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AKT通过C-myc通路调控肝癌HepG2细胞中PTEN蛋白的表达

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肿瘤 2020年第2期40卷 102-112页

作者：郭春华张雅雅刘蕾万幼峰陆军第七十三集团军医院肿瘤科福建厦门361001

目的:探讨C-myc是否参与肝肿瘤HepG2细胞内蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)对第10号染色体同源丢失性磷酸酶基因和张力蛋白(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)表达的调控。方法:HepG2细胞经不同浓度的AKT抑制剂Capivasertib(5、10及20nmol/L)处理后,采用蛋白质印迹法检测AKT、C-myc和Bad及其磷酸化蛋白的表达情况;实时荧光定量PCR法检测对C-myc下游真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor-4E,eIF-4E)、支链氨基酸氨基转移酉每1(branched-chain amino acid aminotransferase 1,BCAT1)及WW结构域E3泛素连接酶1(WW domain-containing E3 ubiquitin protein ligase 1,WWP1)基因转录活性的影响。采用siRNA法沉默HepG2细胞中eIF-4E、BCAT1及WWP1基因的表达,分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测沉默eIF-4E、BCAT1及WWP1基因表达对PTEN转录和蛋白表达水平的影响;细胞荧光免疫法检测Capivasertib或沉默WWP1基因表达对PTEN在HepG-2细胞中表达和定位的影响。结果:HepG2细胞经不同浓度的Capivasertib处理8 h后,磷酸化-AKT(phospho-AKT,p-AKT)、p-C-myc和p-Bad蛋白的表达水平均较对照组明显下调(P值均0.05),但沉默WWP1基因表达可使PTEN蛋白的表达水平明显上调(P实验进一步证实,沉默WWP1基因表达与Capivasertib作用均可增强PTEN在HepG2细胞中的表达水平并使其在细胞膜上聚集。结论:AKT能通过C-myc信号途径影响WWP1基因的转录水平,进而实现对HepG2细胞中PTEN表达的调控。

关键词：肝肿瘤,实验性 AKT信号通路原癌基因蛋白质c-myc PTEN

苍术酮对肝癌HepG2细胞活性、凋亡的影响及其相关机制

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临床肝胆病杂志 2021年第11期37卷 2589-2594页

作者：杨雪丽薛建华陈天阳平键侯天禄陈建杰成扬上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所上海201203 上海浦东新区传染病医院肝病科上海201299

目的观察苍术酮对肝癌HepG2细胞活性、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以肝癌HepG2细胞为研究对象,分为苍术酮低、中、高剂量组(5、10、20μmol/L),对照组加入等体积的DMSO。MMT比色法检测不同浓度苍术酮处理后HepG2细胞活性。流式... 详细信息

目的观察苍术酮对肝癌HepG2细胞活性、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以肝癌HepG2细胞为研究对象,分为苍术酮低、中、高剂量组(5、10、20μmol/L),对照组加入等体积的DMSO。MMT比色法检测不同浓度苍术酮处理后HepG2细胞活性。流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率及线粒体膜电位。DCFH-DA荧光探针标记法检测HepG2细胞内ROS水平。Transwell实验检测苍术酮对HepG2细胞迁移能力的影响。蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,组间的两两比较采用LSD-t检验。结果在苍术酮处理细胞24、48 h后,与对照组同一时间相比,苍术酮低、中、高剂量组的细胞活性呈下降趋势,且差异均有统计学意义(P值均实验基础。

关键词：肝肿瘤,实验性苍术酮细胞活性细胞凋亡

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临床肝胆病杂志 2021年第6期37卷 1336-1341页

作者：曹曦孙艳玲陈翠英肖义炜向宽辉刘学恩庄辉北京大学医学部基础医学院病原生物系和感染病中心北京100191 解放军总医院第五医学中心肝病医学中心肝病外科北京100853 江苏先思达生物科技有限公司南京210000

目的本研究通过对HBV相关肝细胞癌(HCC)患者血清N-聚糖检测及肝癌组织与癌旁组织中糖基转移酶基因表达水平比较分析,探索HCC患者血清N-聚糖变化的可能机制。方法收集解放军总医院2018年—2019年HBV相关HCC手术患者(34例)的肝癌和癌旁组... 详细信息

目的本研究通过对HBV相关肝细胞癌(HCC)患者血清N-聚糖检测及肝癌组织与癌旁组织中糖基转移酶基因表达水平比较分析,探索HCC患者血清N-聚糖变化的可能机制。方法收集解放军总医院2018年—2019年HBV相关HCC手术患者(34例)的肝癌和癌旁组织及正常肝组织标本,同时采集血清标本。从34例HCC患者中随机选择8例HCC患者血清标本作为HCC试验组,20例健康成年人血清标本作为对照组。应用DSA-FACE法分析HCC试验组与对照组血清N-聚糖图谱。采用荧光定量PCR法检测34例HBV相关HCC患者癌组织和癌旁组织中8种糖基转移酶基因(FUT3、FUT4、FUT6、FUT7、FUT8、Gn-TⅢ、Gn-TⅣa和Gn-TⅤ)mRNA表达水平,并应用蛋白印迹法检测相应蛋白表达水平。计量资料两组间比较采用独立样本t检验。结果与对照相比,8例HCC患者血清中N-聚糖峰9(peak9,NA3Fb)的丰度明显升高(t=-2.514,P<0.05)。糖基转移酶FUT8、Gn-TⅣa和Gn-TⅤ基因mRNA表达水平在癌组织和癌旁组织间有差异,其中癌组织中FUT8和Gn-TⅤ基因的mRNA与蛋白表达水平显著高于癌旁组织(mRNA:1.50±0.34 vs 0.65±0.11,t=-2.354,P=0.022;3.57±0.64 vs 1.33±0.16,t=-3.384,P=0.001)(蛋白:0.70±0.11 vs 0.083±0.017,t=9.555,P=0.001;1.33±0.19 vs 0.60±0.15,t=5.097,P=0.007);癌组织中Gn-TⅣa基因的mRNA表达水平显著高于癌旁组织(mRNA:2.90±0.47 vs 1.68±0.19,t=-2.403,P=0.019),蛋白表达水平与癌旁组织无显著差异(蛋白:0.52±0.24 vs 0.24±0.11,t=1.833,P=0.141)。癌组织中这些糖基转移酶表达改变与血清中N-聚糖丰度变化一致。结论HBV相关HCC患者血清中一些N-聚糖水平变化可能与肝癌组织中糖基转移酶基因GnT-V、GnT-IVa和FUT8表达上调密切相关。

关键词：肝肿瘤,实验性 N-聚糖糖基转移酶类

载药微球三氧化二砷治疗兔VX2肝肿瘤药代动力学研究

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中华放射学杂志 2019年第7期53卷 615-620页

作者：李浩段旭华韩新巍任建庄陈鹏飞李凤尧白亮亮王满周郑州大学第一附属医院放射介入科 450052

目的观察经肝动脉导管化疗栓塞术(TACE)中应用载药栓塞微球(CalliSpheresBeads,CB,江苏恒瑞)加载三氧化二砷(arsenictrioxide,ATO)对兔VX2肝肿瘤的化疗栓塞作用及其药代谢动力学。方法64只荷瘤兔采用数字表法随机分为4组,对照组、空白... 详细信息

目的观察经肝动脉导管化疗栓塞术(TACE)中应用载药栓塞微球(CalliSpheresBeads,CB,江苏恒瑞)加载三氧化二砷(arsenictrioxide,ATO)对兔VX2肝肿瘤的化疗栓塞作用及其药代谢动力学。方法64只荷瘤兔采用数字表法随机分为4组,对照组、空白微球栓塞组(CB组)、ATO载药微球栓塞组(CBATO组)、ATO碘油栓塞组(cTACE组)。TACE术前、术后10、20、40min及1、3、6、12h,1、3d取血并检测血ATO浓度及肝肾功能指标。TACE术后1、3、7、14d处死实验兔4只,取肿瘤组织、肝脏、肾脏、肺、心脏和肌肉标本采用氢原子荧光方法检测ATO浓度。采用双侧t检验比较CBATO组与cTACE组的血及组织的ATO浓度及肝肾功能。结果术后1、3、7d对照组谷氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平无明显变化,CB组、CBATO组和cTACE组ALT和AST水平升高(ALT的F值分别为25.872、17.69、7.016,AST的F值分别为46.365、32.385、12.548,P值均0.05)。在各观测时间点,4组实验兔的尿素氮及血肌酐水平差异无统计学意义。术后10、20min时CBATO组的血ATO较cTACE组低,差异有统计学意义(t值分别为7.675、6.461,P值均性瘤组织内,CBATO组ATO浓度较cTACE组高,术后1d两者差异无统计学意义(t值为2.155,P=0.068),术后3、7、14d差异有统计学意义(t值分别为11.462、7.624、2.649,P值均肿瘤组织中持续缓慢释放化疗药物,较长时间保持肿瘤组织内化疗药物较高浓度,并没有增加实验兔的肝肾毒性。

关键词：化学栓塞,治疗性肝肿瘤,实验性放射学,介入性载药微球三氧化二砷

SREBP2m通过胆固醇代谢损伤促进肝癌细胞增殖和迁移并抑制细胞凋亡

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肿瘤 2018年第4期38卷 318-328页

作者：毛雨胡勤苏新良重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科重庆400016 自贡市妇幼保健院检验科四川自贡643010

目的 :研究胆固醇调节元件结合蛋白2(sterol regulatory element binding protein 2,SREBP2)过表达对正常人肝细胞LO2和肝癌细胞Hep G2胆固醇代谢以及增殖、凋亡及迁移的影响方法:应用pAd-Easy-1腺病毒载体系统构建重组腺病毒Ad-SREBP2m... 详细信息

目的 :研究胆固醇调节元件结合蛋白2(sterol regulatory element binding protein 2,SREBP2)过表达对正常人肝细胞LO2和肝癌细胞Hep G2胆固醇代谢以及增殖、凋亡及迁移的影响方法:应用pAd-Easy-1腺病毒载体系统构建重组腺病毒Ad-SREBP2m(SREBP2的剪切形式)以及作为对照的重组腺病毒Ad-GFP,分别感染LO2和HepG2细胞。采用胆固醇定量试剂盒检测SREBP2m过表达对细胞中总胆固醇水平的影响;蛋白质印迹法检测SREBP2m和胆固醇合成限速酶还原酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzyme A reductase,HMGCR)以及凋亡相关蛋白caspase 3、cleavedcaspase3和caspase 12表达的改变;分别采用EdU染色法和FCM法检测感染Ad-SREBP2m后对LO2和HepG2细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响;划痕愈合实验检测对肝癌HepG2细胞迁移能力的影响。结果:成功构建重组腺病毒Ad-SREBP2m。与Ad-GFP组相比,感染AdSREBP2m的LO2和HepG2细胞中SREBP2m和HMGCR的表达水平均明显上调,总胆固醇水平明显升高(P值均0.05),而肝癌HepG2细胞中G1期细胞所占比例明显降低,S期细胞所占比例明显升高(P值均<0.001)。SREBP2m过表达对正常肝细胞LO2的增殖无影响,仅对肝癌HepG2细胞增殖具有促进作用(P<0.001)。Ad-SREBP2m组LO2细胞中总caspase 3、cleaved-caspase 3和caspase 12的表达水平均明显上调(P值均<0.001),而HepG2细胞中总caspase 3、cleaved-caspase 3和caspase 12蛋白的表达水平均明显下调(P值均<0.05)。LO2细胞在感染腺病毒Ad-SREBP2m后凋亡率与Ad-GFP组比较升高了(11.40±0.52)%(P<0.001),HepG2在感染腺病毒Ad-SREBP2m后凋亡率与Ad-GFP组比较降低了(4.17±0.47)%(P<0.05);Ad-SREBP2m感染HepG2细胞48 h后,其迁移距离与Ad-GFP组相比多了(1.17±0.12)mm(P<0.05)。结论:过表达SREBP2m能促进HepG2肝癌细胞增殖与迁移并抑制其凋亡;而过表达SREBP2m能促进人正常肝细胞LO2的凋亡。

关键词：肝肿瘤,实验性胆固醇调节元件结合蛋白质2 细胞增殖细胞凋亡细胞运动

AKR1B10基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

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临床肝胆病杂志 2020年第4期36卷 798-802页

作者：钱瑞坤马长林乔森济宁市第一人民医院肝胆外科山东济宁272100

目的探索肝细胞癌(HCC)中醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)的生物学功能和相关的病理机制。方法通过CCLE数据库分析正常肝细胞与HCC细胞系中AKR1B10 mRNA的表达,UALCAN以及Oncomine数据库分析癌旁组织与HCC组织中AKR1B10 mRNA的表达,Wes... 详细信息

目的探索肝细胞癌(HCC)中醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)的生物学功能和相关的病理机制。方法通过CCLE数据库分析正常肝细胞与HCC细胞系中AKR1B10 mRNA的表达,UALCAN以及Oncomine数据库分析癌旁组织与HCC组织中AKR1B10 mRNA的表达,Western Blot法验证HCC患者癌组织与癌旁组织中AKR1B10蛋白表达差异。使用慢病毒分别敲减HepG2及Huh7细胞中的AKR1B10,分为对照组和AKR1B10敲减组(shAKR1B101#、shAKR1B102#)。采用AnnexinV-APC/PI双染法、细胞克隆实验、皮下移植肿瘤的方法检测敲减AKR1B10后HCC细胞凋亡、克隆形成、皮下成瘤体积的变化。过氧化物敏感性荧光探针DCFH-DA以及Western Blot检测敲减AKR1B10后HCC细胞内活性氧(ROS)以及p-ATMser1981、γ-H2AX、c-Caspase-3和c-RARP等蛋白的变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果CCLE数据库提示AKR1B10 mRNA在HCC细胞中的表达明显高于正常肝细胞;Oncomine数据库显示,与癌旁组织相比,HCC组织中AKR1B10 mRNA的表达增加了10倍以上;UALCAN数据库提示AKR1B10基因在HCC组织中高表达;本研究的6例HCC患者中AKR1B10在HCC组织中的表达高于癌旁组织。与对照组相比,AKR1B10敲减组中HCC细胞的克隆形成能力明显下降(P值均肿瘤体积明显缩小(P值均<0.05)。结论AKR1B10可能是治疗HCC的有效治疗靶标。

关键词：肝肿瘤,实验性醛酮还原酶家族1成员B10 基因沉默活性氧

载替拉扎明CalliSpheres微球化疗栓塞治疗肝癌：临床前评价

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载替拉扎明CalliSpheres微球化疗栓塞治疗肝癌：临床前评价

作者：李卿华中科技大学

学位级别：硕士

目的:替拉扎明(Tirapazamine,TPZ)是一种有前途的低氧选择性细胞毒药物,可与经导管动脉栓塞(transcatheter arterial embolization,TAE)协同杀伤肝癌。本研究探索采用载TPZ微球栓塞是否能增强TPZ与TAE对肝癌的协同抗肿瘤作用。方法:制备... 详细信息

目的:替拉扎明(Tirapazamine,TPZ)是一种有前途的低氧选择性细胞毒药物,可与经导管动脉栓塞(transcatheter arterial embolization,TAE)协同杀伤肝癌。本研究探索采用载TPZ微球栓塞是否能增强TPZ与TAE对肝癌的协同抗肿瘤作用。方法:制备载TPZ的Calli Spheres微球(TPZ-loaded Calli Spheres microspheres,CSMTPZs),并对其作为化学栓剂的性能进行体外表征。采用改良的Clark型微电极研究系统检测兔VX2肝癌模型TAE后肿瘤缺氧情况。采用CSMTPZs治疗动物模型。检测血浆和肿瘤中TPZ及其代谢产物的浓度,评价CSMTPZs治疗的有效性和安全性,并与常规动脉内注射和栓塞联合治疗进行比较。结果:CSMTPZs的大小、形态和表面形态较好,并具有良好的体外载药和释药性能。TAE可诱导肿瘤急性缺氧,但残余肿瘤细胞通过缺氧诱导因子-1α对缺氧产生反应。CSMTPZs治疗提高了肿瘤内TPZ药物浓度,减少了体循环暴露。CSMTPZs治疗在缺氧选择性细胞毒性、肿瘤凋亡和坏死、动物生存和安全性方面均优于常规TPZ与TAE联合治疗。结论:CSMTPZs可提高TPZ联合TAE治疗兔VX2肝癌的协同抗肿瘤作用。本研究支持进一步开展CSMTPZs治疗肝细胞癌的临床评价。

关键词：肝肿瘤,实验性栓塞,治疗性替拉扎明微球

HIFU联合微泡消融兔肝VX2肿瘤:残瘤检测的病理及影像对比实验研究

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浙江大学学报（医学版） 2013年第3期42卷 337-344页

作者：何炜王维彭松中南大学湘雅三医院超声科湖南长沙410013 中南大学湘雅三医院放射科湖南长沙410013

目的:对兔肝VX2肿瘤进行高强度聚焦超声(HIFU)联合超声造影剂微泡SonoVue消融治疗,运用超声造影(CEUS)和增强螺旋CT(CECT)对比病理结果研究检测残瘤的能力。方法:将40只兔肝VX2肿瘤动物模型随机分为假照组(n=10)、单纯HIFU组(n=15)和HIF... 详细信息

目的:对兔肝VX2肿瘤进行高强度聚焦超声(HIFU)联合超声造影剂微泡SonoVue消融治疗,运用超声造影(CEUS)和增强螺旋CT(CECT)对比病理结果研究检测残瘤的能力。方法:将40只兔肝VX2肿瘤动物模型随机分为假照组(n=10)、单纯HIFU组(n=15)和HIFU联合微泡组(n=15),在消融前后3 h内完成CEUS和CECT检查,分析肿瘤血供变化及残瘤的检测情况,然后即刻处死,对肿瘤的消融情况及有无残瘤行病理学检查并结合影像学结果对比分析。结果:40灶兔肝VX2肿瘤在消融前CEUS和CECT分别表现为动脉相整体增强(77.5%,31/40 vs 52.5%,21/40)和厚环状增强(22.5%,9/40 vs 47.5%,19/40),均为动脉相富血供,门脉相迅速消退,呈"快进快出"。HIFU联合微泡组的平均辐照时间、辐照点数及电功率均较单纯HIFU组为低(P肿瘤内丰富的微血管形成;单纯HIFU组和HIFU联合微泡组中分别有60.0%(9/15)和13.3%(2/15)残瘤存在。CEUS对这两组的残瘤检出率高于CECT,CEUS和CECT检测残瘤同病理诊断的一致率分别为81.8%和27.3%,两者比较差异有统计学意义(P肿瘤的消融效果,减少残瘤发生率,CEUS检测残瘤的能力优于CECT。

关键词：肝肿瘤,实验性治疗肝肿瘤,实验性病理学肝肿瘤,实验性超声检查超声,高强聚焦,经腹体层摄影术,螺旋计算机随机对照试验造影剂

缺氧诱导因子1α对肝癌细胞HepG2干细胞特性及表阿霉素敏感性的影响

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临床肝胆病杂志 2021年第2期37卷 354-357页

作者：赵金金张海光崔非非汪磊莫清江焦路阳新乡医学院第一附属医院检验科河南新乡453100 新乡医学院第一附属医院妇产科河南新乡453100

目的探讨缺氧诱导因子(HIF)1α对肝癌细胞HepG2干细胞特性及表阿霉素敏感性的影响。方法以肝癌细胞为研究对象,肝癌细胞HepG2脂质体转染过表达HIF-1α的质粒作为实验组,转染pcDNA3.1空质粒作为对照组,单独HepG2细胞为HepG2组。实时荧光... 详细信息

目的探讨缺氧诱导因子(HIF)1α对肝癌细胞HepG2干细胞特性及表阿霉素敏感性的影响。方法以肝癌细胞为研究对象,肝癌细胞HepG2脂质体转染过表达HIF-1α的质粒作为实验组,转染pcDNA3.1空质粒作为对照组,单独HepG2细胞为HepG2组。实时荧光定量PCR检测HIF-1αmRNA表达,Western Blot检测HIF-1α蛋白表达;流式细胞术检测细胞表面CD133表达。不同浓度表阿霉素(0、6.25、12.5、25、50μmol/L)作用3组细胞24 h,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测表阿霉素(50μmol/L)处理后细胞凋亡情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用t检验。结果相较于HepG2组及对照组,实验组HIF-1αmRNA的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P值均实验组HIF-1α蛋白高表达。HepG2组、对照组和实验组细胞的CD133比例分别为0.040%±0.003%、0.030%±0.010%、20.110%±0.600%,实验组的CD133阳性率显著高于HepG2组和对照组(P值均性明显受到抑制,显著低于实验组(P值均实验组的细胞凋亡率(67.9%±2.5%)较HepG2组(93.6%±1.5%)和对照组(93.0%±1.2%)明显降低(P值均<0.001)。结论过表达HIF-1α的质粒成功转染至HepG2细胞,HIF-1α可提高肝癌细胞干细胞比例使其对表阿霉素耐药。

关键词：肝肿瘤,实验性缺氧诱导因子1,α亚基表柔比星干细胞抗药性,肿瘤