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腹水脱落细胞中肝素酶的表达对良恶性腹水鉴别诊断的价值

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中华肝脏病杂志 2005年第5期13卷 390-391页

作者：蔡永国房殿春杨仕明罗元辉陈陵杨孟华王东旭第三军医大学西南医院全军消化专科中心重庆400038

肝素酶是近年来发现的能够降解基底膜及细胞外基质的关键酶,具有促进肿瘤细胞向周围组织间隙侵袭的作用.我们前期研究表明,肝素酶在胃癌组织中高表达,能够促进胃癌的血管生成、浸润与转移,是胃癌患者预后不良的一个指标[1].在腹水脱落... 详细信息

肝素酶是近年来发现的能够降解基底膜及细胞外基质的关键酶,具有促进肿瘤细胞向周围组织间隙侵袭的作用.我们前期研究表明,肝素酶在胃癌组织中高表达,能够促进胃癌的血管生成、浸润与转移,是胃癌患者预后不良的一个指标[1].在腹水脱落细胞中肝素酶是否表达,能否用于鉴别腹水的性质鲜见报道.我们采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝素酶在腹水脱落细胞中的表达,探讨肝素酶在良恶性腹水鉴别诊断中的意义.

关键词：腹水脱落细胞肝素酶基因表达恶性腹水良性腹水胃癌组织

肝素酶DNA疫苗经电穿孔免疫在小鼠体内表达和基因组整合研究

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肝素酶DNA疫苗经电穿孔免疫在小鼠体内表达和基因组整合研究

基于肝素酶单克隆抗体的肿瘤分子显像及其抗肿瘤效应的实验研究

第九届全国药物和化学异物代谢学术会议

作者：付洁董周寰栾好飞高新李灵珍宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所药物代谢与药物动力学实验室

目的:研究肝素酶DNA疫苗经电穿孔免疫在小鼠体内的表达与基因组整合。方法:使用肌肉注射联合活体电穿孔技术将表达肝素酶基因的裸质粒DNA疫苗导入小鼠。免疫后不同时间点取各主要脏器提取组织总RNA。实时荧光定量PCR技术考察肝素酶在各... 详细信息

目的:研究肝素酶DNA疫苗经电穿孔免疫在小鼠体内的表达与基因组整合。方法:使用肌肉注射联合活体电穿孔技术将表达肝素酶基因的裸质粒DNA疫苗导入小鼠。免疫后不同时间点取各主要脏器提取组织总RNA。实时荧光定量PCR技术考察肝素酶在各组织的表达及生物分布。对持续高表达和高分布的组织,凝胶电泳法考察质粒DNA疫苗与基因组整合情况。结果:小鼠肌肉注射联合电穿孔导入人肝素酶质粒瞬时(24小时)和长期(5,8周)表现出不同特点。免疫后瞬时主要脏器均能检测到质粒的表达和分布,5周和8周仅能在注射部位发现微量目的mRNA,其它器官均无表达;DNA质粒在所有组织未有分布。未发现基因组整合情况。结论:肌注联合电穿孔可作为有效手段向宿主动物体内导入目的基因,在研究涉及剂量下目的基因可在体内各组织有效分布并表达,未有基因组整合现象发生。

关键词：实时荧光定量PCR 基因组DNA整合肝素酶电穿孔生物分布

来源： cnki会议评论

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基于肝素酶单克隆抗体的肿瘤分子显像及其抗肿瘤效应的实验研究

作者：李宁第三军医大学

学位级别：硕士

背景及目的: 肿瘤转移是肿瘤患者死亡的主要原因,是制约临床治疗效果的一种恶性生物学行为。目前针对肿瘤早期转移的检测没有很好的方法,B超、CT和MRI等是目前诊断肿瘤转移的重要手段,但只能对一定大小的转移瘤做出正确的诊断,且此时患... 详细信息

背景及目的: 肿瘤转移是肿瘤患者死亡的主要原因,是制约临床治疗效果的一种恶性生物学行为。目前针对肿瘤早期转移的检测没有很好的方法,B超、CT和MRI等是目前诊断肿瘤转移的重要手段,但只能对一定大小的转移瘤做出正确的诊断,且此时患者多发生转移,失去了手术治疗的最佳时机。因此,寻找能够早期诊断肿瘤转移的技术日益重要。近年来,分子影像学(Molecular Imaging)的发展为肿瘤的早期诊断及治疗开辟了新的领域。磁共振(MR)分子成像是分子影像学的重要领域之一,超顺磁性分子探针的出现使其作为强大的信号扩增系统,大大提高了MR检测靶向对比剂的敏感性。国内外已有研究者采用顺磁性离子复合物或磁性微粒结合单克隆抗体(mAbs),选择性的改变肿瘤的弛豫时间。目前发现的肿瘤相关抗原多具有组织特异性,如AFP、PSA、CEA等,以这些抗原制备的抗体只适用于表达该类抗原的肿瘤分子影像诊断。因此寻找肿瘤组织共同、特异性的靶点一直是肿瘤分子显像的研究热点。肝素酶(Heparanase,Hpa)作为唯一能裂解细胞外基质(extracellular matrix,EMC)内蛋白聚糖主要成分硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulufate proteoglycans,HSPG)的内源性糖苷内切酶,在转移的恶性肿瘤中普遍存在,其表达水平的高低与肿瘤转移及病人的预后密切相关。我们过去的研究表明,肝素酶可以作为一种肿瘤共有抗原用于肿瘤的免疫治疗。那么,肝素酶是否可以作为一种肿瘤共有抗原用于肿瘤的分子影像诊断? 基于以上分析,本研究在前期成功制备基于肝素酶全长cDNA序列的单克隆抗体的基础上,采用分子影像学技术,以纳米金磁微粒(30nm)为分子显像对比剂,肝素酶单克隆抗体为靶向载体,构建HPA&GoldMag分子探针,用于体外、体内分子显像MR研究,探讨其应用的可行性及其在肿瘤转移早期诊断中的意义。同时研究了肝素酶抗体体外抗肿瘤的生物效应,为肝素酶单克隆抗体在肿瘤分子影像诊断及其治疗中的作用于提供实验依据。研究方法: 1、培养人肝癌HepG2、人胃癌SGC-7901、MKN45、人骨肉瘤U2OS、人乳腺癌MCF-7、人结肠癌SW480细胞株,采用Western blot技术,以HepG2、SGC-7901、MKN45、SW480、U2OS、MCF-7细胞总蛋白为样本,对已制备的7号、11号、12号3株人肝素酶单克隆抗体进行初步鉴定,筛选出能够与肝素酶蛋白特异性结合的抗体,并采用免疫细胞化学技术进一步验证筛选出的抗体特异性。 2、将纳米金磁微粒作为MR成像的对比剂,用其标记筛选出的12号肝素酶单克隆抗体构建特异性MR分子探针HPA&GoldMag,通过原子力显微镜观察纳米金磁微粒偶联抗体的能力,并通过细胞免疫荧光技术和流式细胞术等方法检测探针与上述肿瘤细胞结合的活性和特异性;分离新鲜白细胞,与未标记抗体和已标记抗体的金磁微粒共同孵育,模拟体内网状内皮系统吞噬金磁微粒,探讨影响白细胞吞噬金磁微粒的因素。 3、应用3.0T磁共振扫描仪并建立MR扫描序列,观察不同浓度的纳米金磁微粒MR成像情况,体外探讨探针应用于各种肿瘤细胞成像的可行性;建立荷瘤裸鼠模型,对荷瘤裸鼠经尾静脉注射HPA&GoldMag探针,在注射前、注射后分别行MR扫描,观察探针对肿瘤组织T2WI信号的影响,探讨其用于体内肿瘤MR成像的可行性。 4、通过Transwell体外侵袭实验观察筛选出的肝素酶单克隆抗体对肿瘤转移的抑制作用,探讨其在体外对肿瘤细胞侵袭转移的抑制效果。结果 1、通过Western-blot技术和免疫细胞化学方法证实12号肝素酶单克隆抗体与肝素酶蛋白结合的特异性最好。 2、成功构建了HPA&GoldMag特异性MR分子探针;原子力显微镜观察标记抗体前后的纳米金磁微粒,未标记抗体的纳米金磁微粒粒径大小约10个nm,标记抗体后金磁微粒的粒径变为20nm;激光共聚焦显微镜观察发现肝素酶阳性的HepG2、SGC-7901、MKN45、U2OS、SW480细胞株与HPA&GoldMag特异性结合,均可见较强的红色荧光,而在肝素酶弱阳性的MCF-7细胞中红色荧光最弱,正常小鼠IgG对照组各细胞系均为阴性;白细胞吞噬实验的结果显示,其吞噬金磁微粒量的多少与吞噬细胞浓度成正相关,并随着吞噬细胞与金磁微粒共同孵育时间的增加其吞噬量随之增加,大约在3h左右吞噬量接近饱和;白细胞对30-50nm大小的金磁微粒吞噬量统计学显示相差不大,P>0.05 3、体外研究证实,HPA&GoldMag探针与各肿瘤细胞共同孵育后行MR扫描结果发现,探针可显著降低HepG2、SGC-7901、MKN45、SW480、U2OS细胞T2WI信号,略降低MCF-7细胞T2WI信号,而对HF细胞信号无显著影响,对照组正常小鼠IgG偶联的GoldMag对各肿瘤细胞MR信号均无显著影响。 4、体内实验证实,在注射探针2

关键词：分子影像学单克隆抗体纳米金磁微粒磁共振成像抗肿瘤转移肝素酶

奥曲肽对人胃癌细胞株SGC-7901肝素酶表达的影响

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中国肿瘤临床 2006年第20期33卷 1157-1160页

作者：季永胜王承党江苏大学附属武进医院消化科福建医科大学附属第一医院消化科福州市350005

目的:研究生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对人胃癌细胞株SGC-7901肝素酶(Hpa)表达的影响并探讨其作用机制。方法:取人胃癌细胞株SGC-7901,体外培养后取处于对数生长的细胞制成单细胞悬液,加入不同浓度的OCT共培养24h和48h,以半定量RT-PCR法... 详细信息

目的:研究生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对人胃癌细胞株SGC-7901肝素酶(Hpa)表达的影响并探讨其作用机制。方法:取人胃癌细胞株SGC-7901,体外培养后取处于对数生长的细胞制成单细胞悬液,加入不同浓度的OCT共培养24h和48h,以半定量RT-PCR法及免疫细胞化学法检测OCT对胃癌细胞Hpa表达的影响。结果:1)胃癌细胞与1×10-5mol/L和1×10-6mol/L的OCT共培养24h后,HpamRNA的表达显著低于对照组(P=0.000和0.001);与1×10-5mol/L和1×10-6mol/L的OCT共培养48h后,HpamRNA的表达显著低于对照组(P=0.000和0.000)。1×10-5mol/L和1×10-6mol/L的OCT与胃癌细胞共培养48h对HpamRNA表达的抑制效果优于24h(P=0.002和0.003)。OCT1×10-7mol/L组,OCT1×10-8mol/L组及对照组各组之间HpamRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。2)胃癌细胞经1×10-5mol/L和1×10-6mol/L的OCT作用24h和48h后,Hpa蛋白的表达也相应下降。结论:OCT1×10-5mol/L和OCT1×10-6mol/L两种浓度能够有效抑制SGC-7901胃癌细胞株Hpa的表达,从而可能对肿瘤的侵袭转移起到抑制作用。

关键词：肝素酶奥曲肽生长抑素生长抑素受体

肝素酶及Ki-67在非小细胞中的表达及临床意义研究

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肝素酶及Ki-67在非小细胞中的表达及临床意义研究

作者：宋作庆中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

目的观察肝素酶(Heparanase,Hpa)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其与NSCLC患者临床病理特征之间的关系,并评价其可否作为NSCLC侵袭、转移及患者预后的指标。材料与方法检测2000年1月—2000... 详细信息

目的观察肝素酶(Heparanase,Hpa)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其与NSCLC患者临床病理特征之间的关系,并评价其可否作为NSCLC侵袭、转移及患者预后的指标。材料与方法检测2000年1月—2000年12月解放军总医院胸外科手术切除的66例非小细胞肺癌患者石蜡包埋组织,取同期15例相应癌旁正常肺组织作正常对照,收集病人的临床病理资料,并随访术后有无复发和转移。采用免疫组织化学染色(S-ABC法)检测以上标本中的Hpa的表达情况,结合患者的临床病理指标和随访结果,应用X检验和生存曲线等方法分析Hpa在肺癌组织中的表达及意义。结果肝素酶主要表达在癌细胞膜和/或细胞浆中。免疫组织化学结果表明:在66例非小细胞肺癌组织中有49例(74.2%)呈肝素酶阳性表达,而正常支气管和肺泡上皮中无阳性表达。X检验显示肝素酶表达与肺癌的临床分期(P=0.042)、淋巴结转移(P=0.005)有密切关系。生存曲线分析表明肝素酶阳性表达组患者的5年生存率明显低于阴性组(P=0.025)。但多因素分析结果显示肝素酶不能作为影响患者预后的风险因素。结论肝素酶在人肺癌组织中的表达较正常肺组织明显上调,并与肺癌的临床分期、淋巴结转移和患者的预后相关,但不能作为患者预后评估的独立指标。

关键词：非小细胞肺癌肝素酶转移预后免疫组化

靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用

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中华实验外科杂志 2010年第5期27卷 623-625页

作者：蒋国松曾甫清郑丽端童强松董继华侯晓华华中科技大学同济医学院附属协和医院外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科武汉430022

目的构建靶向人肝素酶（HPSE）的短发卡状RNA（shRNA）表达载体，探讨其基因沉默作用。方法根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pGenesil-1载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Li... 详细信息

目的构建靶向人肝素酶（HPSE）的短发卡状RNA（shRNA）表达载体，探讨其基因沉默作用。方法根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pGenesil-1载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ，每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSEshRNA转染组3组，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Westernblot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平，黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配，载体构建成功；重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后，肝素酶mRNA表达分别下调78．6％（P〈0．01）、82．6％（P〈0．01）、81．9％（P〈0．01），肝素酶蛋白表达分别下调76．4％（P〈0．01）、85．9％（P〈0．01）、83．3％（P〈0．01），细胞黏附能力分别下降37．7％（P〈0．01）、44．6％（P〈0．01）、43．8％（P〈0．01），细胞侵袭能力分别下降66．8％（P〈0．01）、76．6％（P〈0．01）、80．5％（P〈0．01）。结论成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体，沉默肝素酶基因表达后，能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力。

关键词：肝素酶短发卡状RNA 肿瘤基因表达

肝素酶mRNA及其蛋白在乳腺癌组织中的表达研究

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肝素酶mRNA及其蛋白在乳腺癌组织中的表达研究

作者：赵剑锋福建医科大学

学位级别：硕士

【背景与目的】乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,具有较强的侵袭性和转移性。而肿瘤细胞要实现侵袭和转移,首先必须突破由基底膜（BM）和细胞外基质（ECM）构成的组织屏障。近来的研究发现,肝素酶（heparanase ,Hpa）不仅可以特异性... 详细信息

【背景与目的】乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,具有较强的侵袭性和转移性。而肿瘤细胞要实现侵袭和转移,首先必须突破由基底膜（BM）和细胞外基质（ECM）构成的组织屏障。近来的研究发现,肝素酶（heparanase ,Hpa）不仅可以特异性地降解该屏障的主要成分之一--硫酸乙酰肝素蛋白多糖（heparan sulfateproteoglycan,HSPG）,还能协同多种因子,通过多条途径直接和间接地促进肿瘤的浸润和转移,因而成为近年来肿瘤转移机制和对策研究的热点。本实验通过检测乳腺癌组织中肝素酶的表达状况,并结合微血管密度（MVD）计数情况,初步探讨肝素酶与乳腺癌血管生成、临床分期、病理分级、淋巴结转移及其肿瘤大小之间的关系。【方法】随机选取80 例乳腺浸润型导管癌及10 例乳腺导管内乳头状瘤组织分别作为实验组和对照组,运用原位杂交和免疫组化技术检测乳腺癌和乳腺导管内乳头状瘤组织中肝素酶mRNA 及其蛋白表达情况、结合微血管密度（MVD）计数、采用SPSS11.5 统计分析软件并结合病人的临床病理特征等进行分析。【结果】1.80例乳腺癌中Hpa mRNA阳性表达53例（66.25%）,10例乳腺良性肿瘤阳性表达仅有1例（10%）。乳腺癌中的Hpa mRNA表达明显高于乳腺良性肿瘤（P＜0.05）。乳腺癌中Hpa mRNA强阳性表达25例,MVD值为41.57±9.30;弱阳性28例,MVD为29.35±5.51;阴性27例,MVD为18.67±3.96,三者比较有显著差异（P＜0.001）。且相关分析表明,Hpa mRNA与MVD之间呈正相关（r=0.692,P＜0.001）。 2.80例乳腺癌中Hpa蛋白阳性表达59例（73.75%）,10例乳腺良性肿瘤阳性表达3例（30%）,乳腺癌中的Hpa蛋白表达明显高于乳腺良性肿瘤（P＜0.05）。乳腺癌中Hpa蛋白强阳性表达32例,MVD值为38.45±10.59;弱阳性27例,MVD为26.49±5.92;阴性21例,MVD为19.98±7.13,三者比较有显著差异（P＜0.001）。且相关分析表明,Hpa蛋白与MVD之间呈正相关（r=0.588,P＜0.001）。

关键词：肝素酶乳腺癌微血管密度转移

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小鼠局灶性脑缺血后乙酰肝素酶的表达

中国脑血管病杂志 2010年第12期7卷 643-647页

作者：王锐李继梅马骥超陈旭赵伟秦刘磊赵媛魏玲首都医科大学附属北京友谊医院神经内科 100050 首都医科大学附属北京友谊医院神经外科 100050 美国埃默里大学医学院麻醉学系 GA30322 北京市回民医院神经内科 100054

目的检测乙酰肝素酶(Hpa)在实验小鼠局灶性脑缺血后的表达,探讨其表达时间和表达位置变化的规律及其意义。方法用结扎大脑中动脉皮质支的方法制作小鼠局灶性脑缺血模型;应用实时荧光定量PCR方法检测缺血后Hpa、血管内皮生长因子(VEGF)... 详细信息

目的检测乙酰肝素酶(Hpa)在实验小鼠局灶性脑缺血后的表达,探讨其表达时间和表达位置变化的规律及其意义。方法用结扎大脑中动脉皮质支的方法制作小鼠局灶性脑缺血模型;应用实时荧光定量PCR方法检测缺血后Hpa、血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素2(Ang-2)基因的表达;应用免疫荧光双染(Hpa/CD105、Hpa/GFAP、Hpa/BrdU)的方法进一步观察Hpa蛋白表达的情况。结果实验组小鼠脑缺血后,与假手术组比较,Hpa mRNA于缺血后3d开始在缺血区的表达明显增高(P<0.05),14d达到相对高峰(与1、3、7 d和假手术组比较,P<0.05～0.01)。VEGFmRNA和Ang-2 mRNA在脑缺血后3 d的表达亦明显增高(与假手术组比较,P<0.01),其中VEGF的表达水平持续增高,而Ang_2则随后降低。免疫荧光双染显示,Hpa在脑缺血后7 d时主要表达于新生的微血管,14 d时主要与星形胶质细胞共表达。结论 Hpa表达时间和表达位置的变化提示,Hpa参与了脑缺血后血管新生和组织修复的过程,推测Hpa可能通过促进VEGF的表达以及星形胶质细胞的增生而发挥其作用。

关键词：肝素酶脑缺血血管内皮生长因子类血管新生

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硫酸乙酰肝素、肝素酶及其与肿瘤转移的关系

现代生物医学进展 2018年第1期18卷 190-194页

作者：张怡张甘霖孙旭于明薇王笑民首都医科大学附属北京中医医院肿瘤科北京100010

细胞外基质和基底膜的降解是癌细胞穿透组织屏障发生转移的重要步骤。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖是细胞外基质和基底膜的组成成分,其多糖侧链可以被葡萄糖苷内切酶--肝素酶,特异性识别并切割,以破坏细胞外基质和基底膜的完整性,促进肿瘤转移... 详细信息

细胞外基质和基底膜的降解是癌细胞穿透组织屏障发生转移的重要步骤。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖是细胞外基质和基底膜的组成成分,其多糖侧链可以被葡萄糖苷内切酶--肝素酶,特异性识别并切割,以破坏细胞外基质和基底膜的完整性,促进肿瘤转移。临床上肿瘤患者肝素酶高表达与肿瘤恶性程度和转移发生密切相关。深入了解硫酸乙酰肝素、肝素酶及它们与肿瘤转移相关的作用机制有助于我们寻找肿瘤治疗的新思路。本文将从硫酸乙酰肝素的合成调控、功能、肝素酶的转录和活性调节、肝素酶表达与肿瘤患者的临床特征,以及硫酸乙酰肝素、肝素酶与肿瘤转移的关系进行综述。

关键词：硫酸乙酰肝素肝素酶肿瘤转移