃癌串联质谱标签标记定量蛋白组学高内涵筛选肿瘤相关基因

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临床肿瘤基因组学与肿瘤个体化治疗

临床肿瘤学杂志 2010年第6期15卷 481-486页

作者：王理伟王雷李宁上海交通大学附属第一人民医院肿瘤诊治中心上海200080 上海交通大学胰腺癌诊治中心 200080 上海市胰腺病重点实验室 200080

肿瘤治疗在循证医学的基础上逐渐向循因医学过渡,肿瘤个体化治疗已成为肿瘤治疗的发展方向。肿瘤患者对各种化疗药物存在明显的个体差异,其主要原因是患者个体肿瘤相关基因表达的差异和多态性。因此,逐步实现以肿瘤基因组学为指导的个... 详细信息

肿瘤治疗在循证医学的基础上逐渐向循因医学过渡,肿瘤个体化治疗已成为肿瘤治疗的发展方向。肿瘤患者对各种化疗药物存在明显的个体差异,其主要原因是患者个体肿瘤相关基因表达的差异和多态性。因此,逐步实现以肿瘤基因组学为指导的个体化治疗显得越来越重要。

关键词：临床肿瘤基因组个体化治疗肿瘤相关基因

HER-2癌基因信号转导与肿瘤发生之间的关系

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医学综述 2008年第11期14卷 1652-1654页

作者：姜尧任德莲四川省泸州市泸州医学院免疫教研室四川泸州646000

HER-2与许多恶性肿瘤的发生、发展密切相关。HER-2可通过信号转导途径间接调控许多肿瘤相关基因的表达,亦可作为转录因子直接调控某些基因的表达,而一些基因表达产物又进而增强HER-2或其他基因的表达,这就构成了以HER-2为中心的基因表... 详细信息

HER-2与许多恶性肿瘤的发生、发展密切相关。HER-2可通过信号转导途径间接调控许多肿瘤相关基因的表达,亦可作为转录因子直接调控某些基因的表达,而一些基因表达产物又进而增强HER-2或其他基因的表达,这就构成了以HER-2为中心的基因表达调控网络,这些基因表达产物和HER-2可能共同成为肿瘤诊断和预后的标志物。阐明这个网络中各个分子间的相互作用关系,将为HER-2过表达肿瘤的治疗提供新的药物设计靶标。

关键词：肿瘤人表皮生长因子受体2 肿瘤相关基因表达调控