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作者：肖舟中南大学

学位级别：硕士

目的观察高糖刺激下肾组织中ET-1表达水平及肾小管上皮转分化相关蛋白α-SMA及E-cadherin的表达状况,并用冬虫夏草原液进行干预实验,观察上述蛋白表达的变化,进一步探讨糖尿病肾病肾纤维化的发病机制,以及冬虫夏草对这一病理过程的保护... 详细信息

目的观察高糖刺激下肾组织中ET-1表达水平及肾小管上皮转分化相关蛋白α-SMA及E-cadherin的表达状况,并用冬虫夏草原液进行干预实验,观察上述蛋白表达的变化,进一步探讨糖尿病肾病肾纤维化的发病机制,以及冬虫夏草对这一病理过程的保护作用机理。方法对10只Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60mg/kg),诱导成DM模型,DM模型成功4周后测24小时尿蛋白定量,如24小时尿蛋白大于30mg即认为DN模型成功,随机分为模型组、虫草组,每组各5只。另将5只鼠龄、体重相匹配的大鼠作为正常组。虫草组予冬虫夏草粉混悬液1.0g/(kg*d),对照组等量生理盐水灌胃。于干预实验后第4周处死大鼠每组5只。处死前测24小时尿蛋白定量,处死后留血标本测血肌酐;取肾组织进行HE及MASSON染色,观察肾脏组织形态学变化;用免疫组化方法检测肾组织中ET-1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达;用RT-PCR的方法检测ET-1、α-SMA和E-Cadherin的mRNA表达。结果1.糖尿病肾病大鼠肾组织中,ET-1产生增加、α-SMA的表达上调,E-Cadherin表达减少(p肾小管上皮转分化,促进肾间质纤维化发生(p肾小管上皮转分化和促进肾纤维化的作用。2.冬虫夏草对糖尿病肾病具有一定肾脏保护作用及抗肾小球纤维化的作用,其作用机制可能是通过抑制ET-1分泌而使α-SMA表达下调、E-cadherin表达上调而实现。

关键词：糖尿病肾病肾小管上皮转分化内皮素冬虫夏草

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与肾小管上皮转分化相关的miRNA的初步筛选

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浙江医学 2014年第17期36卷 1434-1437,1442页

作者：邵驾宇章慧娣潘嘉林尤小寒薛向阳黄朝兴温州医科大学附属第一医院肾内科 325000 温州医科大学附属第二医院心血管内科温州医科大学微生物免疫学教研室

目的观察miRNA在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)发生上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)过程中的变化,筛选与肾小管上皮细胞转分化相关的miRNA。方法体外培养NRK-52E,用5 ng/ml转化生长因子-13 1(TGF-13 1)分别作用0、3、6、12、24、48 h,以0 ... 详细信息

目的观察miRNA在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)发生上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)过程中的变化,筛选与肾小管上皮细胞转分化相关的miRNA。方法体外培养NRK-52E,用5 ng/ml转化生长因子-13 1(TGF-13 1)分别作用0、3、6、12、24、48 h,以0 h为空白组(BC组),余为TGF-β1组。倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;real-time PCR法检测细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙蛋白(E-cad)、1型胶原(Col 1)和纤连蛋白(FN)的mRNA表达水平;Western blot法检测细胞内α-SMA的表达水平;ELISA法检测上清液中FN的含量;茎环实时荧光定量PCR法检测6条miRNA在细胞内的表达水平。结果与BC组比较,TGF-β1组部分细胞失去原有的鹅卵石形态,转变成成纤维细胞特有的梭形;细胞内α-SMA、Col I和FN的mRNA表达上调,E-cad的mRNA表达下调,细胞内α-SMA表达量增多,细胞上清液中FN含量升高(均P肾小管上皮细胞EMT,值得进一步研究。

关键词：大鼠肾小管上皮细胞肾小管上皮转分化转化生长因子- β1 microRNA

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miR302a-3p在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用及分子机制

miR302a-3p在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用及分子机制

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作者：郑林峰中南大学

学位级别：硕士

背景：糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy, DN)既是糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)的主要微血管病变之一,也是终末期肾病(End-stage renal disease, ESRD)的主要病因之一。糖尿病肾病强调早期诊断与治疗,如果不及时干预,将导致肾小球硬... 详细信息

背景：糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy, DN)既是糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)的主要微血管病变之一,也是终末期肾病(End-stage renal disease, ESRD)的主要病因之一。糖尿病肾病强调早期诊断与治疗,如果不及时干预,将导致肾小球硬化及肾间质纤维化(Tubulointerstitial fibrosis, TIF),最终发展为肾衰竭直至终末期肾病(End-stage renal disease, ESRD)。肾小管上皮细胞转分化(Epithelial to mesenchymal transition, EMT)不仅是TIF的始动环节,而且也是其可逆阶段,所以有关肾小管上皮细胞转分化的研究一直是肾纤维化防治的一个热点。最近发现有多种microRNA参与EMT过程,但机制尚不明确。miR-302a-3p是miR-302家族中的一员,我们经过miRNA基因芯片筛查发现miR-302a-3p在高糖刺激的HK-2细胞中表达上调,说明它可能参与高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化过程,但具体作用及其机制如何是我们需要探讨的问题。目的：探讨miR-302a-3p在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的作用及其分子机制。方法：(1)HK-2细胞分为两组,高糖刺激48h组与低糖组,用miRNA芯片筛查两组之间有差异性表达的miRNA;(2)将HK-2细胞进行高糖刺激,用Realtime PCR来验证miR-302a-3p的表达差异,用Realtime PCR及Wenstern blot来检测高糖刺激0h、6h、12h、24h、48h、72h各个时间点的ZEB1、VIM、E-ca的表达;(3)向HK-2细胞内转染miR-302a-3p的Mimic及Inhibitor,分为空白组、Mimic组、Mimic阴性对照组、Inhibitor组、Inhibitor阴性对照组,转染后高糖培养48小时,用Realtime PCR及Wensternblot来检测ZEB1、VIM、E-ca的表达。结果:(1)microRNA芯片分析提示高糖刺激肾小管上皮细胞48小时后,miR302a-3p、513a-5p、1291等17个miRNA表达明显上调,而miRNA490-3p、638、3203等19个miRNA表达明显下调(p0.05),在Mimic组中,ZEB1蛋白表达下降(P0.05),而E-ca mRNA及蛋白表达下调(P转分化,而抑制miR-302a-3p表达可促进其转分化,且这一过程可能与ZEB1相关;(2) miR-302a-3p可能通过ZEB1对高糖诱导的HK-2细胞转分化起保护作用。

关键词： miR-302a-3p 糖尿病肾病 ZEB1 肾小管上皮转分化

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阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏保护作用的实验研究

阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏保护作用的实验研究

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作者：鲁华河北医科大学

学位级别：硕士

目的:阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)即3-甲氧基-4-羟基-苯丙烯酸钠,是阿魏酸的合成钠盐,已被证明是一种非肽类内皮素受体拮抗剂,可清除自由基,防治脂质过氧化损伤;拮抗内皮素引起的血管收缩、升压、血管平滑肌细胞增值;减轻血管内皮损... 详细信息

目的:阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)即3-甲氧基-4-羟基-苯丙烯酸钠,是阿魏酸的合成钠盐,已被证明是一种非肽类内皮素受体拮抗剂,可清除自由基,防治脂质过氧化损伤;拮抗内皮素引起的血管收缩、升压、血管平滑肌细胞增值;减轻血管内皮损伤、增加一氧化氮(NO)合成、松弛血管平滑肌。SF与肾间质纤维化之间的关系如何,目前尚无定论。通过观察肾小管上皮细胞磷酸化p38MAPK、TGF-β1、α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscular actinα-SMA)的表达情况,研究阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用,探讨其肾脏保护作用的可能机制。方法:选择健康雄性SD大鼠36只(购自河北医科大学试验动物中心),体重180-220g,随机分为假手术组(A组)12只,UUO模型组(B组)12只,阿魏酸钠治疗组(C组)12只。大鼠经2%戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔注射麻醉,仰卧位于手术台上,经侧腹部切口,暴露左侧肾脏,分离左侧输尿管于中上1/3处结扎并剪断,关闭腹腔,逐层缝合,A组开腹后不结扎输尿管,随即缝合腹腔作为对照。C组在术前3天给予阿魏酸钠(阿魏酸钠片溶于0.9%生理盐水中,以110mg/kg/d给药)灌胃, A、B两组仅以生理盐水灌胃(2mL/d)作为对照,实验期间大鼠自由进食。分别至大鼠术后3、7、14天将其断头处死,迅速开腹,切取左

关键词：肾间质纤维化肾小管上皮转分化 p38MAPK α-SMA TGF-β1

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六味地黄丸对慢性肾脏病研究的新进展

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湖南中医药大学学报 2013年第8期33卷 104-107页

作者：陈丽周忠志何泽云唐群徐文峰湖南中医药大学病理教研室湖南长沙410208 中国人民武装警察部队湖南省消防总队医院烧伤整形科湖南长沙410008 湖南中医药大学第一附属医院肾内科湖南长沙410007

慢性肾脏病是影响人民健康的重大疾病之一。六味地黄丸是目前临床运用治疗慢性肾脏病的有效方剂,有一定的临床研究基础,六味地黄丸减轻肾间质纤维化也有广泛的实验研究,作者前期对六味地黄丸和慢性肾衰竭致肾间质纤维化做了大量的研究,... 详细信息

慢性肾脏病是影响人民健康的重大疾病之一。六味地黄丸是目前临床运用治疗慢性肾脏病的有效方剂,有一定的临床研究基础,六味地黄丸减轻肾间质纤维化也有广泛的实验研究,作者前期对六味地黄丸和慢性肾衰竭致肾间质纤维化做了大量的研究,但以往的研究大多局限于肾间质纤维化机制过程中的后三个阶段中细胞外基质和细胞因子的研究,很少涉及第一阶段细胞活化层次的研究,从肾小管上皮细胞转分化角度,对六味地黄丸治疗5/6肾切除大鼠慢性肾衰、减缓肾间质纤维化机理的深层次研究较少,该文综述六味地黄丸对慢性肾脏病临床和实验研究的新进展。

关键词：六味地黄丸慢性肾脏病肾小管上皮转分化

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