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TGF-β1、TNF-α在实验性斯氏狸殖吸虫病肝纤维化的表达及意义

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TGF-β1、TNF-α在实验性斯氏狸殖吸虫病肝纤维化的表达及意义

作者：员建武昆明医学院

学位级别：硕士

目的观察斯氏狸殖吸虫病大鼠肝纤维化肝脏的病理学特征及血清中转化生长因子β和肿瘤坏死因子α的表达与肝纤维化的关系,从而反映转化生长因子-β和肿瘤坏死因子α在斯氏狸殖吸虫病大鼠肝纤维化中的作用,为临床诊断、预防和治疗提供理... 详细信息

目的观察斯氏狸殖吸虫病大鼠肝纤维化肝脏的病理学特征及血清中转化生长因子β和肿瘤坏死因子α的表达与肝纤维化的关系,从而反映转化生长因子-β和肿瘤坏死因子α在斯氏狸殖吸虫病大鼠肝纤维化中的作用,为临床诊断、预防和治疗提供理论基础。方法将42只大鼠随机分为两组,即对照组6只,感染组36只,在同等条件下饲养,感染组每只大鼠腹腔注射15只囊蚴建立动物模型。模型建立成功后感染组则按感染时间分为A组(6只,感染1周)B组(6只,感染2周)C组(6只,感染4周)D组(6只,感染8周)E组(6只,感染12周)F组(6只,感染16周);在感染后不同时间剖杀大鼠,剖杀前先用乙醚麻醉大鼠,然后用注射器从颈静脉抽取大鼠静脉血然后转移至2ml EP管中;取完静脉血后剖杀大鼠取肝组织并固定,肝组织采用石蜡切片,HE染色和VG染色,光镜下观察大鼠肝纤维化的程度;静脉血用离心机在2000转/min下离心15分钟,取其血清,用酶联免疫吸附试验检测斯氏狸殖吸虫病大鼠血清中转化生长因子β和肿瘤坏死因子α的表达情况。结果HE染色和VG染色结果：对照组正常肝组织的肝细胞排列整齐,肝小叶结构完整,仅见少许纤细纤维分布于血管壁;汇管区无纤维结缔组织增生,无炎性细胞浸润。实验组肝脏组织病理学变化主要表现为：感染1周后,大鼠肝小叶结构完整,肝细胞水肿,少数肝细胞脂肪变性,无明显肝细胞坏死;感染2周后,大鼠肝小叶结构完整,出现广泛的肝细胞脂肪变性及散在的气球样变性,中央静脉及汇管区有大量炎症细胞浸润,并可见少数点状坏死;感染4周末大鼠肝小叶结构仍较完整,但肝细胞气球样变性、坏死及炎症细胞浸润较2周末明显,出现片状坏死,感染8周后,肝脏突出的病变为急性化脓性炎症,在肝组织内形成小脓肿;感染12周后大鼠肝组织内出现片状纤维组织增生,小血管及小胆管增生,部分肝小叶结构破坏、重建,部分门管区纤维增生,增生纤维形成条索,向肝小叶内伸展,增生纤维内可见少数淋巴细胞、中性粒细胞浸润;感染16周后大鼠肝组织出现肝细胞大片坏死,汇管区纤维组织增生,增生纤维形成条索,小叶结构紊乱,出现桥接样坏死。大鼠血清中转化生长因子-β的表达在大鼠感染1周后已有变化,在感染2周后比第1周有稍明显的增高,随着感染时间的推移,大鼠血清中转化生长因子-β的表达逐渐递增,8周后血清中含量有了大幅增高,在16周达到最高。随着感染时间的推移,大鼠肝纤维化的程度加深,血清中转化生长因子-β的表达也逐渐增高。大鼠血清中肿瘤坏死因子α的表达在感染1周,2周,4周都相继递增,但增幅不高,在8周,12周,16周都有大幅的增高,在16周达到最高。随着感染时间的推移,大鼠血清中肿瘤坏死因子α的表达整体态势也呈递增的态势。结论结合大鼠感染时间的长短,大鼠肝脏病理学变化以及大鼠血清中转化生长因子-β和肿瘤坏死因子α的表达情况得出结论：大鼠感染斯氏狸殖吸虫囊蚴后肝脏的损害程度在感染后随着时间的延长纤维化在不断加深,大鼠血清中转化生长因子-β和肿瘤坏死因子α的表达也随着感染时间的延长也逐渐增高。转化生长因子-β和肿瘤坏死因子α与肝纤维化的形成有着密切的联系,转化生长因子-β和肿瘤坏死因子α在诱导肝纤维化形成过程中起着重要的作用。

关键词：转化生长因子-β1 肿瘤坏死因子α 斯氏狸殖吸虫肝脏纤维化

IL-4、IFN-γ在斯氏狸殖吸虫感染大鼠肝脏损害的表达及意义

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IL-4、IFN-γ在斯氏狸殖吸虫感染大鼠肝脏损害的表达及意义

作者：陈鹏昆明医学院

学位级别：硕士

[目的]观察斯氏狸殖吸虫对大鼠肝脏损害的不同时期,肝脏纤维化与细胞因子IL-4、INF-γ在肝脏表达的动态变化关系,探讨IL-4、IFN-γ在斯氏狸殖吸虫感染大鼠肝脏纤维化形成及调节中的作用和意义,从而了解Th1/Th2在斯氏狸殖吸虫感染大鼠肝... 详细信息

[目的]观察斯氏狸殖吸虫对大鼠肝脏损害的不同时期,肝脏纤维化与细胞因子IL-4、INF-γ在肝脏表达的动态变化关系,探讨IL-4、IFN-γ在斯氏狸殖吸虫感染大鼠肝脏纤维化形成及调节中的作用和意义,从而了解Th1/Th2在斯氏狸殖吸虫感染大鼠肝纤维化形成及调节作用,进一步探索斯氏狸殖吸虫感染大鼠肝纤维化中的细胞免疫应答机制。 [方法]将36只大鼠随机分为两组,即对照组6只和感染组30只。将斯氏狸殖吸虫囊蚴经腹腔注射感染大鼠以建立动物模型。感染组则按感染时间的长短分为A组(感染1周),B组(感染2周),C组(感染4周),D组(感染8周),E组(感染12周),F组(感染16周)。分别在感染后的不同时段剖杀大鼠,取其肝脏,采用石蜡切片,HE染色、VG染色,光镜观察肝脏坏死程度及胶原分布情况;免疫组织化学法测定IL-4、IFN-γ在斯氏狸殖吸虫病大鼠肝脏肝纤维化形成过程中的表达动态变化。 [结果]HE染色和VG染色结果:对照组正常肝组织的肝细胞排列整齐,肝小叶结构完整,仅见少许纤细纤维分布于血管壁;汇管区无纤维结缔组织增生,无炎性细胞浸润,免疫组化方法观察正常组肝脏细胞因子IL-4、IFN-γ在肝脏基本不表达。感染组感染后1周末肝小叶结构完整,肝细胞水肿;感染后2周末大鼠肝小叶结构完整,出现广泛的肝细胞脂肪变性及散在的气球样变性,中央静脉及汇管区有大量炎症细胞浸润,并可见少数点状坏死,VG染色无纤维结缔组织增生;感染4周末大鼠肝小叶结构仍较完整,但肝细胞气球样变性、坏死及炎症细胞浸润较2周末明显,出现片状坏死,VG染色有少许纤维结缔组织增生;感染后8周末肝脏突出的病变为急性化脓性炎症,在肝组织内形成小脓肿;感染后12周末肝组织内出现片状纤维组织增生,小血管及小胆管增生,部分肝小叶结构破坏、重建,部分门管区纤维增生,增生纤维形成条索,向肝小叶内伸展,增生纤维内可见少数淋巴细胞、中性粒细胞浸润;感染后16周末出现肝细胞大片坏死,汇管区纤维组织增生,增生纤维形成条索,小叶结构紊乱,出现桥接样坏死。感染组各组随着斯氏狸殖吸虫感染时间的长短、纤维化程度的加深、细胞因子IL-4、IFN-γ在肝脏表达有所变化。阳性表达多定位汇管区、血管壁、纤维间隔条索间及肝小叶坏死区的异物巨细胞、淋巴细胞和巨噬细胞的胞浆;肝细胞内未见阳性信号。Th1细胞因子IFN-γ在感染后1到8周末开始上升,在8周末达高峰,随后下降。而Th2细胞因子IL-4在感染后12周末时迅速上升且随感染时间延长而明显升高。 [结论]结合肝脏损害HE染色、VG染色的光镜片得出结论:大鼠感染斯氏狸殖吸虫囊蚴后肝脏的损害程度在感染后随着时间的延长纤维化在不断加深,IL-4、IFN-γ随着肝脏纤维化程度的加深表达有所变化。Th1细胞分泌的细胞因子IFN-γ与斯氏狸殖吸虫肝纤维化诱导和形成密切相关。而Th2细胞分泌的细胞因子IL-4可抑制Th1细胞分泌的细胞因子,Th2细胞分泌的细胞因子IL-4在斯氏狸殖吸虫肝纤维化的自发性免疫调节中起重要作用。

关键词： IL-4 IFN-γ 斯氏狸殖吸虫肝脏纤维化免疫组化

胆管梗阻大鼠模型中卵原细胞的超微病理结构和时序性变化的研究

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胆管梗阻大鼠模型中卵原细胞的超微病理结构和时序性变化的研究

作者：孙珅天津医科大学

学位级别：硕士

一、背景和目的在肝胆外科临床中,胆管梗阻、胆汁淤积是常见的病理环境,较长时间梗阻,可诱发永久性肝损害,甚至发展成肝纤维化及肝硬化,是临床治疗的难题,相关发病机制基础研究有现实意义。现已发现人类慢性肝病组织如肝硬化、... 详细信息

一、背景和目的在肝胆外科临床中,胆管梗阻、胆汁淤积是常见的病理环境,较长时间梗阻,可诱发永久性肝损害,甚至发展成肝纤维化及肝硬化,是临床治疗的难题,相关发病机制基础研究有现实意义。现已发现人类慢性肝病组织如肝硬化、亚急性肝坏死后肝再生、儿童先天性肝外胆管闭锁、遗传性血色病、慢性病毒性肝炎、原发性肝癌中都存在类似于卵圆细胞的肝前体细胞。这种肝前体细胞定位于汇管区、纤维间隔、汇管区旁肝实质、假小叶及炎症边界。随着肝脏卵圆细胞特异性标记物的发现,卵圆细胞相关研究成为热点,特别是肝脏卵圆细胞参与肝脏损伤修复、肝脏纤维化的相关研究。这些为研究肝脏损伤的保护、治疗及肝纤维化的形成机制提供了最新途径。因此,本研究通过结扎Wistar大鼠胆总管,模拟胆管梗阻病理状态,通过免疫组化、PCR、透射电镜技术,探讨这一病理过程肝脏卵圆细胞在胆管梗阻肝脏纤维化过程中的变化与发挥的作用。二、材料与方法雄性Wistar大鼠60只,体重250-300克,健康,无明显畸形,将动物随机分成两组,一组（30只）作为实验组实施近肝门端胆总管单线结扎（BDL术）;另一组（30只）作为对照组实施假手术,开腹游离胆总管但不结扎。术后相同条件下饲养。分别于术后第1天、2天、3天、7天、14天、21天处死大鼠,每组各处死5只,取肝右叶应用4%多聚甲醛固定,留作免疫组化;取肝左叶-80℃冻存,留作RT-PCR检测;肝中叶小片肝组织,固定后留作电镜观察。 1、通过肉眼及HE染色观察胆管梗阻不同时间点肝脏形态改变。 2、通过免疫组化,OV-6标记卵圆细胞,观察不同时间点卵圆细胞的数目、分布。 3、通过投射电子显微镜观察卵原细胞的超微结构变化。 4、通过PCR检测各目的基因：肝细胞生长因子（HGF）,胶原蛋白I （COL I）,观察不同时间点各基因的表达情况。三、结果 1、大体结果 Wistar大鼠胆管梗阻后可见肝脏黄染并肿胀,肝脏淤血、水肿。福尔马林固定后部分大鼠的肝叶标本,可见表面粗糙,颜色灰白等肝组织早期肝纤维化的表现。对照组：肝脏标本各肝叶色泽红润,表面光滑。 2、HE染色结果：对照组：肝组织结构正常。实验组：术后第1天见少量嗜中性粒细胞和淋巴细胞浸润;术后第2天少许新增生无管腔的小胆管,少量嗜中性粒细胞和淋巴细胞浸润;术后第3天新增生的细小胆管和无管腔的小胆管,嗜中性粒细胞和淋巴细胞浸润较术后第2天明显增加,肝细胞轻度变性,可见灶状和片状坏死,肝组织汇管区可见胆管增生和纤维组织细胞增生,偶见胆管扩张;术后第7天肝细胞出现变性坏死发生率增加及程度加重,重者见片状出血和坏死,肝组织门区可见胆管增生和纤维细胞增生;术后14天小叶结构受到破坏,可见肝细胞空泡变性及坏死;术后21天小叶结构破坏更加严重,大量肝细胞坏死。随时间进展肝脏损伤、纤维化程度逐渐加重。 3、免疫组化结果 OV-6免疫组化阳性染色的细胞数目及分布范围随着梗阻时间的延长而增加,实验组和对照组有明显差异。OV-6阳性细胞表达部位主要位于汇管区胆管及肝间质新增生胆管及无管腔的小胆管细胞胞浆中。 4、电子显微镜观察结果对照组：肝组织及肝细胞结构基本正常。实验组：术后1天血管旁可见少量卵圆形核细胞,有少量圆钝的胞质突起,核浆比大,胞质量少,细胞器数量少;术后2天肝细胞间也可找到一些卵圆形细胞,细胞切面呈钟形或胖橄榄形,核近似卵圆形,核大,核浆比大,胞质少,发育差;术后3天部分肝血窦内皮损伤,内皮细胞断裂崩解,内皮细胞核小,异染色质呈浓染的团块,边集于核膜下。枯否细胞内吞噬泡数量较多,细胞间隙内卵圆形核细胞多见;术后7天肝细胞板出现大的空隙,或仅残存细胞框架,一些肝细胞呈不可逆损伤,一些细胞呈凋亡样坏死,肝细胞间可见多形核白细胞存在,一些细胞仅可分辨核的大小差异,细胞无可分辨的细胞细节,在形态尚好的部位,仍可找到少量存活的卵圆核细胞,已向肝细胞方向分化;术后14天肝细胞间可见一些立方形细胞,4-5个细胞形成片块,细胞间可见小管样结构,两端的细胞间有紧密连接,小管内有微绒毛伸入,腔内无内容物,核形近似卵圆,但不甚规则,核膜有凹陷,细胞器中等发育,细胞片块与肝细胞有连接;术后21天一些胶原纤维束提示窦周间隙的位置。肝细胞间可见卵圆形核细胞片块,其中有的细胞含大量脂滴;有的细胞是成纤维细胞,细胞周围有大量胶原纤维存在;其余细胞性质不可辨。 5、RT-PCR结果在对照组和实验组大鼠肝脏中均能检测出目的基因的表达。统计分析显示两组COLⅠ的表达差异从第1天开始有统计学意义,HGF的表达差异从第3天开始有统计学意义。对实验组不同天数组间的表达研究发现COLⅠ在3-7天无统计学意义,HGF在1-3天、7

关键词：胆管梗阻肝脏损伤肝脏纤维化卵圆细胞修复超微结构肝细胞生长因子 Ⅰ型胶原蛋白

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瞬时超声弹性成像肝脏弹性模量检测系统设计

瞬时超声弹性成像肝脏弹性模量检测系统设计

作者：李光贤浙江大学

学位级别：硕士

研究显示,肝纤维化晚期约半数会发展为肝硬化或肝癌,因此肝纤维化早期的诊断对于疾病的有效治疗具有重要价值。传统的诊断方法B超、CT不能提供组织的力学参数信息,核磁成像难以实时检测,而肝穿刺又具有较大的副作用,它们都不能作为早期... 详细信息

研究显示,肝纤维化晚期约半数会发展为肝硬化或肝癌,因此肝纤维化早期的诊断对于疾病的有效治疗具有重要价值。传统的诊断方法B超、CT不能提供组织的力学参数信息,核磁成像难以实时检测,而肝穿刺又具有较大的副作用,它们都不能作为早期的临床普诊方法。因此开发出一种无损、实时、低成本、能够检测出肝脏组织弹性模量的成像方法,对肝脏纤维化早期检测具有重要意义。弹性成像作为一种新的成像方法,可以获取组织的弹性模量等力学参数信息,为肝脏早期检测提供了方向。本文采用瞬时弹性成像方法,设计开发出肝脏弹性模量检测系统。本文设计了超声瞬时弹性成像肝脏弹性模量检测系统的硬件与算法。首先,对整个成像算法原理分析,并通过C++/OpenCV实现。为了减少位移估计中的冗余计算,提出了基于差方和为相似度标准的积分图位移估计算法,比传统归一化互相关算法降低50%的计算时间。其次硬件系统采用FPGA实现系统控制,利用模拟前端芯片实现超声信号的放大与模数转换;并对电路原理图与控制程序做了分析。最后对整个系统的测量精度与可重复性进行了实验,结果表明弹性模量小于25KPa的仿体,系统准确性标准离差率小于0.1;人体、仿体重复性标准离差率小于0.12。总之,所设计的超声瞬时弹性成像系统测量准确,可重复性高,具有较高临床实用价值。

关键词：瞬时弹性成像肝脏纤维化弹性模量位移估计 SSD积分图法

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SIRT1调控肝星状细胞激活的机制研究

SIRT1调控肝星状细胞激活的机制研究

作者：洪文轩南京医科大学

学位级别：硕士

肝纤维化被广泛认为是肝损伤后组织修复的宿主防御机制。然而,过度的纤维会破坏正常的肝脏结构并且会造成不可逆转的肝脏疾病如肝硬化和肝细胞癌。肝星状细胞(HSC)的激活是肝纤维化过程中的标志性事件。在本课题中,我们研究了赖氨酸去... 详细信息

肝纤维化被广泛认为是肝损伤后组织修复的宿主防御机制。然而,过度的纤维会破坏正常的肝脏结构并且会造成不可逆转的肝脏疾病如肝硬化和肝细胞癌。肝星状细胞(HSC)的激活是肝纤维化过程中的标志性事件。在本课题中,我们研究了赖氨酸去乙酰化酶SIRT1调控HSC激活的机制。在不同的肝纤维化模型中,SIRT1表达水平下调;在HSC体外激活过程中,SIRT1的表达水平依然下调。并且,在SIRT1下调的同时伴随着HDAC4的表达上调。在HSC激活过程中,HDAC4被募集到SIRT1启动子上并去除组蛋白H3、H4的乙酰化水平从而导致了SIRT1的转录抑制。HDAC4沉默可以恢复SIRT1表达并抑制HSC激活,而这一效应依赖于SIRT1。更重要的是,在HSC中特异性敲除SIRT1加剧了四氯化碳(CCl)诱导的小鼠肝脏纤维化。更进一步,SIRT1能够减少PPARγ乙酰化修饰,从而阻断HSC激活。总之,我们的实验表明HDAC4-SIRT1-PPARγ轴在HSC的激活和肝脏纤维化进程中发挥了重要作用。

关键词：肝脏纤维化转录调控肝星状细胞 SIRT1 表观遗传

Periostin敲除或过表达对小鼠结直肠癌肝转移的影响

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Periostin敲除或过表达对小鼠结直肠癌肝转移的影响

作者：林碧宇厦门大学

学位级别：硕士

已有文献报道在结直肠癌发生发展的过程中,细胞外基质蛋白Periostin在原位结直肠癌及肝转移灶处均高表达,表明Periostin与结直肠癌的发展与转移密切相关。也有研究表明,Periostin能够调控肝脏纤维化的过程,而肝脏纤维化与多种癌症肝转... 详细信息

已有文献报道在结直肠癌发生发展的过程中,细胞外基质蛋白Periostin在原位结直肠癌及肝转移灶处均高表达,表明Periostin与结直肠癌的发展与转移密切相关。也有研究表明,Periostin能够调控肝脏纤维化的过程,而肝脏纤维化与多种癌症肝转移相关。我们之前的研究表明敲除Periostin能够抑制结直肠癌肝转移恶性程度,而在肝脏处特异性过表达Periostin能够促进结直肠癌肝转移,但是Periostin在该过程中对结直肠癌细胞的具体作用还不清楚。在本研究中,我们在两种背景的小鼠C57BL/6及BALB/C中都证明了敲除Periostin能够直接减少肝转移灶处结直肠癌细胞的增殖,小鼠的肝重比降低,并且在C57BL/6背景小鼠中证明了敲除Periostin型小鼠患结直肠癌肝转移的存活时间长于野生型小鼠,而在小鼠肝脏处特异性过表达Periostin能够促进肝转移灶处更多结直肠癌细胞增殖,并且过表达Periostin能够促进肝转移灶处形成更加明显的纤维化微环境,胶原沉积显著性增加,同时TGF-β表达量上调。同时,我们发现Periostin在促进纤维化形成的过程中也促进了肝转移灶处形成炎症微环境,过表达Periostin能够进一步促进炎症反应。分子机制方面,我们发现Periostin能够激活FAK信号通路及下游ERK信号通路来调控TGF-β表达,而TGF-β能够通过Smad依赖的信号通路调控Periostin表达。在结直肠癌病人的临床样本中,我们发现肝转移与原位结直肠癌样本的肿瘤微环境相似,都形成了纤维化微环境,在肝转移灶处肝脏星形细胞激活,胶原沉积,并且激活的肝脏星形细胞中发生了 Smad3磷酸化。这些结果表明,敲除或过表达Periostin对小鼠结直肠癌细胞的肝转移均有明显影响。该研究将有助于进一步阐明Periostin在结直肠癌肝转移中的功能及作用机制。

关键词： Periostin 结直肠癌肝转移 TGF-β 肝脏纤维化

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常染色体隐性遗传多囊性肾病的临床表现

肾脏病与透析肾移植杂志 1993年第6期2卷 492-494页

作者：王庆文南京金陵医院全军肾脏病研究所

常染色体隐性遗传多囊性肾病(ARPKD)是一种遗传性囊性肾脏病。估计其发生率在1/10000至1/40000。发病率的差异与所研究的人群和方法不同有关。患者常在胎儿和婴儿期出现肾功能不全,但临床表现也可延迟发生。患者表现为肾脏囊肿和肝脏纤... 详细信息

常染色体隐性遗传多囊性肾病(ARPKD)是一种遗传性囊性肾脏病。估计其发生率在1/10000至1/40000。发病率的差异与所研究的人群和方法不同有关。患者常在胎儿和婴儿期出现肾功能不全,但临床表现也可延迟发生。患者表现为肾脏囊肿和肝脏纤维化。在年青成人出现典型的ARPKD的临床表现,而肾脏表现在胎儿和婴儿也可发现。

关键词：多囊性肾病肝脏纤维化 ADPKD 肾功能不全肝纤维化超声检查集合系统婴儿期隐性遗传羊水过少

转录辅激活因子MED1在CCl4诱导肝纤维化中的作用研究

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转录辅激活因子MED1在CCl4诱导肝纤维化中的作用研究

作者：岳少云阜阳师范大学

学位级别：硕士

目的:肝纤维化是动态和高度整合细胞对慢性肝损伤的一种反应,是肝细胞炎症引起的瘢痕组织过度堆积,最终会导致肝硬化甚至肝癌。MED1是Mediator复合物的关键成员,其与转录因子相互作用促进转录起始复合物的形成,控制Pol II的活性和延伸,... 详细信息

目的:肝纤维化是动态和高度整合细胞对慢性肝损伤的一种反应,是肝细胞炎症引起的瘢痕组织过度堆积,最终会导致肝硬化甚至肝癌。MED1是Mediator复合物的关键成员,其与转录因子相互作用促进转录起始复合物的形成,控制Pol II的活性和延伸,参与对组蛋白密码、染色质高级结构及相分离的调控。尽管MED1在肝脏再生和脂质代谢等方面发挥着作用,但其在肝纤维化中的作用及机制尚不明确。因此,我们通过GEO数据库,对小鼠肝脏纤维化样本进行了筛查,运用GEO2R对样本进行质控、过滤及差异表达分析,并以肝脏MED1特异性敲除小鼠为模型,给予CCl刺激,构建肝纤维化损伤模型,通过H&E染色、免疫组化、RT-PCR和Western Blot等技术手段探究MED1在CCl诱导的肝纤维化中的作用及分子机制。方法:一、利用GEO数据库分析MED1在肝纤维化中的表达利用NCBI(https://***/)GEO数据库,以Liver Fibrosis为关键字对基因表达数据(鼠源)进行筛选,获得(GSE55747)健康和疾病状态共计10个样本,利用GEO2R对这10个样本进行质控、过滤及差异表达分析。二、构建MED1特异性敲除小鼠肝纤维化损伤模型将MED1fl/fl小鼠与MED1小鼠杂交,获得子代小鼠,剪取3周龄尾部提取DNA,PCR检测Cre阳性(有401bp片段)表达。在第8周龄开始持续6周注射CCl,每周3次,构建肝纤维化损伤模型。三、生化与病理学检测利用AST、ALT检测肝损伤MED1和MED1fl/fl小鼠转氨酶水平,H&E染色观察肝细胞损伤及炎症状况,天狼星红和Masson观察胶原沉积,免疫组化检测肝星状细胞活化的分子标记(α-SMA)。四、分子生物学检测运用RT-PCR和Western Blot技术检测肝脏纤维化分子标记(IL-1β、TGF-β、MMPs、Colla1、TIMPs等)m RNA及FN-1、Egr1、α-SMA等蛋白表达水平。结果:一、GEO数据显示,与健康样本相比,肝脏纤维化样本中MED1及其家族成员荧光值有显著的升高(p纤维化中参与了细胞增殖调控。二、PCR结果鉴定表明,Cre阳性(具有401bp条带)的为MED1小鼠。小鼠腹腔最后一次注射CCl,48小时后称其体重,处死,MED1相比MED1fl/fl小鼠肝脏颜色鲜艳质地柔软表面没有坚硬颗粒,且体重差异显著(P纤维化损伤模型构建成功。三、MED1较MED1fl/fl小鼠ALT与AST水平显著降低(P肝脏ECM积累减少,免疫组化进一步显示MED1小鼠α-SMA表达减少,说明肝星状细胞的活性被抑制,肝纤维化减轻。四、RT-PCR结果显示MED1小鼠MMP2、MMP13 m RNA表达水平显著降低,TIMP1表达减少,表明MED1缺失影响基质金属蛋白酶的表达;MED1小鼠TNFα、MIP2、Colla1的表达减少,表明MED1小鼠纤维形成减少。Western Blot结果显示TGFβ1、α-SMA和FN1的表达降低,进一步证明MED小鼠肝纤维化程度较轻。结论:在CCl诱导的肝纤维化模型中,肝脏MED1特异性缺失能够抑制HSCs的激活,减少纤维的生成,从而可减轻肝纤维化程度。

关键词：肝脏MED1特异性敲除小鼠肝脏纤维化肝星状细胞

BCS和慢性乙肝肝纤维化的弹性成像及病理对照研究

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BCS和慢性乙肝肝纤维化的弹性成像及病理对照研究

作者：张雁中国人民解放军医学院

学位级别：硕士

目的结合肝脏的组织活检病理,对声脉冲辐射力弹性成像(ARFI)技术在布加综合征(BCS)纤维化患者、慢性乙型肝炎肝纤维化患者中测定的肝组织硬度值(LS),进行对比分析,以期得出影响肝脏弹性值的主要因素及ARFI技术对在肝脏纤维化程度中的... 详细信息

目的结合肝脏的组织活检病理,对声脉冲辐射力弹性成像(ARFI)技术在布加综合征(BCS)纤维化患者、慢性乙型肝炎肝纤维化患者中测定的肝组织硬度值(LS),进行对比分析,以期得出影响肝脏弹性值的主要因素及ARFI技术对在肝脏纤维化程度中的可用性和实用性。资料与方法对在我院及附属医院收集的115例乙肝病例,和80例布加氏综合征的患者,通过手术或穿刺获得肝组织病理。所有的病例在取得病理组织前,手术的患者术后一周同样再进行一次弹性检查,记录整理两组患者的弹性值。参照肝脏纤维化程度的分级标准,依据病理活检结果,将BCS肝脏纤维化患者及慢性乙肝纤维化患者分为肝纤维化FO、F1、F2、F3、F4组,分别对BCS肝纤维化的患者各组间、慢性乙肝肝纤维化的各组间、以及各个病理分期的两类病例的弹性值进行,统计分析,及组间比较。结果1、在115例CHB患者中,其中F0期、F1期、F2期、F3期、F4期分别为24例,251例1,27例,22例1,17例,LS测值为(1.077±0.055)m/s、(1.094±0.042)m/s、(1.427±0.089)m/s、(1.749±0.106)m/s, (2.444±0.091)m/s, (H= 23.8114, P=0.001),FO与F1无统计学差异,F1 F2、F3、F4建存在明显的统计学差异。2、80例BCS患者中,F0期、F1期、F2期、F3期、F4期,分别为0例1、6例、39例、20例、15例,2cm、3cm、4cm、5cm深度F1-F4肝脏LS测值：2cm深度分别为(1.132±0.150)m/s、(1.973±0.431) m/s、(2.579±0.266)m/s、(3.500±0.202) m/s, (H= 45.76, P=0.0016);3cm深度分别为(1.127±0.112) m/s、(1.868±0.292) m/s、(2.616±0.152) m/s、(3.49±0.415) m/s, (H= 19.9282, P=0.0002);4cm深度分别为(1.105±0.264) m/s、 (1.924±0.344) m/s、(2.444±0.213) m/s、(3.520±0.491) m/s, (H= 10.8582, P=0.0125);5cm深度分别为(1.1217±0.333) m/s、(1.638±0.262) m/s、 (2.404±0.385) m/s、(3.147±0.526) m/s, (H= 5.7015, P=0.0013).各组之间存在统计学差异,组间两两比较,(a纤维化患者和慢性乙肝肝纤维化患者的弹性值做比较。的结论1、声脉冲辐射力成像(ARFI)技术在肝脏不同程度的纤维化的判断中是有意义的2、在肝脏弹性值的影响因素中,除了肝脏纤维化的程度,肝脏门脉血流的变化也会产生一定影响。3、同一病理分级的BCS肝纤维化和慢性乙肝肝纤维化中,前者的弹性值大于后者。

关键词：肝脏纤维化弹性成像技术慢性乙型肝炎布加氏综合征