检索结果-南通市图书馆

缺氧反应元件启动子表达反义血管内皮生长因子(VEGF)_(165)cDNA靶向性抑制骨肉瘤细胞VEGF表达

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中华病理学杂志 2005年第9期34卷 588-591页

作者：王燕汪睿乔慧李晋云彭挺生李扬张萌梁惠珍丘钜世中山大学中山医学院病理学教研室解放军第五三三医院昆明医学院附属第二医院病理科

目的以缺氧诱导因子1/缺氧反应元件(HIF1/HRE)基因调节系统为载体,构建含HRE启动子的人反义血管内皮生长因子(VEGF)165cDNA真核表达载体,探讨其对缺氧条件下骨肉瘤细胞VEGF表达的靶向性抑制作用。方法采用聚合酶链反应(PCR)和DNA重组技... 详细信息

目的以缺氧诱导因子1/缺氧反应元件(HIF1/HRE)基因调节系统为载体,构建含HRE启动子的人反义血管内皮生长因子(VEGF)165cDNA真核表达载体,探讨其对缺氧条件下骨肉瘤细胞VEGF表达的靶向性抑制作用。方法采用聚合酶链反应(PCR)和DNA重组技术构建由HRE启动子驱动的含荧光素酶(Luc)报告基因和人反义VEGF165cDNA全长的真核表达质粒,将其转染骨肉瘤细胞系MG63,用液闪计数仪测定缺氧对报告基因表达的调节,酶链免疫吸附试验(ELISA)法检测缺氧条件下细胞VEGF表达的变化。结果成功构建了由HRE启动子驱动的含Luc和反义VEGF165cDNA全长的真核表达质粒pBIHRELucAsVEGF165,该质粒转染骨肉瘤细胞系,缺氧条件下可使报告基因在肿瘤细胞中的表达提高3.5×102倍,使肿瘤细胞VEGF分泌下降45%。结论利用肿瘤缺氧,HRE启动子能够实现反义VEGF165的高效表达,为开展靶向性抗肿瘤血管生成治疗提供了实验依据。

关键词：骨肉瘤内皮生长因子新生血管化,病理性细胞,培养的反义血管内皮生长因子骨肉瘤细胞系缺氧反应元件 VEGF表达抑制作用启动子

缺氧反应元件对肺癌放射-基因治疗的乏氧增敏实验研究

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重庆医学 2004年第7期33卷 962-964页

作者：王卫东陈正堂李德志段玉忠曹正怀第三军医大学新桥医院全军肿瘤中心重庆400037

目的　实体瘤的缺氧微环境限制了放射基因治疗的效果。本研究利用缺氧反应元件 (hypoxiaresponseelements,HREs)实现放射诱导及缺氧增强肿瘤坏死因子α(TNF α)表达 ,以提高乏氧实体瘤的放射基因治疗效果。方法　将HREs与放射敏感性E... 详细信息

目的　实体瘤的缺氧微环境限制了放射基因治疗的效果。本研究利用缺氧反应元件 (hypoxiaresponseelements,HREs)实现放射诱导及缺氧增强肿瘤坏死因子α(TNF α)表达 ,以提高乏氧实体瘤的放射基因治疗效果。方法　将HREs与放射敏感性Egr 1启动子串联 ,构建缺氧 /辐射双敏感性HRE Egr启动子及其调控的TNF α表达载体 ,用脂质体介导该载体转染肺癌A5 4 9细胞 ,予以照射 (6Gy)和 /或缺氧 (1 %氧浓度 )处理后 ,ELISA法检测转染细胞TNF α表达水平。通过细胞剂量存活曲线及其参数D0 值 ,计算氧增比 (OER)及增敏比 (SER)。建立裸鼠A5 4 9皮下移植瘤模型 ,计算 5 0 %肿瘤控制所需照射剂量 (TCD50 )及SER。结果　HREs可使缺氧下转染细胞照射后的TNF α表达水平较常氧条件下增加到 3.4倍 ,且转染组D0 (1 .341Gy)和OER(0 .81 )均显著低于对照组 (6 .1 72Gy ,2 .6 5 ) ,SER(4 .6 0 )则显著升高 (P 缺氧 /辐射双敏感性HRE Egr启动子及其调控的TNF α表达载体 ,该载体转染的A5 4 9细胞及其移植瘤 ,均有显著的放射乏氧增敏作用。

关键词：肺肿瘤放射—基因治疗缺氧反应元件

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缺氧反应元件同肿瘤治疗的研究进展

河北医药 2011年第23期33卷 3630-3632页

作者：王宝山杨建旺张继华河北医科大学石家庄市050017 河北医科大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科

研究表明，在肿瘤适应低氧过程中缺氧诱导因子（HIF）起着中枢纽带作用，HIF是肿瘤适应低氧，产生一系列低氧行为的中心环节，而最近研究发现，缺氧反应元件（hypoxia response elements，HRE）是介导细胞低氧反应的重要调控序列，HRE... 详细信息

研究表明，在肿瘤适应低氧过程中缺氧诱导因子（HIF）起着中枢纽带作用，HIF是肿瘤适应低氧，产生一系列低氧行为的中心环节，而最近研究发现，缺氧反应元件（hypoxia response elements，HRE）是介导细胞低氧反应的重要调控序列，HRE是一种缺氧敏感诱导性调控元件，在实体瘤内的活性较高，在肿瘤细胞生长、浸润及转移等过程中发挥着重要的作用。

关键词：缺氧反应元件肿瘤

缺氧/辐射双敏感性启动子调控HSV-TK表达对肺癌移植瘤的作用

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癌症 2004年第7期23卷 788-793页

作者：王卫东陈正堂李德志段玉忠王志新曹正怀第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤中心重庆400037

背景与目的放射-基因治疗是近年来国际上肿瘤治疗的新策略,由于实体瘤常处于缺氧状态而对放射敏感性低,放射-基因治疗尚未达理想疗效。本研究拟构建缺氧/辐射双敏感性启动子,增强缺氧条件下放射诱导的HSV-TK表达水平,提高肺癌放射-基因... 详细信息

背景与目的放射-基因治疗是近年来国际上肿瘤治疗的新策略,由于实体瘤常处于缺氧状态而对放射敏感性低,放射-基因治疗尚未达理想疗效。本研究拟构建缺氧/辐射双敏感性启动子,增强缺氧条件下放射诱导的HSV-TK表达水平,提高肺癌放射-基因治疗效果。方法利用基因重组构建HRE-Egr启动子及其调控的HSV-TK表达载体;脂质体介导重组质粒转染肺癌A549细胞,分为对照组、放射组(6Gy)、缺氧组(1%氧浓度)和放射合并缺氧组,Northernblot法检测转染细胞中HSV-TK表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测放射、缺氧和GCV处理后的细胞存活率。建立BALB/c裸鼠肺癌移植瘤模型,检测放射合并质粒转染后移植瘤体积变化并计算抑瘤率。结果对照组细胞仅可检测到HyTK的低水平表达(21U),放射组和缺氧组HyTK基因表达水平均显著升高(分别为227U和94U),放射合并缺氧组(769U)显著高于放射组。在缺氧条件下,放射合并GCV处理后细胞存活率为(7.2±1.8)%,显著低于常氧组的(32.7±4.6)%。放射联合GCV可明显抑制HRE-Egr启动子转染肺癌移植瘤,抑瘤率达91.2%。结论HRE-Egr启动子具有辐射/缺氧双重敏感性,并使放射后的HSV-TK表达水平在缺氧下得到显著增强。放射联合HRE-Egr启动子可显著抑制肺癌移植瘤的生长。

关键词：肺肿瘤放射-基因治疗缺氧反应元件

5HRE和CEAp联合调控的TSST-1激活淋巴细胞特异杀伤CEA阳性肿瘤细胞

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第6期26卷 525-529页

作者：田勇孙学军王炜王伟西安交通大学医学院第一附属医院普通外科陕西西安710061

目的:研究5拷贝缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(CEAp)联合调控的超抗原中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)在缺氧环境下激活淋巴细胞对CEA阳性的结肠癌细胞株LoVo的杀伤作用。方法:用5HRE和CEAp构成基因表达调控元件,构建出以... 详细信息

目的:研究5拷贝缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(CEAp)联合调控的超抗原中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)在缺氧环境下激活淋巴细胞对CEA阳性的结肠癌细胞株LoVo的杀伤作用。方法:用5HRE和CEAp构成基因表达调控元件,构建出以该元件调控跨膜型超抗原TSST-1-linker-CD80TM(TC)基因靶向表达的真核表达载体。用该载体转染CEA阳性的人结肠癌细胞株LoVo及CEA阴性的人宫颈癌细胞株HeLa,利用G418筛选稳定转染的细胞。用RT-PCR检测TC融合基因的表达。分离健康人外周血淋巴细胞(PBL),用稳定转染TC的细胞裂解物进行PBL刺激实验;将PBL与稳定转染的细胞共培养,行淋巴细胞杀伤实验;MTT法检测TSST-1促PBL增殖和PBL对稳定转染细胞的杀伤效应。结果:成功筛选出稳定转染目的基因的单克隆LoVo细胞和HeLa细胞。RT-PCR证实单克隆LoVo细胞中TC在mRNA水平的表达,且缺氧环境中的表达量更高;单克隆HeLa细胞在常氧和缺氧条件下均无TC的表达。MTT法检测发现,缺氧环境下单克隆LoVo细胞表达的TSST-1能有效激活人PBL增殖,PBL剂量依赖性的抑制表达TSST-1的LoVo细胞的生长(P缺氧环境下可激活人PBL特异杀伤CEA阳性肿瘤细胞。

关键词：缺氧反应元件癌胚抗原超抗原 CEA阳性肿瘤免疫基因治疗

HRE1.Egr-1.yCDglyTK融合自杀基因前药系统对鼻咽癌放射增敏作用的体外实验

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中南大学学报（医学版） 2008年第2期33卷 110-114页

作者：钟宇唐瑶云谢常宁赵素萍中南大学湘雅医院耳鼻喉科长沙410008

目的:构建缺氧/辐射双敏感性启动子HRE1.Egr-1,观察其在缺氧或放射诱导下调控yCDglyTK基因在鼻咽癌HNE-1细胞表达及yCDglyTK/5-FC对鼻咽癌HNE-1细胞杀伤效应,为探索新的鼻咽癌基因-放射治疗奠定实验基础。方法:利用基因重组技术构建嵌... 详细信息

目的:构建缺氧/辐射双敏感性启动子HRE1.Egr-1,观察其在缺氧或放射诱导下调控yCDglyTK基因在鼻咽癌HNE-1细胞表达及yCDglyTK/5-FC对鼻咽癌HNE-1细胞杀伤效应,为探索新的鼻咽癌基因-放射治疗奠定实验基础。方法:利用基因重组技术构建嵌合启动子HRE1.Egr-1调控yCDg-lyTK基因表达的质粒载体;脂质体介导重组质粒转染鼻咽癌HNE-1细胞,建立稳定表达yCDglyTK基因的鼻咽癌HNE-1转染细胞;免疫印迹法检测在常氧、放射、乏氧、乏氧加放射等不同条件下HNE1细胞中yCDglyTK表达的强度;MTT法检测加入5-FC后对上述不同条件下稳定转染细胞的杀伤效应。结果:各组蛋白表达均有差别(P<0.01),以乏氧/放射处理最为明显;5-FC对各种条件干预下的细胞均有杀伤效应,其中以乏氧/放射处理最为明显(P<0.01)。结论:HRE1.Egr-1嵌合启动子具有放射和乏氧诱导的双重特性,可以显著增强yCDglyTK/5-FC系统在乏氧和放射干预下对鼻咽癌HNE-1细胞的杀伤效应,为鼻咽癌的基因-放射治疗开辟了新思路。

关键词：鼻咽癌缺氧反应元件乏氧基因-放射治疗

HRE增强hTERT启动子-tk/GCV基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的杀伤作用

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吉林大学学报（医学版） 2010年第1期36卷 14-19,F0002页

作者：胡薇艾永兴郑梅竹张玉静吉林农业大学生命科学学院生物化学教研室吉林长春130118 吉林大学人兽共患病研究所吉林长春130062

目的:探讨缺氧反应元件(HRE)增强hTERT启动子-tk/GCV逆转录病毒基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法:构建由HRE缺氧反应元件修饰的hTERT杂合启动子和hTERT单一启动子引导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因表达的重组逆转录... 详细信息

目的:探讨缺氧反应元件(HRE)增强hTERT启动子-tk/GCV逆转录病毒基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法:构建由HRE缺氧反应元件修饰的hTERT杂合启动子和hTERT单一启动子引导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因表达的重组逆转录病毒载体,在脂质体介导下分别转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆。将重组病毒感染人肺癌细胞SPC-A1和人肝癌细胞Bel-7402,G418筛选出抗性克隆肿瘤细胞。实验分为对照组、SPC-A1/tk组和Bel-7402/tk组。在缺氧处理条件下,MTT法检测前体药物丙氧鸟苷(GCV)对SPC-A1/tk和Bel-7402/tk细胞的杀伤效应,流式细胞仪检测其细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果:与对照组比较,缺氧环境培养的SPC-A1/tk和Bel-7402/tk细胞对GCV的敏感性明显增强,其中细胞凋亡率明显升高(P缺氧环境中肿瘤细胞的体外杀伤作用。

关键词：肿瘤 hTERT启动子缺氧反应元件 HSV—tk基因缺氧

以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒载体的构建及鉴定

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南方医科大学学报 2007年第12期27卷 1834-1837页

作者：石秦东张蓬勃康前雁陈新林田玉梅刘建新刘勇西安交通大学医学院神经生物学研究所西安交通大学医学院第一附属医院中心ICU陕西西安710061 第二附属医院麻醉科陕西西安710004

目的构建以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒载体,并对其进行鉴定。方法以pEGFP-N1质粒为模板,PCR法扩增获得EGFP基因片段,并将其亚克隆入PGL3-promoter质粒骨架,得到以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒pEGFP-enhancer。人工合成不同拷贝... 详细信息

目的构建以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒载体,并对其进行鉴定。方法以pEGFP-N1质粒为模板,PCR法扩增获得EGFP基因片段,并将其亚克隆入PGL3-promoter质粒骨架,得到以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒pEGFP-enhancer。人工合成不同拷贝的缺氧反应元件(HRE)增强子序列,插入到pEGFP-enhancer多克隆位点获得重组质粒pEGFP-HRE、pEGFP-5HR,以脂质体Lipofectamine 2000转染Hela细胞,常氧与缺氧处理后以荧光显微镜及流式细胞仪观察EGFP荧光表达。结果构建的不同拷贝HRE的增强子鉴定质粒pEGFP-HRE、pEGFP-5HRE转染Hela细胞后,常氧处理绿色荧光表达无差异,缺氧处理后随HRE拷贝数增加绿色荧光表达强度增加。结论成功构建了增强子表达质粒pEGFP-enhancer,通过EGFP的表达强度可以反应增强子活性。

关键词：增强子绿色荧光蛋白载体缺氧反应元件 Hela细胞

缺氧对HRE-TK/GCV系统杀伤骨肉瘤细胞的增强作用

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中国肿瘤临床 2005年第2期32卷 68-72页

作者：王燕丘钜世乔慧汪睿彭挺生李扬 EG Van Meir 昆明医学院第二附属医院病理科中山大学中山医学院病理学教研室中国人民解放军第533医院美国亚特兰大Emory大学Winship癌症学院神经外科分子神经肿瘤学实验室

目的:探讨缺氧条件下,缺氧反应元件启动子-胸苷激酶/丙氧鸟苷(HRE-TK/GCV)系统对骨肉瘤细胞系MG63靶向性杀伤作用。方法:构建由HRE启动子驱动的含潮霉素磷酸转移酶-单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(Hygromycinphosphotransferase-thymidinekin... 详细信息

目的:探讨缺氧条件下,缺氧反应元件启动子-胸苷激酶/丙氧鸟苷(HRE-TK/GCV)系统对骨肉瘤细胞系MG63靶向性杀伤作用。方法:构建由HRE启动子驱动的含潮霉素磷酸转移酶-单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(Hygromycinphosphotransferase-thymidinekinase,HyTK)融合基因的真核表达质粒pBI-HRE-HyTK,并将其转染入骨肉瘤细胞系MG63。应用PCR和RT-PCR方法检测TK基因的整合及表达;用MTT法和混合共培养实验分别检测转基因细胞在缺氧或不缺氧状态下对GCV的敏感性以及HRE-TK/GCV系统的“旁观者效应”;流式细胞仪检测细胞周期改变及电镜观察细胞超微结构变化探讨其作用机制。结果:成功构建了真核表达质粒pBI-HRE-HyTK,得到转基因细胞系MG63TK。检测到MG63TK细胞内TK基因的DNA和mRNA。MG63TK细胞在不缺氧状态下对GCV不敏感,当GCV浓度达50μg/ml时,仅30%左右细胞被杀死;而缺氧状态下,GCV浓度1μg/ml时,50%左右细胞被杀死,GCV浓度50μg/ml时,90%以上细胞被杀死。混合共培养实验中,缺氧状态下,HRE-TK/GCV系统旁观者效应明显增强,MG63细胞存活率显著低于不缺氧状态下。缺氧和GCV共同作用使转基因细胞DNA合成抑制,细胞周期阻滞于G0G1期,细胞发生凋亡和坏死。结论:缺氧可以增强HRE-TK/GCV系统对体外培养骨肉瘤细胞系选择性的杀伤作用?

关键词：缺氧缺氧反应元件胸苷激酶骨肉瘤细胞