miR302a-3p在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用及分子机制

作     者：郑林峰 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈立平;唐文彬

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：miR-302a-3p 糖尿病肾病 ZEB1 肾小管上皮转分化 

摘      要：背景：糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy, DN)既是糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)的主要微血管病变之一,也是终末期肾病(End-stage renal disease, ESRD)的主要病因之一。糖尿病肾病强调早期诊断与治疗,如果不及时干预,将导致肾小球硬化及肾间质纤维化(Tubulointerstitial fibrosis, TIF),最终发展为肾衰竭直至终末期肾病(End-stage renal disease, ESRD)。肾小管上皮细胞转分化(Epithelial to mesenchymal transition, EMT)不仅是TIF的始动环节,而且也是其可逆阶段,所以有关肾小管上皮细胞转分化的研究一直是肾纤维化防治的一个热点。最近发现有多种microRNA参与EMT过程,但机制尚不明确。miR-302a-3p是miR-302家族中的一员,我们经过miRNA基因芯片筛查发现miR-302a-3p在高糖刺激的HK-2细胞中表达上调,说明它可能参与高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化过程,但具体作用及其机制如何是我们需要探讨的问题。 目的：探讨miR-302a-3p在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的作用及其分子机制。 方法：(1)HK-2细胞分为两组,高糖刺激48h组与低糖组,用miRNA芯片筛查两组之间有差异性表达的miRNA;(2)将HK-2细胞进行高糖刺激,用Realtime PCR来验证miR-302a-3p的表达差异,用Realtime PCR及Wenstern blot来检测高糖刺激0h、6h、12h、24h、48h、72h各个时间点的ZEB1、VIM、E-ca的表达;(3)向HK-2细胞内转染miR-302a-3p的Mimic及Inhibitor,分为空白组、Mimic组、Mimic阴性对照组、Inhibitor组、Inhibitor阴性对照组,转染后高糖培养48小时,用Realtime PCR及Wensternblot来检测ZEB1、VIM、E-ca的表达。 结果:(1)microRNA芯片分析提示高糖刺激肾小管上皮细胞48小时后,miR302a-3p、513a-5p、1291等17个miRNA表达明显上调,而miRNA490-3p、638、3203等19个miRNA表达明显下调(p0.05),在Mimic组中,ZEB1蛋白表达下降(P0.05),而E-ca mRNA及蛋白表达下调(P0.05)。 结论：(1)在高糖状态下,过表达miR-302a-3p可逆转HK-2细胞转分化,而抑制miR-302a-3p表达可促进其转分化,且这一过程可能与ZEB1相关;(2) miR-302a-3p可能通过ZEB1对高糖诱导的HK-2细胞转分化起保护作用。