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麝香通心滴丸对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

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中华危重症医学杂志（电子版） 2020年第3期13卷 170-175页

作者：刘新文沈男男王佳良傅永平绍兴文理学院附属医院(绍兴市立医院)药剂科浙江绍兴312000 绍兴文理学院附属医院(绍兴市立医院)心血管内科浙江绍兴312000

目的探讨麝香通心滴丸(STDP)对心肌细胞缺氧/复氧的保护作用。方法建立心肌缺氧/复氧模型。将H9c2细胞分为5组:对照组(细胞正常培养,不做任何处理)、模型组、STDP组(在复氧前40 min给予STDP 50 mg/L)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(在复氧前40 ... 详细信息

目的探讨麝香通心滴丸(STDP)对心肌细胞缺氧/复氧的保护作用。方法建立心肌缺氧/复氧模型。将H9c2细胞分为5组:对照组(细胞正常培养,不做任何处理)、模型组、STDP组(在复氧前40 min给予STDP 50 mg/L)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(在复氧前40 min给予3-MA 5 mmol/L)及STDP+3-MA组(在复氧前40 min分别给予STDP 50 mg/L及3-MA 5 mmol/L)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞存活率,并测定各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛及肌酸激酶水平。采用流式细胞仪检测各组细胞的细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测信使RNA(mRNA)自噬相关基因Beclin-1、Atg5的表达水平,并通过Western-blotting检测各组细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、Bcl-2/腺病毒E1B 19 kDa相互作用蛋白3(BNIP3)、Beclin-1、Atg5的表达水平。结果各组细胞存活率比较,差异有统计学意义(F=85.893,P=0.028),且STDP组细胞存活率较模型组、3-MA组及STDP+3-MA组细胞存活率均显著升高[(90±7)%、(63±5)%、(80±5)%、(81±6)%,P均细胞LDH、丙二醛、肌酸激酶水平,细胞凋亡率,Beclin-1 mRNA、Atg5 mRNA以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、Atg5蛋白表达水平的比较,差异均有统计学意义(F=78.381、23.519、48.376、22.726、6.315、5.294、75.219、116.546、21.125、39.724、65.247,P均细胞中,LDH[(92±6)、(194±13)、(195±11)、(192±10)μmol/L,P均细胞凋亡率[(5.8±0.8)%、(8.8±0.9)%、(7.6±0.7)%、(7.3±0.5)%,P均肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。

关键词：肌细胞心脏缺氧麝香通心滴丸

1，25-二羟维生素D3对被动致敏人气道平滑肌细胞的抑制作用

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中华结核和呼吸杂志 2011年第6期34卷 438-441页

作者：宋颖芳赖国祥戚好文吴昌归南京军区福州总医院呼吸与危重症医学科南京350025 第四军医大学西京医院呼吸内科

目的检测1，25-二羟维生素D，[1，25-（OH）2D3]对被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMC）的增殖及其表达基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和解整合素-金属蛋白酶33（ADAM33）的影响，探讨其调节支气管哮喘（简称哮喘）患者气道重塑的可能机制... 详细信息

目的检测1，25-二羟维生素D，[1，25-（OH）2D3]对被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMC）的增殖及其表达基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和解整合素-金属蛋白酶33（ADAM33）的影响，探讨其调节支气管哮喘（简称哮喘）患者气道重塑的可能机制。方法用10％哮喘患者血清被动致敏HASMC，以10％非哮喘患者血清为对照。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度1，25-（OH）2D3对HASMC细胞增殖活力的变化并确定其有效作用浓度。然后以有效作用浓度的1，25-（OH）2D3预处理HASMC，MTT法测定细胞增殖活力，流式细胞仪测定细胞周期，实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法分别检测细胞中MMP-9及ADAM33的表达情况。结果（1）1，25．（OH），D，在（10^-9～10^-7）moL／L浓度下能浓度依赖性地抑制被动致敏的HASMC增殖（P〈0．05）；（2）10^-7’mol／L的1，25-（OH）2D3能时间依赖性地抑制被动致敏的HASMC增殖并特异性抑制细胞周期中G1／S的转化；（3）VD组MMP-9及ADAM33蛋白表达较哮喘组分别下降了（63．4±3．6）％和（50．9±2．9）％，但仍显著高于对照组（P〈0．01）；（4）VD组MMP-9及ADAM33mRNA表达较哮喘组分别下降了（52．2±2．5）％和（67．8±3．2）％，但仍显著高于对照组（P〈0．01）。结论1，25-（OH）2D3能从多个层面抑制被动致敏的HASMC的功能，这可能是其调节哮喘气道重塑的作用机制之一。

关键词：哮喘肌细胞平滑肌骨化三醇细胞增殖

维生素K2对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响及其机制

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中华肾脏病杂志 2015年第2期31卷 120-125页

作者：白亚玲徐金升张睦清张胜雷张俊霞崔立文张慧然河北医科大学第四医院肾内科石家庄050011

目的研究维生素K2对大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth musclecells，VSMCs）的影响及可能的作用机制。方法体外分离培养大鼠VSMCs，采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs随机分为正常对照组、高磷干预组、维生素K2干预组（在高磷培养... 详细信息

目的研究维生素K2对大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth musclecells，VSMCs）的影响及可能的作用机制。方法体外分离培养大鼠VSMCs，采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs随机分为正常对照组、高磷干预组、维生素K2干预组（在高磷培养基的基础上添加维生素K2，根据浓度再分为10μmol／L、25μmol／L和50μmol／L3个亚组）以及Noggin（骨形态发生蛋白通路抑制剂）干预组。对细胞进行钙含量及碱性磷酸酶（ALP）活性检测，茜索红染色检测钙结节，Westem印迹法检测Runt相关转录因子2（Runx2）蛋白的表达，RT．PCR法检测骨形态发生蛋白2（honemorphogeneticprotein2，BMP-2）、SMADl、SMAD7及Ruux2的表达。结果与正常对照组相比，高磷组大鼠VSMCs的钙含量、ALP活性及BMP-2、SMAD1、Runx2表达水平均增高（P〈0．05），SMAD7表达水平降低（P〈0．01）；而加人维生素K2干预后，可抑制细胞钙含量增加、ALP活性及BMP-2、SMAD1、Runx2的表达（P〈0．05），促进SMAD7的表达（P〈0．01），并呈浓度依赖性。与高磷干预组相比，Noggin干预组的SMAD1和Runx2表达显著下降（P〈0．01）。结论维生素K2能够抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化，其可能机制是通过骨形态发生蛋白信号通路抑制了平滑肌细胞成骨、成软骨样表型转化。

关键词：维生素K2 肌细胞平滑肌血管钙化 β-甘油磷酸盐

斑蝥素对血小板衍生生长因子BB诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移的机制研究

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中华老年心脑血管病杂志 2019年第1期21卷 58-62页

作者：邱立强徐昌武李雯静江洪吴刚罗强夏豪武汉大学人民医院心血管内科 430060 武汉科技大学附属天佑医院中西医结合科

目的探讨斑蝥素对血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的作用及机制。方法组织块贴壁法获取原代血管平滑肌细胞(vascular smooth muscular cells,VSMC),运用VSMC表型标志蛋白抗体免疫荧光染色鉴定细胞,PDG... 详细信息

目的探讨斑蝥素对血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的作用及机制。方法组织块贴壁法获取原代血管平滑肌细胞(vascular smooth muscular cells,VSMC),运用VSMC表型标志蛋白抗体免疫荧光染色鉴定细胞,PDGF-BB诱导细胞增殖和迁移,并使用不同浓度斑蝥素加以处理。将实验分为,对照组(A组); PDGF-BB组(B组); PDGF-BB+5μmol/L斑蝥素组(C组); PDGF-BB+10μmol/L斑蝥素组(D组)。采用CCK-8细胞计数试剂盒检测细胞活性和增殖情况。细胞划痕实验检测细胞迁移水平。Western blot检测基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、总蛋白激酶B(t-Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及平滑肌细胞特异性蛋白(α-smooth muscle actin,α-SM-actin)表达水平。结果与DMSO处理的细胞比较,不同剂量(0.625、1. 25、2. 5、5和10μmol/L)斑蝥素处理的细胞活性无统计学差异(P> 0. 05)。与A组比较,B组细胞增殖活性和细胞迁移率显著提高[2. 46±0. 19 vs 1. 49±0. 12,(88. 79±0. 61)%vs (42. 63±3. 93)%,P 细胞增殖活性和细胞迁移率显著降低[0. 91±0. 07 vs 2. 46±0. 19,0. 61±0. 04 vs 2. 46±0. 19,(39. 90±4. 30)%vs (88. 79±0. 61)%,(20. 33±6. 13)%vs (88. 79±0. 61)%,P <0. 05]。Western blot结果显示,与A组比较,B组MMP-9、p-Akt的表达水平显著增加,α-SM-actin的表达水平显著降低(P <0. 05);与B组比较,C组、D组MMP-9、p-Akt的表达水平显著降低,α-SM-actin的表达水平显著增加,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论斑蝥素可显著抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖和迁移,其机制可能与下调p-Akt及MMP-9蛋白表达水平有关。

关键词：斑蝥素受体,血小板源生长因子肌细胞平滑肌细胞增殖基质金属蛋白酶9

香烟提取物对大鼠骨骼肌细胞肌肉生长抑制素表达的影响研究

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中国全科医学 2015年第12期18卷 1401-1405页

作者：邓俊亮吴健杨士芳南方医科大学广东省广州市510515 广东省人民医院呼吸科

目的探讨香烟提取物（CSE）对骨骼肌细胞肌肉生长抑制素（MSTN）表达的影响。方法取新生3-5 d的SD大鼠的骨骼肌组织,用含150 ml/L胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃、5%CO2培养箱内进行体外原代细胞培养和传代。采用免疫荧光鉴定检测骨骼... 详细信息

目的探讨香烟提取物（CSE）对骨骼肌细胞肌肉生长抑制素（MSTN）表达的影响。方法取新生3-5 d的SD大鼠的骨骼肌组织,用含150 ml/L胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃、5%CO2培养箱内进行体外原代细胞培养和传代。采用免疫荧光鉴定检测骨骼肌细胞。选择恰当的CSE浓度（2.5%、5.0%、10.0%）刺激48 h,分为2.5%组、5.0%组、10.0%组和对照组（不予CSE刺激）,分别采用实时定量PCR检测MSTN mRNA的表达水平与Western blotting检测MSTN蛋白的表达水平。结果骨骼肌细胞培养成活率高,体外生长、增殖良好。实时定量PCR检测结果显示,4组MSTN mRNA相对表达水平比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;其中,5.0%组、10.0%组MSTN mRNA相对表达水平高于对照组和2.5%组（P〈0.05）。Western blotting检测结果显示,4组MSTN蛋白表达水平比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;其中,5.0%组、10.0%组MSTN蛋白表达水平高于对照组和2.5%组（P〈0.05）。结论骨骼肌细胞模型可对CSE刺激产生有效反应,为吸烟引起骨骼肌抑制的机制研究奠定了细胞学基础。

关键词：肌肉生长抑制素肺疾病,慢性阻塞性肌细胞骨骼大鼠

细胞外信号调节激酶反义寡核苷酸对支气管哮喘血清被动致敏的人气道平滑肌细胞的影响

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中华结核和呼吸杂志 2010年第7期33卷 524-529页

作者：白晶刘先胜徐永健张珍祥谢敏倪望华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科武汉430030 广西医科大学第一附属医院呼吸内科

目的观察细胞外信号调节激酶（ERK）反义寡核苷酸（ODNs）对支气管哮喘（简称哮喘）血清被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMCs）增殖和凋亡的影响.方法用10%哮喘患者血清被动致敏HASMCs（空白对照组）,并用脂质体将反义（AODNs组）、... 详细信息

目的观察细胞外信号调节激酶（ERK）反义寡核苷酸（ODNs）对支气管哮喘（简称哮喘）血清被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMCs）增殖和凋亡的影响.方法用10%哮喘患者血清被动致敏HASMCs（空白对照组）,并用脂质体将反义（AODNs组）、正义（SODNs组）及错配ERKODNs（RODNs组）导入HASMCs,以10%非哮喘患者血清为对照（对照血清组）.采用流式细胞仪、四甲基偶氮唑盐（MTT）法、3H-TdR掺入法及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫荧光技术检测HASMCs的增殖,原位末端标记法和Annexin-V FITC PI双染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot检测ERKmRNA和ERK1/2、磷酸化ERK1/2蛋白的表达.结果用ERK ODNs干预经哮喘血清致敏的HASMCs后,AODNs组S＋G2/M期细胞所占比例、吸光度（A490）值、细胞DNA合成量和PCNA蛋白表达量[分别为（14.21±1.21）%、（0.271±0.021）、（2811±182）cpm/106和（5.25±0.60）]均低于空白对照组[分别为（22.48±2.04）%、0.507±0.090、（3869±396）cpm/106和11.25±1.21]（F值分别为65.594、39.676、61.111、120.321,均P〈0.01）,AODNs组的凋亡指数和早期凋亡细胞百分率[分别为13.96±1.72和（9.17±0.47）%]均高于空白对照组[分别为5.37±0.05和（3.26±0.04）%],差异有统计学意义（F值分别为98.181和65.444,均P〈0.01）,AODNs组的ERK mRNA和ERK活化率[分别为0.43±0.06和（63±6）%]均低于空白对照组[分别为0.89±0.09和（87±8）%]（F值分别为78.043和87.288,均P〈0.01）.而正义和错配ERK ODNs没有上述作用.结论反义ERK可通过抑制ERK mRNA表达和翻译抑制哮喘血清被动致敏的HASMCs的增殖,促进其凋亡,ERK信号通道可能对哮喘患者HASMCs增殖与凋亡具有重要的调控作用.

关键词：细胞外信号调节激酶类肌细胞平滑肌寡核苷酸类反义哮喘

广西中华眼镜蛇的蛇毒蛋白natrin对过氧化氢损伤乳大鼠原代心肌细胞钙超载及相关基因表达的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2016年第2期30卷 95-100页

作者：梁永红苏延旭马兴才张洪也蒋兴明陆世银苏志恒郑华宋慧广西医科大学药学院广西南宁530021 中国人民解放军第303医院药剂科广西南宁530021 南宁第七人民医院广西南宁530022

目的观察广西中华眼镜蛇（Naja naja atra）的蛇毒蛋白（natrin）对SD大鼠原代心肌细胞钙超载的影响,并探讨natrin对心肌的保护作用及对心肌钙、钾离子通道影响的可能作用机制。方法分别用natrin 5,25和125 mg·L^-1预处理原代SD乳大鼠... 详细信息

目的观察广西中华眼镜蛇（Naja naja atra）的蛇毒蛋白（natrin）对SD大鼠原代心肌细胞钙超载的影响,并探讨natrin对心肌的保护作用及对心肌钙、钾离子通道影响的可能作用机制。方法分别用natrin 5,25和125 mg·L^-1预处理原代SD乳大鼠心肌细胞24 h后,再以H2O20.3 mmol·L^-1诱导损伤,以Fluo-3为Ca^2＋荧光探针,应用激光共聚焦显微镜动态检测细胞内游离钙离子浓度变化;另外用natrin 5,25和125 mg·L^-1及维拉帕米（Ver）5 nmol·L^-1预处理24 h后,再以H2O20.3 mmol·L^-1诱导损伤15 min,FQPCR法检测心肌细胞钙离子通道Cav1.2,Calm,Ry R2和钾离子通道Kir6.2的m RNA表达情况。结果激光共聚焦显微镜检测结果发现,与正常对照组比较,H2O2作用3-15 min心肌细胞内钙荧光平均峰值增强49.37%（P〈0.01）;而给予natrin 5,25,125 mg·L^-1预处理24 h组该平均峰值分别增强27.52%,12.71%和5.15%,显著低于H2O2组（P〈0.01）。PCR结果表明,H2O2损伤组其心肌细胞Cav1.2,Calm,Ry R2及Kir6.2的m RNA表达分别为正常对照组的1.78倍,1.26倍,4.34倍和0.79倍（P〈0.01）;而给予natrin及维拉帕米干预组,细胞Cav1.2,Calm和Ry R2的m RNA表达较H2O2损伤组均显著降低（P〈0.01）,而Kir6.2的m RNA表达较H2O2损伤组显著升高（P〈0.05）。结论广西中华眼镜蛇natrin可明显减轻H2O2所致的心肌细胞钙超载,对心肌细胞过氧化损伤有良好的保护作用,其作用机制可能与降低H2O2损伤的心肌细胞的Cav1.2,Calm和Ry R2的m RNA表达及增加Kir6.2的m RNA表达有关。

关键词： natrin 钙超载肌细胞心脏离子通道

重组人膜联蛋白A5对内毒素诱发心肌细胞损伤时P-PKCα和P120-catenin表达的影响

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中华麻醉学杂志 2016年第5期36卷 610-612页

作者：赵涛谷长平刘孟洁王栋周飞龚妍竹王月兰日照市人民医院麻醉科 276826 山东省千佛山医院麻醉科济南市250014

目的评价重组人膜联蛋白A5对内毒素诱发心肌细胞损伤时磷酸化蛋白激酶Cα（p-PKCα）和p120-catenin表达的影响。方法体外培养H9c2心肌细胞，采用随机数字表法分为3组（n＝18）：对照组（C组）、内毒素组（L组）和重组人膜联蛋白A5组（... 详细信息

目的评价重组人膜联蛋白A5对内毒素诱发心肌细胞损伤时磷酸化蛋白激酶Cα（p-PKCα）和p120-catenin表达的影响。方法体外培养H9c2心肌细胞，采用随机数字表法分为3组（n＝18）：对照组（C组）、内毒素组（L组）和重组人膜联蛋白A5组（A组）。A组加入重组人膜联蛋白A5（终浓度5 ng/ml）孵育2 h，然后L组和A组给予内毒素（终浓度1 μg/ml）孵育。于孵育4 h时，采用凋亡试剂盒检测细胞凋亡率，免疫共聚焦法测定细胞间隙，采用estern blot法测定p-PKCα和p120-catenin的表达。结果与C组比较，L组细胞凋亡率升高，细胞间隙增加，p120-catenin表达下调，p-PKCα表达上调（P〈0.05）；与L组比较，A组细胞凋亡率降低，细胞间隙减少，p120-catenin表达上调，p-PKCα表达下调（P〈0.05）。结论重组人膜联蛋白A5可抑制PKCα磷酸化，进而上调p120-catenin表达，减轻内毒素诱发的心肌细胞损伤。

关键词：膜联蛋白A5 内毒素类肌细胞心脏蛋白激酶C 连接蛋白类

莫西沙星对大鼠气道平滑肌细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

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中华结核和呼吸杂志 2011年第9期34卷 684-687页

作者：李慧婷朱述阳裴厚霜徐州医学院附属医院呼吸内科 221002 大屯煤电（集团）公司中心医院呼吸内科

目的观察大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）在不同浓度的莫西沙星作用下，其线粒体膜电位（△Ψm）和半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3（Caspase-3）表达及细胞凋亡的变化，探讨莫西沙星促进ASMC凋亡的可能机制。方法体外原代培养大鼠ASMC，按随机... 详细信息

目的观察大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）在不同浓度的莫西沙星作用下，其线粒体膜电位（△Ψm）和半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3（Caspase-3）表达及细胞凋亡的变化，探讨莫西沙星促进ASMC凋亡的可能机制。方法体外原代培养大鼠ASMC，按随机数字表法分为空白对照组、莫西沙星40 mg/L组（M40组）、80 mg/L组（M80组）、120 mg/L组（M120组）和200 mg/L组（M200组），均孵育48 h后，Annexin-V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率，用JC-1荧光探针在免疫荧光显微镜下检测细胞△Ψm的变化，Western blot法检测凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果各莫西沙星浓度组（M40组、M80组、M120组及M200组）的细胞凋亡率分别为（2.95±0.21）％、（7.39±0.63）％、（13.39±0.40）％和（21.20±1.42）％，均明显高于空白对照组的（0.94±0.05）％（均P＜0.01），并存在浓度依赖性（r=0.974,P＜0.01）；荧光显微镜检测显示空白对照组以红色荧光为主，随着莫西沙星浓度增大，红色/绿色荧光强度值比率（分别为6.54±0.15、4.48±0.14、2.25±0.10和1.99±0.12）逐渐降低，与空白对照组（10.02±0.20）相比差异有统计学意义（均P＜0.01），并存在药物浓度依赖性（r=-0.946,P＜0.01）；Western blot检测显示，空白对照组几乎无Caspase-3蛋白表达（0.31±0.03），各莫西沙星浓度组Caspase-3蛋白表达（分别为0.45±0.05、0.59±0.04、0.69±0.06和0.84±0.04）均明显高于空白对照组（0.31±0.03）（均P＜0.01），同时也存在浓度依赖性（r=0.979,P＜0.01）。各组细胞凋亡率与△Ψm水平呈负相关（r=-0.887,P＜0.01），与凋亡蛋白Caspase-3水平呈正相关（r=0.955，P＜0.01），各组细胞△Ψm水平与Caspase-3水平呈负相关（r=-0.951，P＜0.01）。结论莫西沙星可能通过影响大鼠AΨm促进ASMC凋亡。

关键词：肌细胞平滑肌细胞凋亡膜电位线粒体半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 莫西沙星