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基于RNA-seq不明原因复发性流产绒毛组织mRNA基因差异性表达研究

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国际妇产科学杂志 2024年第3期51卷 322-328,341页

作者：杨丽杨静叶尔登切切克韩锐腊晓琳新疆医科大学第一附属医院生殖医学中心乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院生殖疾病与出生缺陷综合防治研究中心乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院新疆生殖免疫临床医学研究中心乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学第五附属医院妇科

目的:构建不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)孕妇绒毛组织的mRNA差异性表达谱并进行功能分析,为阐明URSA的发生发展机制提供依据。方法:收集2022年3月于新疆医科大学第一附属医院妇科门诊收治的4例U... 详细信息

目的:构建不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)孕妇绒毛组织的mRNA差异性表达谱并进行功能分析,为阐明URSA的发生发展机制提供依据。方法:收集2022年3月于新疆医科大学第一附属医院妇科门诊收治的4例URSA(试验组)和4例选择性终止妊娠孕妇(对照组)的绒毛组织样本。应用转录组测序技术(RNA-seq)筛选2组差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并对其进行GO功能注释、KEGG通路分析及蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析,进一步研究差异表达mRNA的功能,并筛选出URSA的关键基因。结果:RNA-seq分析共筛选出3350个DEGs,其中上调基因2259个,下调基因1091个。通过PPI网络分析,筛选出与URSA有关的前10个关键基因:TYROBP、CD74、GH1、GH2、STAT5A、HLA-DRA、STAT5B、HLA-DRB1、CISH和HLA-A。通过GO和KEGG生物学功能分析,发现差异性表达的mRNA参与到多种白细胞分化相关免疫反应通路和同种异体免疫应答等生物学过程。结论:利用RNA-seq获得的URSA的mRNA差异性表达谱,筛选出可能与URSA有关的关键基因及生物学通路,为进一步研究URSA的发病机制和诊疗靶点提供了理论依据。

关键词：流产,习惯性绒毛组织 RNA,信使转录组测序免疫调节

HBsAg阳性孕妇早期流产绒毛组织中HBV标志物检测及风险因素研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2019年第2期33卷 182-186页

作者：彭婷婷王淼陈凤喻宏杨敏黄华鑫崔璐蔡秋娥王强苟继周孙炎陈楚明刘映霞南华大学衡阳421000 深圳市第三人民医院感染病国家重点专科518112

目的通过检测乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性孕妇早期流产的绒毛组织中与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关的指标,评估妊娠早期宫内感染的发生情况及可能的影响因素。方法以45例HBsAg阳性孕妇早... 详细信息

目的通过检测乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性孕妇早期流产的绒毛组织中与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关的指标,评估妊娠早期宫内感染的发生情况及可能的影响因素。方法以45例HBsAg阳性孕妇早期流产的绒毛组织和血液标本为研究对象,应用荧光定量qRT-PCR方法,对HBV DNA进行测定,并与血液中HBV DNA的检测结果进行比较分析;应用免疫组化技术对绒毛组织中Glial Cell Missing-1(GCM1)、HBsAg、HBcAg进行检测。结果qRT-PCR检测结果显示,45份绒毛组织中有14份样本HBV DNA呈阳性,阳性率为31.11%;血液检查结果中有24份样本呈阳性,阳性率为53.33%,进一步统计分析的结果表明血液和绒毛组织的HBV DNA阳性率间无显著性差异(χ^2=4.555,P=0.054)。其中,有12份绒毛组织样本与血液样本阳性结果相符合,且这部分孕妇外周血的HBsAg、HBeAg、HBeAb和HBV DNA水平均显著高于其他孕妇(P值分别为0.007、0.004、0.000、0.000)。多因素logistic回归分析表明血液HBV DNA大于10^6 IU/ml与绒毛组织HBV DNA阳性独立相关,且这部分孕妇的HBsAg、HBeAg、绒毛组织HBV DNA阳性率均显著高于其他孕妇(P值均为0.000)。免疫组化结果表明,45份绒毛组织的胞核均表达其特异性抗体GCM1;有9份绒毛组织的胞浆表达HBsAg;只有1份绒毛组织的胞核表达HBcAg。结论HBsAg阳性孕妇早期流产的绒毛组织中可检测到HBV DNA、HBsAg的表达,提示胎儿,尤其是高病毒载量母亲所怀的胎儿早期存在发生宫内感染的可能。

关键词：肝炎病毒,乙型绒毛组织 qRT-PCR 免疫组化宫内感染

稽留流产绒毛组织中APPL1,Nrf2和HO-1的水平表达与氧化应激的相关性研究

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现代检验医学杂志 2022年第5期37卷 33-38页

作者：李慧敏杨琳陕西省核工业二一五医院产科陕西咸阳712000

目的探讨稽留流产绒毛组织中蛋白亮氨酸拉链基序1(leucine zipper motif 1,APPL1)、核因子E2相关因子2(Nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和血红素加氧酶1(haem oxygenase 1,HO-1)的水平表达与氧化应激的相关性。方法取46例稽留流产并行人流术治疗者为实验组,取50例同期正常早孕并行人工流产术者为对照组,收集两组绒毛组织标本,用放射免疫沉淀法裂解缓冲液(radio immunopreci pitation assay lysis buffer,RIPA)提取绒毛组织蛋白。用免疫组织化学法检测绒毛组织中APPL1,Nrf2和HO-1蛋白表达;用Western blot检测绒毛组织中APPL1,Nrf2和HO-1蛋白水平;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定绒毛组织中氧化应激指标[超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)]水平。Pearson检验分析实验组绒毛组织中APPL1,Nrf2和HO-1蛋白水平与氧化应激指标水平的相关性。结果实验组绒毛组织中APPL1,Nrf2和HO-1表达阳性率分别为21.7%,32.6%和26.1%,明显低于对照组的56.0%,64.0%,58.0%,差异均有统计学意义(χ^(2)=9.442~11.759,均P绒毛组织中APPL1(1.3±0.1),Nrf2(0.7±0.1)和HO-1(1.1±0.1)蛋白表达水平明显低于对照组(1.6±0.2,1.1±0.0.1,1.4±0.1),差异有统计学意义(t=9.171~19.579,均P绒毛组织中ROS(8.4±1.5U/ml),MDA(11.7±2.3nmol/ml)水平明显高于对照组(3.6±0.5U/ml,5.6±0.8nmol/ml),SOD(23.9±6.8U/ml)水平明显低于对照组(28.1±6.6U/ml),差异均有统计学意义(t=3.070~21.381,均P绒毛组织中APPL1,Nrf2和HO-1蛋白表达与ROS水平呈负相关(r=-0.628,-0.510,-0.575,均P绒毛组织中呈低表达,且与氧化应激指标ROS,MDA和SOD水平具有显著相关性,其三者异常表达可能通过介导氧化应激失衡进而诱导了稽留流产的发生。

关键词：稽留流产蛋白亮氨酸拉链基序1 核因子E2相关因子血红素加氧酶1 绒毛组织氧化应激

通过CNV-seq检测绒毛组织染色体畸变诊断稽留流产的价值分析

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当代医药论丛 2023年第2期21卷 129-132页

作者：谭满胜谢清丰唐玉芬陈红玲茂名市妇幼保健院遗传优生优育科广东茂名525000 茂名市人民医院检验科广东茂名525000

目的:探讨CNV-seq检测绒毛组织染色体畸变对稽留流产的诊断价值。方法:对2019年1月至2021年3月就诊于茂名市妇幼保健院并采用CNV-seq检测绒毛组织染色体畸变的175例稽留流产患者的临床资料进行回顾性分析,记录其CNV-seq检测结果,并分析C... 详细信息

目的:探讨CNV-seq检测绒毛组织染色体畸变对稽留流产的诊断价值。方法:对2019年1月至2021年3月就诊于茂名市妇幼保健院并采用CNV-seq检测绒毛组织染色体畸变的175例稽留流产患者的临床资料进行回顾性分析,记录其CNV-seq检测结果,并分析CNV-seq检测的诊断价值。结果:175例患者中,成功检测173例,失败2例,检测成功率为98.86%,检测出染色体畸变108例,阳性检出率为62.43%;在染色体畸变中,阳性数目异常共91例,其中包括特纳综合征6例,同源二倍体6例,三倍体15例,2-三体2例,3-三体5例,22-三体10例等。其他异常共17例,其中包括复合异常/嵌合类8例,占7.41%(8/108);缺失类/重复类9例,占8.33%(9/108)。结论:CNV-seq检测稽留流产的绒毛组织染色体畸变,可较深入全面地分析染色体异常与稽留流产的关系,具有较好的诊断价值。

关键词： CNV-seq检测绒毛组织染色体畸变稽留流产

NgBR、VEGF和P-Akt在早期妊娠丢失绒毛组织中的作用及相互关系

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NgBR、VEGF和P-Akt在早期妊娠丢失绒毛组织中的作用及相互关系

作者：郭烨山西医科大学

学位级别：硕士

目的:本次研究将对早期妊娠丢失患者的绒毛组织进行检测,从而描述Ng BR、VEGF和P-Akt的表达情况,并进一步分析它们在早期妊娠丢失的过程中可能发挥的作用,以及探讨它们之间的关联,为早期妊娠胚胎的血管形成提供一定的理论基础。方法:1.... 详细信息

目的:本次研究将对早期妊娠丢失患者的绒毛组织进行检测,从而描述Ng BR、VEGF和P-Akt的表达情况,并进一步分析它们在早期妊娠丢失的过程中可能发挥的作用,以及探讨它们之间的关联,为早期妊娠胚胎的血管形成提供一定的理论基础。方法:1.研究对象来自2020年7月到12月在我院进行人工流产术的患者,根据其流产原因将患者分为早期妊娠丢失的病例组与自愿终止妊娠的对照组,两组人数各25例;2.使用免疫组织化学方法SP法检测病例组和对照组绒毛组织中Ng BR、VEGF和P-Akt蛋白的表达情况;3.使用RT-PCR法检测病例组和对照组绒毛组织中Ng BR、VEGF和P-Akt的表达水平;4.统计方法描述:对Ng BR、VEGF和P-Akt的蛋白表达与m RNA表达采用均数和标准差进行描述,并采用t检验进行组间比较。指数分布的数据采用对数转换后再进行进一步分析。采用Pearson相关进行相关性检验,并根据相关系数的大小对其相关强度进行描述。在上述检验中检验水准α均被设置为0.05,统计软件为SPSS 24.0。结果:1.免疫组化SP检测结果绒毛组织的Ng BR蛋白主要表达在细胞质以及细胞膜中,经检验发现该蛋白在病例组的染色得分低于对照组(2.06±0.67 VS 4.78±0.79,P绒毛组织的VEGF蛋白主要表达在细胞质以及细胞膜中,经检验发现该蛋白在病例组的染色得分低于对照组(1.79±0.57 VS 4.64±0.82,P绒毛组织的P-Akt蛋白主要表达在细胞质中,经检验发现该蛋白在病例组的染色得分低于对照组(1.68±0.59 VS4.64±0.96),P绒毛组织中Ng BR m RNA的相对表达量更低(病例组为1.48±1.35,对照组为2.75±1.78,P绒毛组织中VEGF m RNA的相对表达量更低,(病例组为1.67±1.35,对照组为2.59±1.97,P绒毛组织中P-Akt m RNA的相对表达量更低,(病例组为1.56±1.18,对照组为2.85±1.09,P绒毛组织中均有Ng BR、VEGF和P-Akt蛋白的表达;2.病例组的绒毛组织中Ng BR、VEGF和P-Akt m RNA的蛋白表达和m RNA表达均低于对照组;3.病例组的绒毛组织中Ng BR、VEGF和P-Akt m RNA表达呈正相关,这说明三者的低表达共同参与了早期妊娠丢失的发病过程。

关键词：早期妊娠丢失绒毛组织轴突生长抑制因子受体血管内皮生长因子磷酸化蛋白激酶B

早期胚胎停止发育绒毛组织mRNA m6A甲基化修饰及表达谱研究

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早期胚胎停止发育绒毛组织mRNA m6A甲基化修饰及表达谱研究

作者：黄娜娜郑州大学

学位级别：硕士

背景妊娠早期胚胎停止发育是一种常见的病理性妊娠,属于自然流产(Spontaneous abortion,SA)的一种特殊形式。普遍的临床观点认为,SA是由一系列亚临床疾病(解剖异常、内分泌改变、血栓形成、潜伏感染和免疫失调等)引起,处于“脆弱”的早... 详细信息

背景妊娠早期胚胎停止发育是一种常见的病理性妊娠,属于自然流产(Spontaneous abortion,SA)的一种特殊形式。普遍的临床观点认为,SA是由一系列亚临床疾病(解剖异常、内分泌改变、血栓形成、潜伏感染和免疫失调等)引起,处于“脆弱”的早孕状态,从而流产。除此之外仍有约一半的复发性流产(Recurrent spontaneous abortion,RSA)未查明原因,病因缺乏相关信息无疑限制了孕前指导及治疗。已有研究表明表观遗传学改变在胚胎发育、胎盘功能及生殖系统疾病中发挥关键作用。近年来作为表观遗传学研究领域研究较为火热的RNA修饰的一种,m6A甲基化不仅在肿瘤研究中呈爆炸式增长,同时也提示可能与生殖细胞及胚胎发育相关。其中,RSA绒毛组织中m6A修饰的mRNA整体表达谱尚未见报道。目的本研究旨在系统分析早期不明原因胚胎停止发育绒毛组织中m6A甲基化修饰模式和mRNA的表达谱变化,构建不明原因胚胎停止发育绒毛组织m6A修饰的mRNA图谱。并将mRNA表达与m6A甲基化修饰进行联合分析,探索m6A甲基化修饰在早期不明原因胚胎停止发育发生机制中的作用。方法(1)招募2019年6月到2020年8月在郑州大学人民医院因不明原因多次胚胎停育清宫患者(RSA组)及自愿终止妊娠的正常早孕患者(NC组)。各收集其流产绒毛组3g,液氮速冻后,-80℃保存。(2)两组绒毛组织总RNA均使用Trizol法提取,质检合格后置于-80℃冰箱保存。RNA分成两份,一部分构建转录组测序文库,另一部分行m6A特异性抗体富集后进行Me RIP-seq文库构建。质检合格的文库测序。对测序数据进行质控和初步分析。(3)Me RIP-seq后筛选差异peak,并对差异peak相关基因进行GO与KEGG功能富集分析。RNA-seq后所得数据进行归一化和差异分析,筛选出显著差异基因进行火山图及聚类热图分析,并进行DO、GO及KEGG功能富集分析。以上均以FDR1作为筛选条件。(4)Me RIP-seq和RNA-seq数据联合分析。筛选出m6A修饰水平及mRNA表达水平同时显著变化的基因,并对差异基因进行GO富集、KO富集分析。(5)对m6A调节剂METTL3、HNRNPC和筛选出的6个m6A修饰水平及mRNA表达水平同时显著变化的基因进行RT-q PCR验证。(6)通过SPSS22.0软件和Graph Pad Prism 7.0软件进行统计分析,计量资料以均数±标准误(M±SD),RSA组及NC组之间比较采用t检验,P1的筛选标准,共筛选出138个显著差异的peak,其中RSA组相比于NC组m6A修饰上调peak 101个,m6A修饰下调peak 37个。差异peak相关基因KO分析显示显著富集通路主要有Toll样受体信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性、NOD样受体信号通路、单纯疱疹病毒感染和凋亡等。(3)RNA-seq检测到的总20286个mRNA相关基因中,按照P1的筛选标准,共筛出3574个显著差异基因,分别包括2720个表达显著上调基因及854个表达显著下调基因。这些显著差异基因主要富集的与女性生殖系统相关的DO条目有胚胎发育、绒毛膜癌、子痫前期、不孕不育等;KO分析显著富集的pathway分别有Th17细胞分化、Ras信号通路、Jak-STAT信号通路、癌症相关通路、抗叶酸、细胞凋亡等。(4)Me RIP-seq与RNA-seq联合分析,以P1为筛选条件,共筛选出65个m6A修饰显著差异且mRNA水平显著变化的基因。(5)m6A甲基化调节剂“writers”METTL3及“readers”HNRNPC表达显著下调(P绒毛组织中m6A甲基化调节剂所结合的motif基序和m6A修饰功能区域与其他物种一致,具有保守性。(2)m6A甲基化在早期胚胎停止发育绒毛组织中具有差异性修饰。(3)m6A修饰异常导致至少一部分mRNA表达水平显著变化,可能会引起RSA患者绒毛组织增殖减弱、植入不足、凋亡增加,从而造成早期胚胎的停止发育和死亡。(4)我们的研究描绘了早期胚胎停止发育绒毛组织的m6A甲基化修饰图谱,为探索RSA患者胚胎停止发育机制提供新的视角。

关键词：胚胎停止发育绒毛组织滋养层细胞 m6A甲基化 mRNA

血小板反应蛋白、血管生成素与复发性流产患者绒毛组织的关系研究

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深圳中西医结合杂志 2023年第3期33卷 60-63页

作者：李秋霞周芸汪来来上饶市妇幼保健院江西上饶334000

目的:探讨复发性流产(RSA)患者绒毛组织血管生成状况,并分析血小板反应蛋白(TSP)、血管生成素(Ang)与RSA的关系。方法:选取2020年6月至2022年6月在上饶市妇幼保健院妇产科医院行清宫术的116例患者作为研究对象,对照组为正常妊娠后行人... 详细信息

目的:探讨复发性流产(RSA)患者绒毛组织血管生成状况,并分析血小板反应蛋白(TSP)、血管生成素(Ang)与RSA的关系。方法:选取2020年6月至2022年6月在上饶市妇幼保健院妇产科医院行清宫术的116例患者作为研究对象,对照组为正常妊娠后行人工流产术,观察组患者为RSA,每组58例,采用免疫组化SP法检测两组研究对象Ang–1、Ang–2、TSP–1、TSP–2的表达情况,并检测微血管密度(MVD)值,分析其与上述指标的相关性。结果:观察组患者绒毛组织中Ang–1、Ang–2、TSP–2的表达水平均高于对照组(P绒毛组织中Ang–1、Ang–2和TSP–2高表达,TSP–1低表达时胎儿发生RSA的概率较高,上述指标均是胎儿出现RSA的影响因素。

关键词：复发性流产绒毛组织血管生成素血小板反应蛋白

复发性流产患者绒毛组织HIF-1α、VHL蛋白的表达及其临床意义

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东南大学学报（医学版） 2023年第1期42卷 98-103页

作者：娄欢杨小风武明莉郭婷婷李怡梅郑州大学附属郑州中心医院妇产科河南郑州450000

目的:检测复发性流产患者绒毛组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、希佩尔林道抑癌基因(VHL)蛋白表达水平并分析其临床意义。方法:选取2019年5月至2021年11月本院收治的83例复发性流产患者作为观察组,另选取80例行人工流产的正常早孕者设为... 详细信息

目的:检测复发性流产患者绒毛组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、希佩尔林道抑癌基因(VHL)蛋白表达水平并分析其临床意义。方法:选取2019年5月至2021年11月本院收治的83例复发性流产患者作为观察组,另选取80例行人工流产的正常早孕者设为对照组。收集两组绒毛组织,采用免疫组化法检测绒毛组织HIF-1α、VHL蛋白表达水平,采用Spearman法分析复发性流产患者HIF-1α与VHL蛋白表达的关系,并采用Logistic回归分析复发性流产的影响因素。结果:观察组绒毛组织HIF-1α蛋白阳性表达率高于对照组(P绒毛组织中HIF-1α蛋白表达水平异常升高,VHL蛋白表达水平异常降低,且两者呈负相关,均可能与复发性流产的发生有关。

关键词：复发性流产绒毛组织缺氧诱导因子-1α 希佩尔林道抑癌基因

宫内妊娠和输卵管妊娠绒毛组织中HIF-1α、Beclin-1、LC-3蛋白表达差异性研究

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生殖医学杂志 2023年第5期32卷 716-722页

作者：林銮如卢文静袁烁广州中医药大学广州510405 广州中医药大学第一附属医院(国家华南区中医妇科区域诊疗中心) 广州510405

目的检测宫内妊娠和输卵管妊娠绒毛组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、自噬标志蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3(LC-3)的表达情况,分析滋养层细胞在宫内、宫外不同环境中的缺氧状态及自噬表达的差异。方法宫内妊娠绒毛组织取材于202... 详细信息

目的检测宫内妊娠和输卵管妊娠绒毛组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、自噬标志蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3(LC-3)的表达情况,分析滋养层细胞在宫内、宫外不同环境中的缺氧状态及自噬表达的差异。方法宫内妊娠绒毛组织取材于2021年9—12月于广州中医药大学第一附属医院妇科门诊就诊的正常宫内妊娠6~8周、要求终止妊娠的6例患者(宫内妊娠组);输卵管妊娠绒毛组织取材于同时期妇科住院部妊娠6~8周、手术确诊输卵管妊娠且切除患侧输卵管的6例患者(输卵管妊娠组)。比较宫内妊娠和输卵管妊娠绒毛组织结构的差异,通过免疫组化、免疫荧光方法检测宫内妊娠和输卵管妊娠滋养层细胞中HIF-1α、Beclin-1、LC-3蛋白的相对表达量。结果宫内妊娠和输卵管妊娠绒毛组织在病理结构上具有明显差异。免疫组化检测结果显示,输卵管妊娠组绒毛组织中HIF-1α、Beclin-1、LC-3蛋白的相对表达量均显著高于宫内妊娠组(P绒毛组织中HIF-1α、LC-3蛋白的相对表达量均显著高于宫内妊娠组(P0.05)。结论输卵管妊娠时滋养层细胞处于更缺氧的环境中,且对细胞自噬起正向促进作用。

关键词：宫内妊娠输卵管妊娠绒毛组织缺氧状态自噬差异性表达