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双循环线性滚环扩增检测HBV替诺福韦耐药位点的方法学研究

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第三军医大学学报 2013年第11期35卷 1093-1096页

作者：林钟劝陈瑶韩梅夏宇姚远和昱晨张波第三军医大学西南医院全军检验医学专科中心重庆400038

目的探讨双循环线性滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)检测HBV替诺福韦耐药基因突变位点的可行性。方法以HBV替诺福韦耐药基因突变位点为检测靶点,设计该位点的锁式探针以及包括该位点的HBV野生型、突变性模板。锁式探针与野... 详细信息

目的探讨双循环线性滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)检测HBV替诺福韦耐药基因突变位点的可行性。方法以HBV替诺福韦耐药基因突变位点为检测靶点,设计该位点的锁式探针以及包括该位点的HBV野生型、突变性模板。锁式探针与野生型模板特异识别并结合,通过***连接酶连接为闭合环形结构,加入引物启动第1轮RCA;扩增产物用HpaⅠ酶切游离出检测模板,重复上述过程进行第2轮RCA,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物;并对该方法的特异性、检测限及连接效率的影响因素进行初步探讨。结果探针与模板的杂交温度为45℃时,探针的环化连接效率最高、特异性最好。通过对不同浓度野生型模板的检测,单循环RCA的检测限为50pmol/L,双循环RCA的检测限为5pmol/L,检测灵敏度提高了10倍。结论初步建立了检测HBV替诺福韦基因耐药位点突变的双循环RCA方法。

关键词：双循环滚环扩增耐药位点突变

唐山地区CHB患者HBV基因型与耐药种类和耐药位点的分析研究

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中华医院感染学杂志 2017年第23期27卷 5281-5284页

作者：张宝李世龙牛蕊李纯平吴丹葛保民秦莉唐山市传染病医院检验科河北唐山063020 唐山市人民医院检验科河北唐山063000

目的探讨唐山地区慢性乙型肝炎病毒(CHB)患者乙型肝炎病毒(HBV)基因分型,核苷酸类抗病毒药物的耐药种类分布和耐药位点的相关性。方法选择2009年10月-2014年4月就诊于唐山市传染病医院门诊和住院的467例慢性乙型肝炎病毒患者,通过使用... 详细信息

目的探讨唐山地区慢性乙型肝炎病毒(CHB)患者乙型肝炎病毒(HBV)基因分型,核苷酸类抗病毒药物的耐药种类分布和耐药位点的相关性。方法选择2009年10月-2014年4月就诊于唐山市传染病医院门诊和住院的467例慢性乙型肝炎病毒患者,通过使用毛细管电泳仪采用双脱氧终止法测序技术,对患者血清进行HBV基因分型和耐药位点的检测,使用统计学软件对数据进行统计分析。结果唐山地区CHB患者的467例样本中检测出HBV基因型445例,其中B基因型64例占14.38%,C基因型380例占85.39%,D基因型1例占0.22%;共检出耐药患者283例,其中对恩替卡韦、拉米夫定和替比夫定多药耐药的160例占56.54%;对阿德福韦酯的主要耐药位点是rtA181V/T/S突变,其次是rtA181V/T/S和rtN236T同时突变,B基因型与C基因型对阿德福韦酯的耐药位点突变分布比较差异有统计学意义(P耐药的主要耐药位点是rtL180M和rtM204I/V/S同时突变,其次是单独rtM204I/V/S突变。结论唐山地区HBV感染者的基因型主要以C基因型为优势基因型;通过对耐药位点的分析,B基因型CHB患者应用阿德福韦酯不易耐药,HBV基因型B型和C型的CHB患者对拉米夫定、恩替卡韦和替比夫定耐药的多药耐药位点分布无差异。

关键词：乙型肝炎病毒基因分型耐药位点多药耐药慢性乙型肝炎

抗HCV新型直接抗病毒药物相关耐药位点研究进展

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中华实验和临床感染病杂志（电子版） 2016年第5期10卷 534-540页

作者：孙丹辉颜学兵徐州医学院附属医院感染性疾病科徐州市221002

近年来,新型直接抗病毒药物(DAAs)药物研发取得了突破性进展,使其在抗HCV过程中具备高SVR率、广泛基因型谱、治疗周期短以及耐药率低等优点。但随着新型抗病毒药物在临床中的广泛应用,已发现多个相关耐药位点直接影响抗HCV的疗效,本文... 详细信息

近年来,新型直接抗病毒药物(DAAs)药物研发取得了突破性进展,使其在抗HCV过程中具备高SVR率、广泛基因型谱、治疗周期短以及耐药率低等优点。但随着新型抗病毒药物在临床中的广泛应用,已发现多个相关耐药位点直接影响抗HCV的疗效,本文针对新型DAAs药物(包括NS3/4A蛋白酶抑制剂、NS5A蛋白抑制剂及NS5B聚合酶抑制)及其相关耐药位点进行总结。

关键词：肝炎病毒,丙型基因型 DAAs抑制剂耐药位点

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乙肝基因分型与耐药位点突变的关系

中国卫生检验杂志 2011年第5期21卷 1280-1281,1283页

作者：褚佩英俞岳峰杨文波岳美娜杨雨杭州迪安医学检验中心杭州310030

目的:检测本地区乙肝病毒复制病人中基因型分布情况,探讨HBV基因型与抗病毒疗效关系。方法:应用乙肝病毒型特异性引物采用巢式PCR方法,对45例HBV-DNA阳性患者进行HBV基因型分析,用DNA测序方法检测耐药位点突变。结果:B型7例,占15.56%;C... 详细信息

目的:检测本地区乙肝病毒复制病人中基因型分布情况,探讨HBV基因型与抗病毒疗效关系。方法:应用乙肝病毒型特异性引物采用巢式PCR方法,对45例HBV-DNA阳性患者进行HBV基因型分析,用DNA测序方法检测耐药位点突变。结果:B型7例,占15.56%;C型34例,占75.56%;未分型3例,占6.67%;B+C混合型1例,占2.22%。未发现其他型别。C型病人人均病毒载量5.67±1.61(1oglncopies/m1)较B+C混合型5.54(只有1例)、B型(4.42±1.39)及未分型(2.65±0.57)高。C型病人耐药变异位点多,病人比例高。结论:浙江等地区HBV—DNA基因分型以C、B为主,而B基因型抗病毒治疗疗效最好,C型、混合型及其它型对抗病毒治疗药物疗效较差。

关键词： HBV-DNA 基因分型耐药位点

对慢性乙型肝炎及肝硬化患者的核苷(酸)类药物耐药位点的分析

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医学研究杂志 2014年第4期43卷 83-86页

作者：鲍艳婷郑良达陈公英王洁周翔葛珂浙江中医药大学杭州310053 杭州师范大学附属医院浙江中医药大学第六附属医院

目的研究接受核苷（酸）类似物抗病毒治疗、出现病毒学突破后的慢性乙型肝炎、肝硬化患者血清乙型肝炎病毒（HBV）P区基因序列突变率,突变形式及用药情况,为评估病情进展和实施下一步抗病毒治疗方案提供较为全面的信息.方法选取浙江... 详细信息

目的研究接受核苷（酸）类似物抗病毒治疗、出现病毒学突破后的慢性乙型肝炎、肝硬化患者血清乙型肝炎病毒（HBV）P区基因序列突变率,突变形式及用药情况,为评估病情进展和实施下一步抗病毒治疗方案提供较为全面的信息.方法选取浙江中医药大学附属第六医院2009年3月～2012年10月447例接受核苷（酸）类似物抗病毒治疗、出现病毒学突破后的慢性乙型肝炎、肝硬化患者为研究对象,采用基因直接测序法,对其血清HBV P区基因PCR扩增产物进行测序,分析各个耐药位点,同时搜集相关用药史进行回顾性分析.结果在447例病例中存在位点突变者227例（50.8％）,共存在30种变异形式,变异形式以M204I、L180M＋ M204V、L180M＋ M204I三者居多.其余种类复杂多样,大多以联合突变形式出现;耐药药物的使用及产生的耐药位点基本一致;主要的变异位点集中发生在M204I和L180M,余均较为分散.且经统计分析,乙型肝炎及肝硬化两总体的突变率有统计学差异.结论对核苷（酸）类似物抗病毒治疗中出现病毒学突破的慢性乙型肝炎及肝硬化患者血清中HBVP区基因耐药位点的分析研究对合理用药以及发生耐药后及时调整治疗方案有重要的作用.

关键词：乙型肝炎 HBV所致肝硬化核苷类药物耐药位点

核苷类似物联合治疗拉米夫定不同耐药位点慢性乙型肝炎患者的疗效观察

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临床医学工程 2016年第8期23卷 1036-1038页

作者：刘仁志夏璀深圳市龙华新区中心医院/广东医学院附属龙华新区中心医院感染性疾病科广东深圳518110

目的探讨阿德福韦酯联合拉米夫定抗病毒治疗拉米夫定耐药的慢性乙肝患者的临床效果。方法纳入拉米夫定耐药的慢性乙肝患者56例,按照患者耐药位点不同分为A组(180位点变异)和B组(204位点变异)各28例,所有患者均给予阿德福韦酯联合拉米夫... 详细信息

目的探讨阿德福韦酯联合拉米夫定抗病毒治疗拉米夫定耐药的慢性乙肝患者的临床效果。方法纳入拉米夫定耐药的慢性乙肝患者56例,按照患者耐药位点不同分为A组(180位点变异)和B组(204位点变异)各28例,所有患者均给予阿德福韦酯联合拉米夫定抗病毒治疗48周,于治疗前、治疗12周、治疗24周、治疗48周测定两组的ALT水平以及HBVDNA水平,并记录两组的HBeAg/HBeAb转换率和HBV-DNA阴转率。结果治疗12周、24周、48周时,两组的ALT水平以及HBV-DNA水平均显著低于治疗前(P0.05),B组的HBV-DNA水平显著低于A组(P耐药后的慢性乙肝患者,204位点变异者使用联合治疗效果明显,可取得较高的e抗原血清转换率、HBV-DNA阴转率,可以为抗乙肝病毒过程中发生的耐药进行较早、更有针对性的挽救治疗提供更好的选择。

关键词：阿德福韦酯拉米夫定拉米夫定耐药慢性乙型肝炎耐药位点

核苷(酸)类似物治疗慢性乙型肝炎患者的HBV耐药位点分析

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广东医学 2018年第S2期39卷 242-244页

作者：郭耿龙吴令杰张海生陈瑞烈张桂虹汕头市中心医院感染科广东汕头515031 汕头市中心医院检验科广东汕头515031

目的探讨核苷(酸)类似物治疗慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒(HBV)耐药位点情况。方法选取接受核苷(酸)类似物治疗的慢性乙型肝炎患者182例,采用PCR反向点杂交法检测HBV基因型和耐药变异位点。结果 182例慢性乙型肝炎患者中,基因C型150... 详细信息

目的探讨核苷(酸)类似物治疗慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒(HBV)耐药位点情况。方法选取接受核苷(酸)类似物治疗的慢性乙型肝炎患者182例,采用PCR反向点杂交法检测HBV基因型和耐药变异位点。结果 182例慢性乙型肝炎患者中,基因C型150例(82.42%),基因B型32例(17.58%),未见其他基因型;182例患者中检出67例有耐药变异(36.81%),其中B基因型11例,C基因型56例,B基因型和C基因型变异率比较差异无统计学意义(P>0.05);共检测出6种耐药变异位点,分别为rtL80、rtV173、rtL180、rtA181、rtM204和rtN236,其中耐药变异位点rtM204检测率最高,为61.19%;rtM204变异株耐药突变模式有16种类型,包括2种rtM204单一位点变异和14种rtM204与其他耐药位点联合突变模式。结论核苷(酸)类似物治疗的慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布以C基因型为主,其中rtM204位点检出率最高,变异模式复杂。

关键词：核苷(酸)类似物慢性乙型肝炎基因型耐药位点

血清HBV RNA水平预测耐药位点突变及临床意义探究

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血清HBV RNA水平预测耐药位点突变及临床意义探究

HIV-1 CRF08_BC亚型感染者治疗前耐药和多态性位点分析

第九届全国疑难及重症肝病大会

作者：张霞霞北京大学第一医院感染科

研究目的:探究长期应用核苷(酸)类似物抗病毒治疗过程中预测基因耐药位点的新的血清学指标HBV RNA的价值及其新的临床意义。研究方法:纳入应用ETV抗病毒治疗的CHB患者30例,在基线及治疗24周的血清标本应用QIAamp Viral RNA Mini Kit提... 详细信息

研究目的:探究长期应用核苷(酸)类似物抗病毒治疗过程中预测基因耐药位点的新的血清学指标HBV RNA的价值及其新的临床意义。研究方法:纳入应用ETV抗病毒治疗的CHB患者30例,在基线及治疗24周的血清标本应用QIAamp Viral RNA Mini Kit提取血清HBV RNA,设计特定引物进行逆转录,PCR扩增目的片段,将目的片段与构建PMD19-T载体进行连接,重组质粒转化入大肠杆菌感受态细胞,经增殖扩增进行蓝白斑筛选,测序鉴定序列。计算质粒的数值进行梯度稀释作为标准品,使用TAMARA探针行实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-PCR)测定产物。应用统计学分析血清HBV RNA水平对于基因耐药位点预测价值及其他相关临床意义。研究结果:30例应用ETV抗病毒治疗的慢乙肝患者根据基因耐药结果分为耐药组(9例)和非耐药组(21例),基线耐药组患者的表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)水平高于非耐药组,血清HBV RNA水平低于非耐药组,耐药组患者HBV DNA水平明显高于非耐药组患者(p=0.033)。在治疗24周,两组间血清HBV RNA水平存在显著的统计学差异(5.39±0.59,3.52±1.43,p=0.000),耐药组患者平均血清HBV RNA水平明显高于非耐药组。对患者进行应答情况亚组分析研究发现基线仅DNA水平存在统计学差异(p=0.013),但血清HBV DNA水平与HBV RNA水平有一定关联性(r=0.686,p=0.014)。治疗24周时应答组患者HBV RNA水平呈下降趋势,而应答不佳组患者血清HBV RNA水平呈明显增高趋势。25例乙型肝炎e抗原(hepatitis B virus e antigen,HBeAg)阳性的患者中有10例患者发生HBeAg血清学转换,15例患者未发生血清学转换,治疗24周两组间血清HBV RNA水平存在显著的统计学差异(p耐药位点的发生,耐药组患者平均血清HBV RNA水平明显高于非耐药组。且抗病毒治疗时应答组患者HBV RNA水平呈下降趋势,应答不佳组患者HBV RNA水平呈升高趋势。同时HBe Ag阳性慢乙肝患者可早期监测患者血清HBV RNA水平下降程度来预测后续治疗过程中是否会发生HBeAg血清学转换。

关键词：乙型病毒性肝炎二代测序耐药位点 HBV RNA

来源： cnki会议评论

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第1期43卷 20-26页

作者：张佳欣胡婧宋畅董敖渤李苗苗冯毅阮玉华邢辉廖玲洁中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心病毒及免疫研究室北京102206

目的了解我国HIV-1 CRF08_BC感染者治疗前耐药情况与基因多态性特征。方法采用横断面调查方法,收集2018年全国治疗前耐药调查中的HIV感染者血浆样本,提取RNA,扩增蛋白酶和逆转录酶(PR/RT)区基因片段并测序,利用HIVdb软件进行耐药判定,... 详细信息

目的了解我国HIV-1 CRF08_BC感染者治疗前耐药情况与基因多态性特征。方法采用横断面调查方法,收集2018年全国治疗前耐药调查中的HIV感染者血浆样本,提取RNA,扩增蛋白酶和逆转录酶(PR/RT)区基因片段并测序,利用HIVdb软件进行耐药判定,使用χ2检验分析治疗前耐药与非耐药感染者氨基酸位点突变的差异,利用CorMut R包分析耐药位点与多态性位点间突变共变异情况,运用HIV-TRACE软件构建分子传播网络。结果共获得来自25个省市的465个CRF08_BC感染者的HIV序列,总耐药率为17.8%(83/465),非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)、核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)、蛋白酶类抑制剂(PIs)耐药率分别为16.6%(77/465)、1.1%(5/465)、0.9%(4/465),其中利匹韦林(RPV)的耐药率最高(15.7%,73/465)。位点E138A耐药突变的频率最高(11.6%,54/465),有6个多态性位点(S162C、K102Q、T200A、V179E、I202V、T200M)与E138A具有协同突变关系。分子传播网络显示,含有E138耐药突变位点的感染者在云南和四川地区聚集成簇,其中云南临沧聚集程度最高。结论我国CRF08_BC感染者针对二代NNRTIs药物RPV的耐药比例较高,E138A耐药突变与多态性位点的协同突变是否会对HIV耐药程度和复制适应性产生影响,还需进一步验证。

关键词： CRF08_BC 抗病毒治疗前耐药位点多态性位点