检索结果-南通市图书馆

江苏农业科学 2012年第10期40卷 45-48页

作者：李敏张健李玉娟谈峰丛小丽江苏沿江地区农业科学研究所江苏如皋226541

植物对盐分胁迫的反应和适应是一个复杂的过程。本文就植物耐盐生理和耐盐基因两个方面近年来的研究进行了综述,这对植物抗逆育种研究有重要的指导意义。

关键词：植物耐盐生理耐盐基因

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植物耐盐基因工程研究进展

东北农业大学学报 2010年第10期41卷 150-156页

作者：化烨才华柏锡李勇纪巍季佐军朱延明东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

盐害是农作物减产的主要因素,提高作物的耐盐性是提高全球粮食产量的基础。文章较系统地概述了植物盐胁迫信号传导通路研究现状,植物耐盐基因的挖掘,包括基于EST数据库的基因挖掘、通过转录谱确定胁迫响应基因以及应用转基因手段确定基... 详细信息

盐害是农作物减产的主要因素,提高作物的耐盐性是提高全球粮食产量的基础。文章较系统地概述了植物盐胁迫信号传导通路研究现状,植物耐盐基因的挖掘,包括基于EST数据库的基因挖掘、通过转录谱确定胁迫响应基因以及应用转基因手段确定基因在胁迫耐受机制中的功能。同时系统阐述了各类耐盐基因的应用,包括渗透调节物质合成酶基因、氧胁迫相关基因、离子转运相关基因、编码转录因子的调节基因、感应和传导胁迫信号的蛋白激酶基因和其他调控序列。文章还对植物耐盐基因工程研究的现状进行了分析和提出建议,对进行植物基因工程研究工作具有参考价值和指导意义。

关键词：基因工程盐胁迫信号传导通路基因挖掘耐盐基因非生物胁迫

cDNA-AFLP技术在植物耐盐基因鉴定上的应用

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基因组学与应用生物学 2013年第2期32卷 254-259页

作者：胡淑英张春红王小敏黄涛吴文龙李维林江苏省中国科学院植物研究所南京210014

cDNA-AFLP技术是近年来广泛应用于植物基因分离与表达研究的mRNA指纹图谱技术,在分离植物特异性基因等生物技术研究中发挥了巨大作用。在植物耐盐基因鉴定方面,该技术的应用处于新兴初始阶段,但已取得了诸多成效。本文在概述植物耐盐响... 详细信息

cDNA-AFLP技术是近年来广泛应用于植物基因分离与表达研究的mRNA指纹图谱技术,在分离植物特异性基因等生物技术研究中发挥了巨大作用。在植物耐盐基因鉴定方面,该技术的应用处于新兴初始阶段,但已取得了诸多成效。本文在概述植物耐盐响应机制的基础上,着重对利用cDNA-AFLP技术鉴定的植物耐盐相关基因及其相应作用机制进行了阐述,并对其在植物耐盐分子生物学研究上的应用前景进行了展望。

关键词： cDNA—AFLP 耐盐基因基因鉴定

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利用TAIL-PCR克隆耐盐基因及其分析

生物技术通报 2010年第11期26卷 166-170,176页

作者：张伟涛程国军周俊初中南林业科技大学生物环境科学与技术研究所长沙410004 华中农业大学农业微生物国家重点实验室武汉430070

通过大量筛选得到一株高耐盐的豇豆根瘤菌WME7,最高可耐15g/L NaCl,利用Tn5-sacB转座子对该菌株进行随机插入突变,从突变子中筛选获得30个共生缺陷型突变株。利用TAIL-PCR(thermal asymmetric interlaced PCR)方法克隆了突变株Tn5-sacB... 详细信息

通过大量筛选得到一株高耐盐的豇豆根瘤菌WME7,最高可耐15g/L NaCl,利用Tn5-sacB转座子对该菌株进行随机插入突变,从突变子中筛选获得30个共生缺陷型突变株。利用TAIL-PCR(thermal asymmetric interlaced PCR)方法克隆了突变株Tn5-sacB侧翼序列,通过BLAST发现有1个突变株的插入失活基因与鼠伤寒沙门氏菌抗银的结合蛋白SilE有94%同源性,表明有关Na+离子的抗性基因可能与Ag+离子的抗性基因有某种关系。该基因在其它菌中也能抗其它金属离子(铜、锌、钴、铬)。

关键词：筛选耐盐根瘤菌 TAIL-PCR 耐盐基因

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大豆耐盐基因研究进展

大豆科学 2018年第4期37卷 629-636页

作者：田艺心高凤菊曹鹏鹏高春华德州市农业科学研究院山东德州253015

大豆是世界上重要的粮食作物和经济作物,土地盐碱化造成大豆产量大幅度降低。了解大豆耐盐的遗传和分子机制有助于挖掘盐碱地大豆产量潜力。迄今为止从耐盐大豆种质中已分离筛选出一批耐盐相关基因,其它植物中分离的耐盐基因有些也已被... 详细信息

大豆是世界上重要的粮食作物和经济作物,土地盐碱化造成大豆产量大幅度降低。了解大豆耐盐的遗传和分子机制有助于挖掘盐碱地大豆产量潜力。迄今为止从耐盐大豆种质中已分离筛选出一批耐盐相关基因,其它植物中分离的耐盐基因有些也已被用于大豆耐盐研究,研究这些基因一方面可以揭示大豆耐盐机理,另一方面可以提高大豆耐盐性。为此,从近几年有关大豆耐盐基因的遗传、挖掘与筛选、分子标记、基因定位与克隆、转化及表达等方面的相关研究结果对大豆盐胁迫耐受相关基因进行了综述,以期为大豆耐盐相关基因的快速准确定位及耐盐高产新种质的发掘利用提供理论依据。

关键词：大豆盐碱地耐盐基因分子标记 QTL定位

海滨锦葵耐盐基因KvSOS1的克隆与表达载体构建

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江苏农业科学 2016年第10期44卷 76-80页

作者：王红艳王鸿磊中国农业大学烟台研究院山东烟台264670

为了克隆盐生植物海滨锦葵耐盐基因Kv SOS1并构建其表达载体,采用RT-PCR和RACE方法从海滨锦葵中克隆了质膜Na+/H+转运蛋白基因Kv SOS1(Gen Bank登录号KJ577576)的全长c DNA序列,长度为3 850 bp,其中开放阅读框长度为3 444 bp。Kv SOS1... 详细信息

为了克隆盐生植物海滨锦葵耐盐基因Kv SOS1并构建其表达载体,采用RT-PCR和RACE方法从海滨锦葵中克隆了质膜Na+/H+转运蛋白基因Kv SOS1(Gen Bank登录号KJ577576)的全长c DNA序列,长度为3 850 bp,其中开放阅读框长度为3 444 bp。Kv SOS1基因编码1个由1 147个氨基酸残基组成的蛋白,分子量为127.56 ku,理论等电点p I为6.18。疏水性分析结果表明,该蛋白N-末端具有高度疏水性,并含有11个跨膜区,C-末端为1个长约700个氨基酸残基的亲水性尾巴位于细胞质中。Kv SOS1基因编码蛋白与雷蒙德氏棉、可可和陆地棉SOS1蛋白的氨基酸序列同源性很高,分别为86%、82%和82%。系统进化树分析显示Kv SOS1基因编码蛋白与质膜Na+/H+转运蛋白、液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白(NHX)属于不同分支。同时将Kv SOS1基因构建入植物表达载体p BI121中,并成功转入农杆菌LBA4404中。

关键词：海滨锦葵耐盐基因质膜Na^+/H^+转运蛋白表达载体

宏基因组文库高通量筛选古盐井中嗜盐微生物耐盐基因

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宏基因组文库高通量筛选古盐井中嗜盐微生物耐盐基因

作者：梁华忠西华大学

学位级别：硕士

耐盐工程菌的选育一直是生物耐盐工程研究的重点和热点。随着生物技术的发展，通过DNA重组和转基因技术向微生物体中导入耐盐基因，已成为提高微生物耐盐胁迫的重要途径。因此，耐盐基因材料的筛选对耐盐基因工程育种就显得尤为重要。 ... 详细信息

耐盐工程菌的选育一直是生物耐盐工程研究的重点和热点。随着生物技术的发展，通过DNA重组和转基因技术向微生物体中导入耐盐基因，已成为提高微生物耐盐胁迫的重要途径。因此，耐盐基因材料的筛选对耐盐基因工程育种就显得尤为重要。盐生生物是耐盐基因筛选的重要对象。盐井作为一种特殊的人造高盐环境，其间分布着大量的嗜盐微生物。在漫长的高盐胁迫过程中，嗜盐微生物逐渐形成了一套高效的感应和传导盐胁迫的信号系统，并能特异性地表达一些基因以响应环境的盐胁迫。其中，耐盐蛋白是嗜盐微生物外排钠离子、降低盐害、提高耐盐特性的一种关键性输出系统，耐盐蛋白的有无及其活性的高低与嗜盐微生物的耐盐特性密切相关。因此，本研究利用宏基因组文库从盐井中筛选耐盐基因，以期为耐盐工程菌的选育提供基因材料。在本研究中，向采集的盐卤样品中加入1％的酪氨酸，在30℃、150r/min光照培养140天以富集菌体，然后提取总DNA，用Mbo I酶切后胶回收10kbp片段与Bam HI酶切并去磷酸化的载体pUC18连接后，电转化入耐盐基因缺陷菌株*** KNabc，构建宏基因组文库。以0.2mol/L NaCl为筛选因子筛选耐盐基因。实验中筛选到了98个耐盐克隆子，其包含的外源DNA片段主要集中在1kbp，其包含的耐盐基因编码的蛋白分别属于AdoMetTases superfamily、AAT-I superfamily、PMSR superfamily、OM-channelssuperfamily和ArsB/NhaD permease superfamily蛋白家族，其中编码蛋白属于ArsB/NhaDsuperfamily蛋白家族的基因(accession：JN168102)为ArsB膜转运蛋白基因，命名为K-ArsB，含有该基因的耐盐克隆子命名为*** K-ArsB，该基因编码蛋白命名为K-ArsB。对筛选到的耐盐基因K-ArsB进行生物信息学分析，结果表明：K-ArsB包含1个长993bp的开放阅读框，编码330个氨基酸，其转录起始密码子为ATG、转录的终止密码子为TAG、-10区保守序列为GTTAAT、-35区保守序列为TTGAT、SD序列为AGGAGG;PSIPRED分析表明，K-ArsB编码的氨基酸多数以α螺旋形成二级结构，少数以无规卷曲形成二级结构，没有β折叠;K-ArsB编码的蛋白质的理论等电点为pH7.02，平均分子量为34999.81Da，属于ArsB/NhaD permease superfamily蛋白家族，与数据库中Klebsiella sp. MS92-3的ArsB (accession: ZP8303599)相似性为95%，Escherichiahermannii NBRC105704的ArsB (ZP9808970)相似性为94%，Escherichia sp. TW09308的ArsB(ZP9461528)相似性为89%， Serratia proteamaculans568(accession:YP01478619)和Yersinia frederiksenii ATCC33641(accession: ZP04631221)的ArsB相似性为87%，该蛋白整合到细胞膜上，存在着9个跨膜区域，具有转运钠盐、砷酸盐、硫酸盐、亚锑酸盐以及有机阴离子通过生物膜的功能，在维持细胞内外的渗透压平衡中起到重要作用。通过对含有ArsB膜转运蛋白基因K-ArsB的耐盐克隆子*** K-ArsB进行SDS-PAGE凝胶电泳和盐碱耐受性实验发现，K-ArsB编码一种分子量约为35KD的蛋白质，能显著提高*** KNabc对NaCl和碱性pH的耐受能力，是一个良好的耐盐基因。本研究对于理解古盐井中嗜盐微生物的嗜盐机制，开发古盐井中的基因资源及寻找新的耐盐基因具有重要意义。

关键词：宏基因组文库嗜盐微生物耐盐基因古盐井

农杆菌介导的耐盐基因EhHOG对大麦幼胚及其愈伤组织的遗传转化

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农杆菌介导的耐盐基因EhHOG对大麦幼胚及其愈伤组织的遗传转化

作者：王锋华中农业大学

学位级别：硕士

大麦(Hordeum vulgare L.)是世界上仅次于小麦、水稻和玉米的禾本科作物,具有较高的营养价值和重要的应用价值在世界范围类广泛种植,是分子育种的重要模式作物之一。近年来,育种家们开始利用基因工程手段培育抗逆高产优质大麦品种。随... 详细信息

大麦(Hordeum vulgare L.)是世界上仅次于小麦、水稻和玉米的禾本科作物,具有较高的营养价值和重要的应用价值在世界范围类广泛种植,是分子育种的重要模式作物之一。近年来,育种家们开始利用基因工程手段培育抗逆高产优质大麦品种。随着全球生态环境的破坏,大面积盐碱地严重阻碍大麦的正常生长繁殖。源于以色列死海丝状真菌E. herbariorum的EhHOG为编码丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的基因,对盐害有很强的耐性。本研究构建了高效表达的耐盐基因HOG载体,并用农杆菌介导的方式,对3个大麦品种幼胚和愈伤组织的遗传转化情况进行了研究,主要结果如下：(1)以大麦品种Golden promise,华大麦4号和华大麦7号的幼胚为实验材料,分别研究了蔗糖和麦芽糖作糖源对大麦幼胚向愈伤组织诱导及分化的影响,结果表明,麦芽糖和蔗糖都可以作为大麦幼胚诱导和分化培养基的糖源,但麦芽糖诱导率和分化率稍稍高一点。同时研究表明,1g/1的酸水解酪蛋白对大麦愈伤组织诱导有一定促进作用。(2)表达载体以pCAMBIA1300为基本骨架,加入pUbi启动子和tNos终止子命名为pCAMBIA13001;通过PCR在HOG基因两端引入酶切位点Bam HI和Sac I,扩增后与pMD-18T载体连接;分别回收双酶切后的HOG片段和pCAMBIA13001载体片段,并用T4连接酶连接,得到含有目的基因的重组质粒pCAMBIA13001-B;利用电击法将其导入农杆菌AGL1中,为进一步遗传转化研究奠定基础。(3)用3个大麦品种(Golden promise、华大麦4号和华大麦7号)的幼胚和愈伤组织为受体材料,用农杆菌侵染法研究了耐盐基因HOG的大麦遗传转化情况,得到的61株转基因再生植株中,初步的PCR检测显示,有17株为阳性。

关键词：大麦再生体系幼胚愈伤组织耐盐基因农杆菌介导的遗传转化

大豆耐盐基因定位及耐盐种质资源分子标记选择效率分析

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大豆耐盐基因定位及耐盐种质资源分子标记选择效率分析

作者：田蕾中国农业科学院

学位级别：硕士

土壤盐渍化是影响农业生产的重要问题,筛选、培育耐盐作物品种是提高盐渍土利用效率的有效措施。我国拥有丰富的大豆资源,但大豆耐盐性状的表型鉴定效率较低,影响了耐盐资源的筛选和利用。筛选与大豆耐盐基因紧密连锁的分子标记,并用于... 详细信息

土壤盐渍化是影响农业生产的重要问题,筛选、培育耐盐作物品种是提高盐渍土利用效率的有效措施。我国拥有丰富的大豆资源,但大豆耐盐性状的表型鉴定效率较低,影响了耐盐资源的筛选和利用。筛选与大豆耐盐基因紧密连锁的分子标记,并用于种质资源的标记辅助鉴定,是提高耐盐资源鉴定效率、加速耐盐品种选育的有效途径。本课题组前期筛选了一个与耐盐基因紧密连锁的RAPD标记,本研究旨在将该标记转化为稳定的SCAR标记。并利用不同类型的标记对耐盐基因进行定位。分析耐盐和盐敏感种质的遗传多样性,明确不同类型的标记对耐盐大豆种质资源的选择效率,为耐盐种质的有效利用奠定基础。同时配制耐盐和盐敏感材料的杂交组合,并用分子标记鉴定真杂种,为下一步耐盐基因精细定位提供材料保障。主要研究结果如下: 1.大豆耐盐基因SCAR标记转化及耐盐基因定位将大豆耐盐基因的RAPD标记转化为SCAR标记并定位于N连锁群。耐盐基因被锚定在SSR标记Satt255和Sat85之间。SCAR标记JD33-432与耐盐基因遗传距离最近,为2.0 cM。 2.耐盐基因STS、SCAR和CAPs标记的选择效率分析利用新开发的4个STS标记、2个SCAR标记和1个CAPs标记,分析145份大豆种质资源,通过分子标记与种质耐盐性状的LD分析,共得到5个与大豆耐盐性显著连锁不平衡的标记。这5个标记对145份种质检测结果表明,基因型与表型的符合率均在80%以上,以CAPs标记QS08068的选择效率最高,为87.1%。 3.大豆种质资源SSR多样性分析选用耐盐基因所在区段的SSR标记,对55份耐盐和90份盐敏感种质资源进行检测,6对SSR引物共检测到106个等位变异,不同位点117个。其中耐盐种质特有等位变异数为16个,盐敏感种质特有等位变异数为26个。SSR标记聚类虽然没有将耐盐种质和盐敏感种质完全分开,但得到了5个相对独立的类群,包括两个耐盐种质类群和3个盐敏感种质类群。 4.杂交组合配制及真杂种鉴定利用耐盐和盐敏感资源配制了11个杂交组合,利用亲本间多态性的3对SSR标记和3对与大豆耐盐性显著连锁不平衡的标记对杂交组合F植株进行检测,在148个F植株中检测到81.3%的F为真杂种。用1对引物与6对引物检测结果完全吻合,说明采用1对多态性引物即可对F真伪进行准确判断。并为下一步耐盐基因的精细定位提供丰富的分离群体。

关键词：大豆耐盐基因 SCAR 分子标记 MAS

利用Cre/loxP重组激活系统对耐盐基因和启动子的功能分析

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利用Cre/loxP重组激活系统对耐盐基因和启动子的功能分析

作者：陈广东哈尔滨师范大学

学位级别：硕士

利用植物基因工程技术培育耐盐新品种，是提高作物耐盐性的主要措施之一。科学有效的对耐盐基因和其调控元件进行评价是深入研究植物耐盐机理的关键。对此，本试验利用Cre/loxP重组激活系统，构建了含AtNHX1或TvNHX1基因、rd29A或Hsp18.... 详细信息

利用植物基因工程技术培育耐盐新品种，是提高作物耐盐性的主要措施之一。科学有效的对耐盐基因和其调控元件进行评价是深入研究植物耐盐机理的关键。对此，本试验利用Cre/loxP重组激活系统，构建了含AtNHX1或TvNHX1基因、rd29A或Hsp18.2启动子的植物表达载体，并获得拟南芥共转化体。对4种转化体进行NaCl处理，盐胁迫可诱导Cre/loxP系统中rd29A或Hsp18.2启动子激活Cre，进而激活一系列相关反应使目的基因与GFP时空共表达。通过表型观察、生理指标测定、GFP观测和相关基因的表达检测，对AtNHX1和TvNHX1基因、rd29A和Hsp18.2启动子进行了功能分析。主要结果如下：构建植物表达载体pGII227-UASAtNHX1-rd29ACREN和pGII227-UASTvNHX1-rd29ACREN。通过电击转化法分别将两个表达载体转入了含有助质粒pSoup的农杆菌C58C1中。利用农杆菌介导的共转化法，将两个载体组合pGII227-UASAtNHX1-rd29ACREN/pI-GFP（rd29A-At）、pGII227-UASTvNHX1-rd29ACREN/pI-GFP（rd29A-Tv）分别转入拟南芥中。T1代转基因植株经过8mg/l PPT、15mg/l Hyg抗性筛选、PCR检测，阳性率分别为7.7%和3.7%。对转基因植株rd29A-At、rd29A-Tv和pGII227-UASTvNHX1-HspCREN/pI-GFP（Hsp-tv）、pGII227-rd29ACREN/pI-GFP（CREN）进行NaCl胁迫处理（时间梯度：200mM NaCl胁迫5d、10d、15d;浓度梯度：150mM、200mM、300mM NaCl胁迫5d），通过表型观察、叶片叶绿素含量测定、激光共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白表达及对比靶基因表达的半定量RT-PCR分析等研究，得出4种转基因植株对盐的耐受力依次为：rd29A-At>rd29A-Tv>Hsp-tv>CREN。据此结果及对不同类型的转基因植株间的分组比较揭示：启动子rd29A比Hsp18.2更好响应盐胁迫;AtNHX1比TvNHX1更能提高拟南芥植株的耐盐性，由此反映出内源基因过表达能更好提高植株的耐盐性;证实本研究构建的Cre/loxP重组激活体系是分析评价抗逆基因及其调控元件功能的高效可行的系统。

关键词：耐盐基因诱导型启动子功能分析 Cre/loxP重组激活系统盐胁迫