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基于Nrf2/ARE信号通路研究绞股蓝皂苷ⅹⅶ抗脑缺血/再灌注机制

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中华危重病急救医学 2023年第3期35卷 293-298页

作者：王文杰徐煜彬徐珊珊毛玲群台州市中心医院(台州学院附属医院)神经内科浙江台州318000 台州市中心医院(台州学院附属医院)药剂科浙江台州318000

目的:探讨绞股蓝皂苷ⅹⅶ调控核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路抗脑缺血/再灌注(I/R)的机制。方法:将40只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、I/R模型组及25、50和100 mg/kg绞股蓝皂苷ⅹⅶ组,每组8只。绞股蓝皂苷ⅹⅶ组... 详细信息

目的:探讨绞股蓝皂苷ⅹⅶ调控核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路抗脑缺血/再灌注(I/R)的机制。方法:将40只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、I/R模型组及25、50和100 mg/kg绞股蓝皂苷ⅹⅶ组,每组8只。绞股蓝皂苷ⅹⅶ组分别给予绞股蓝皂苷ⅹⅶ 25、50、100 mg/kg灌胃(灌胃量0.01 mL/g),连续给药14 d;其余两组给予相同剂量生理盐水灌胃。然后采用改良线栓法制备大鼠脑I/R模型;假手术组大鼠采用相同方法手术,但不产生实质性栓塞。再灌注后24 h,评估各组大鼠神经功能缺损评分;采集大鼠腹主动脉全血检测血清活性氧(ROS)、血红素加氧酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、超氧化物歧化酶(SOD)、醌NADH氧化还原酶1(NQO1)、丙二醛(MDA)水平;随后取完整大脑组织并分离大脑皮质脑梗死周围半暗带组织,观察大鼠脑组织大体情况及脑梗死体积,光镜下观察脑组织病理学变化,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA表达,采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的蛋白表达。结果:再灌注后24 h,与假手术组比较,I/R模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高,脑组织梗死体积明显增大,血清NQO1、SOD和γ-GCS水平均明显降低、血清MDA、HO-1和ROS水平均明显升高,脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA及蛋白表达均明显升高。与I/R模型组比较,50 mg/kg与100 mg/kg绞股蓝皂苷ⅹⅶ能明显降低脑I/R大鼠的神经功能缺损评分(分:1.50±0.53、1.37±0.52比2.75±0.46),缩小脑组织梗死体积〔(19.8±5.1)%、(21.4±6.4)%比(42.3±5.8)%〕,明显提高血清NQO1、SOD、HO-1和γ-GCS水平〔NQO1(ng/L):186.05±10.38、220.75±16.22比131.36±5.95,SOD(kU/L):63.23±5.30、72.70±8.62比36.75±6.55,HO-1(ng/L):60.57±7.93、60.35±4.72比42.72±4.95,γ-GCS(kU/L):8.81±0.53、8.72±0.69比6.80±0.56〕,明显降低血清MDA和ROS水平〔MDA(μmol/L):5.94±0.66、5.61±0.53比10.88±1.34,ROS(kU/L):69.11±4.23、67.12±4.52比104.43±7.54〕,同时可明显提高脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA及蛋白表达〔Nrf2 mRNA(2^(-△△Ct)):1.90±0.13、2.13±0.18比1.48±0.11,Keap1 mRNA(2^(-△△Ct)):1.78±0.11、1.85±0.10比1.43±0.10,Nrf2/β-actin:0.73±0.04、0.79±0.03比0.60±0.03,Keap1/β-actin:0.71±0.01、0.76±0.03比0.61±0.01〕,比较差异均有统计学意义(均 P绞股蓝皂苷ⅹⅶ无明显作用。结论:绞股蓝皂苷ⅹⅶ (50 mg/kg和100 mg/kg)可能通过Nrf2/ARE信号通路调节NQO1、SOD、HO-1、γ-GCS、ROS及MDA起到抗脑I/R损伤的作用。

关键词：绞股蓝皂苷ⅹⅶ 脑缺血/再灌注 Nrf2/ARE信号通路氧化应激

绞股蓝皂苷ⅹⅶ对急性脊髓损伤大鼠的神经保护及细胞凋亡的影响

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福建医药杂志 2023年第4期45卷 125-126,179页

作者：涂少臣厦门大学附属福州第二医院骨科福州350007

目的探讨绞股蓝皂苷ⅹⅶ对急性脊髓损伤大鼠的神经保护及细胞凋亡的影响。方法采用Allen法构建急性脊髓损伤大鼠,分为A组(假手术组)、B组(SCI模型组)、C组(SCI+低剂量组)、D组(SCI+中剂量组)、E组(SCI+高剂量组),每组15只。采用BBB评... 详细信息

目的探讨绞股蓝皂苷ⅹⅶ对急性脊髓损伤大鼠的神经保护及细胞凋亡的影响。方法采用Allen法构建急性脊髓损伤大鼠,分为A组(假手术组)、B组(SCI模型组)、C组(SCI+低剂量组)、D组(SCI+中剂量组)、E组(SCI+高剂量组),每组15只。采用BBB评分标准评价大鼠后肢运动功能恢复情况,HE染色观察脊髓组织病变情况,TUNEL和Neun共染色观察神经细胞凋亡情况。结果造模组较假手术组后肢运动评分下降(P绞股蓝皂苷ⅹⅶ组BBB评分均要高于模型组,差异有统计学意义(P绞股蓝皂苷ⅹⅶ组的病变面积较模型组减少(P绞股蓝皂苷ⅹⅶ有助于改善急性脊髓损伤大鼠的修复。

关键词：脊髓损伤绞股蓝皂苷ⅹⅶ 神经保护细胞凋亡

基于HPLC-QAMS法同时测定清肺散结丸中阿克苷、苦玄参苷ⅠB、苦玄参苷ⅠA、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅹⅶ的含量

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中国药师 2020年第12期23卷 2461-2466页

作者：周颖王世轩谢明辽宁中医药大学附属医院药学部沈阳110032 辽宁中医药大学

目的:建立高效液相一测多评法同时测定清肺散结丸中阿克苷、苦玄参苷ⅠB、苦玄参苷ⅠA、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷ⅩLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅹⅶ的含量。方法:采用高效液相一测多评法,以Welch Material C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为... 详细信息

目的:建立高效液相一测多评法同时测定清肺散结丸中阿克苷、苦玄参苷ⅠB、苦玄参苷ⅠA、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷ⅩLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅹⅶ的含量。方法:采用高效液相一测多评法,以Welch Material C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,柱温:25℃;流动相为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.9 ml·min-1;检测波长分别为264 nm(检测阿克苷、苦玄参苷ⅠB和苦玄参苷ⅠA)和203 nm(检测三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅹⅶ)。以苦玄参苷ⅠA为内参物,建立其与阿克苷、苦玄参苷ⅠB、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅹⅶ的相对校正因子,计算各成分含量。结果:阿克苷、苦玄参苷ⅠB、苦玄参苷ⅠA、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅹⅶ分别在1.87~46.75μg·ml-1(r=0.9991)、2.03~50.75μg·ml-1(r=0.9997)、1.06~26.50μg·ml-1(r=0.9993)、0.97~24.25μg·ml-1(r=0.9996)、0.81~20.25μg·ml-1(r=0.9991)、1.39~34.75μg·ml-1(r=0.9997)、2.26~56.50μg·ml-1(r=0.9995)范围内线性关系良好;平均加样回收率(RSD)分别为98.83%(0.97%),100.11%(0.62%),97.92%(1.38%),96.96%(1.40%),97.74%(1.18%),99.15%(0.89%)和99.36%(1.01%)(n=9);一测多评法的计算值与外标法(ESM)测定值间无明显差异。结论:所建立的HPLC-QAMS法结果准确,可用于清肺散结丸的质量控制。

关键词：高效液相一测多评法清肺散结丸阿克苷苦玄参苷ⅠB 苦玄参苷ⅠA 三七皂苷R1 绞股蓝皂苷XLⅨ 绞股蓝皂苷A 绞股蓝皂苷ⅹⅶ

绞股蓝皂苷对人肝癌和七叶胆苷ⅩⅦ对宫颈癌细胞体外抗癌活性及其机理

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绞股蓝皂苷对人肝癌和七叶胆苷ⅩⅦ对宫颈癌细胞体外抗癌活性及其...

作者： Sayed Sajid Hussain 合肥工业大学

学位级别：硕士

绞股蓝Gynostemma pentaphyllum富含多种营养成分,具有多种功能,例如治疗血尿、咽和颈部水肿、抗肿瘤等。天然产物的结构不同,它们表现出不同的抗菌和抗肿瘤机制。本论文中,我们调查了绞股蓝皂苷对人肝癌细胞Hep G2、绞股蓝皂苷ⅹⅶ对... 详细信息

绞股蓝Gynostemma pentaphyllum富含多种营养成分,具有多种功能,例如治疗血尿、咽和颈部水肿、抗肿瘤等。天然产物的结构不同,它们表现出不同的抗菌和抗肿瘤机制。本论文中,我们调查了绞股蓝皂苷对人肝癌细胞Hep G2、绞股蓝皂苷ⅹⅶ对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用,并进一步研究了其分子机制。主要研究结果如下:（1）绞股蓝皂苷对人肝癌细胞Hep G2的抑制作用及其分子机制。在细胞存活率、细胞周期和诱导Hep G2癌细胞凋亡的基础上,评估了Stevenleaf（SV）的抗癌活性。SV处理诱导Hep G2停滞在G0/G1期,24h和48h的IC50值分别139.82μM和119.12μM;SV处理诱导诱导细胞凋亡并增强细胞内ROS的产生。对于细胞周期相关基因,SV上调p21、p-27、p-53的m RNA表达,下调Cyclin-A、Cyclin D1、Cyclin-E和CDK1/2。SV有效促进细胞受体相关TNF-R1、TRADD1和FADD的表达、下调Caspase-8基因的表达;SV处理后,线粒体途径的Bax、Bak、Cyt c、Apaf1、Caspase 3和Caspase9基因表达量上调,Bcl2、Bcl-xl和Bad基因的表达量下调。SV通过Akt和AMPK激活在Hep G2细胞中诱导m TOR介导的细胞凋亡。（2）绞股蓝皂苷ⅹⅶ对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用及其分子机制。MTT法用于评估gypenoside ⅩⅦ对Hela细胞的抑制作用,通过Hoechst 33342染色和Annexin V-PI染色鉴定凋亡细胞死亡和凋亡,细胞周期分析用于鉴定细胞四个阶段（G0/G1,S和G2/M期）中的细胞比例。gypenoside ⅩⅦ处理后,细胞的抑制作用随浓度的增加而增加,细胞明显凋亡。与正常细胞相比,G0/G1期的细胞比例增加,而S和G2/M期的细胞比例降低。此外,gypenoside ⅩⅦ处理有效调控死亡受体途径和线粒体途径的基因表达。通过Caspase-8和caspase-9蛋白抑制剂的作用,进一步证明了gypenoside ⅩⅦ诱导Hela细胞的凋亡。上述结果表明绞股蓝皂苷和绞股蓝皂苷ⅹⅶ对癌症细胞具有显著的抑制作用,具有进一步开发为抗癌药或功能性食品的价值。

关键词：绞股蓝皂苷(SV) 绞股蓝皂苷ⅹⅶ Hep G2细胞 Hela细胞凋亡

HPLC梯度洗脱法同时测定通脉降糖胶囊中7种成分含量

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中国现代中药 2020年第6期22卷 927-933页

作者：杨滨王海乐华北石油二部医院中医科河北任丘062552 湖南省药品检验研究院湖南长沙410001

目的:建立HPLC梯度洗脱法同时测定通脉降糖胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、芒柄花素、太子参环肽B、绞股蓝皂苷XLIX、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅹⅶ含量的含量。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5... 详细信息

目的:建立HPLC梯度洗脱法同时测定通脉降糖胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、芒柄花素、太子参环肽B、绞股蓝皂苷XLIX、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅹⅶ含量的含量。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温25℃;流动相:乙腈-0.3%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min^-1;检测波长分别为260 nm(检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和芒柄花素)和203 nm(检测太子参环肽B、绞股蓝皂苷XLIX、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅹⅶ)。结果:毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、芒柄花素、太子参环肽B、绞股蓝皂苷XLIX、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅹⅶ分别在3.76~94.00、2.19~54.75、5.12~128.00、0.86~21.50、7.98~199.50、8.59~214.75、11.96~299.00μg·mL-1线性关系良好(r≥0.9992),平均加样回收率分别为99.50%、97.97%、98.87%、96.93%、100.00%、99.03%和98.94%,RSD分别为0.87%、1.55%、1.04%、1.18%、0.73%、1.49%和0.90%。结论:该方法操作便捷、重复性好,可用于通脉降糖胶囊中多指标性成分的质量控制。

关键词：通脉降糖胶囊梯度洗脱法毛蕊异黄酮葡萄糖苷芒柄花苷芒柄花素太子参环肽B 绞股蓝皂苷XLIX 绞股蓝皂苷A 绞股蓝皂苷ⅹⅶ