检索结果-南通市图书馆

大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)Gal-8L基因序列及其细菌凝集活性的鉴定

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

海洋与湖沼 2018年第2期49卷 413-421页

作者：梁亚芳史雨红苗亮陈炯宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室宁波315211

半乳糖凝集素-8基因(galectin-8,Gal-8)属于凝集素家族一员。已知Gal-8在哺乳动物的先天免疫中发挥重要作用,然而在鱼类中却鲜有报道。本研究通过转录组测序获得大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)半乳糖凝集素-8样基因(galectin-... 详细信息

半乳糖凝集素-8基因(galectin-8,Gal-8)属于凝集素家族一员。已知Gal-8在哺乳动物的先天免疫中发挥重要作用,然而在鱼类中却鲜有报道。本研究通过转录组测序获得大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)半乳糖凝集素-8样基因(galectin-8 like,Bp Gal-8L)c DNA序列。首先确定其序列特征,其次采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,q PCR)的方法鉴定Bp Gal-8L组织表达分布及其与迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)感染相关性;最后分别通过原核表达获得N端和C端CRD区重组蛋白Bp Gal-8L-N和Bp Gal-8L-C,并采用玻片法观察这两个CRD区的细菌凝集活性和糖类结合特性。多重序列比对显示,Bp Gal-8L蛋白含有两个糖识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD),但只有C端的CRD区存在Gal家族典型的β-半乳糖苷糖类结合基序。系统进化树表明Bp Gal-8L属于鱼类Gal-8的一种亚型。q PCR结果显示,Bp Gal-8L基因m RNA在各组织中普遍表达,并且在迟缓爱德华氏菌感染后大弹涂鱼肝和脾中表达量呈上调趋势。细菌凝集实验结果显示,只有Bp Gal-8L-C重组蛋白对检测的5种革兰氏阴性菌及2种革兰氏阳性菌有凝集作用,并与乳糖和脂多糖特异性结合。综上所述,Bp Gal-8L与大弹涂鱼抗菌免疫密切相关,且其N端和C端CRD区发挥不同作用。

关键词：半乳糖凝集素-8样基因细菌凝集糖结合特异性大弹涂鱼

维普期刊数据库

金黄色葡萄球菌SaeRS二元调控系统促进细菌凝集和生物被膜形成

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

国际检验医学杂志 2021年第23期42卷 2817-2821,2829页

作者：胡刘平刘倩上海交通大学医学院附属仁济医院检验科上海310115 上海交通大学附属第六人民医院检验科上海201306

目的探讨金黄色葡萄球菌SaeRS二元调控系统在人血浆蛋白调控细菌凝集和生物被膜形成中的作用机制。方法收集金黄色葡萄球菌感染常见的临床克隆菌株,Newman(NM)菌株中由于SaeS第一个跨膜区点突变(L18P)导致SaeRS二元调控系统处于持续活... 详细信息

目的探讨金黄色葡萄球菌SaeRS二元调控系统在人血浆蛋白调控细菌凝集和生物被膜形成中的作用机制。方法收集金黄色葡萄球菌感染常见的临床克隆菌株,Newman(NM)菌株中由于SaeS第一个跨膜区点突变(L18P)导致SaeRS二元调控系统处于持续活化状态,为了探索不同菌株中SaeRS系统的调控功能,本研究分别以USA300和NM菌株为背景,构建SaeRS二元调控系统敲除菌株USA300Δsae和NMΔsae,在含有乏血小板血浆(PPP)和富血小板血浆(PRP)条件下分别检测不同菌株凝集和生物被膜形成的能力。采用反转录-聚合酶链反应检测不同菌株在PPP作用后其SaeRS二元调控系统调控的靶基因表达水平。结果人血浆PPP可促进金黄色葡萄球菌不同临床分离菌株凝集,人血浆PPP和PRP均可促进金黄色葡萄球菌不同临床分离菌株生物被膜形成,但不同菌株之间存在差异,如人血浆蛋白促进NM菌株凝集能力明显强于USA300菌株,提示NM菌株中SaeRS系统的高度活化状态可能参与血浆蛋白促进细菌的凝集过程。进一步研究发现,人血浆蛋白不能促进sae敲除菌株的凝集和生物被膜形成能力;sae敲除菌株中互补表达SaeRS和高度活化状态的SaeRS L18P均可回复人血浆蛋白促进细菌凝集活性;USA300菌株中SaeRS通过调控凝固酶coa表达促进金黄色葡萄球菌凝集和生物被膜形成,而在NM菌株中,高度活化的SaeRS二元调控系统通过调节多个基因(coa、eap、clfb、emp)的表达发挥功能。结论人血浆蛋白可促进金黄色葡萄球菌凝集和生物被膜形成,SaeRS二元调控系统单个氨基酸位点突变改变该系统的调控网络。

关键词：金黄色葡萄球菌 SaeRS二元调控系统细菌凝集生物被膜

维普期刊数据库

刺参含WAP结构域蛋白的分子鉴定、表达及其功能初探

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

刺参含WAP结构域蛋白的分子鉴定、表达及其功能初探

作者：窦小宁宁波大学

学位级别：硕士

乳清酸蛋白(whey acidic protein,WAP)结构域蛋白是一类生理多效性蛋白,广泛存在于生物体内。在脊椎动物中,WAP结构域蛋白质在调节先天免疫、调控炎症发生、抵御微生物入侵和促进黏膜组织修复等方面发挥着重要作用。在无脊椎动物中,WAP... 详细信息

乳清酸蛋白(whey acidic protein,WAP)结构域蛋白是一类生理多效性蛋白,广泛存在于生物体内。在脊椎动物中,WAP结构域蛋白质在调节先天免疫、调控炎症发生、抵御微生物入侵和促进黏膜组织修复等方面发挥着重要作用。在无脊椎动物中,WAP结构域蛋白质被认为是一类含有WAP结构域的Crustins抗菌肽或Waprins蛋白,具有广谱抗菌活性或者作为蛋白酶抑制剂参与机体免疫反应。而刺参(Apostichopus japonicus)作为我国具有重要经济价值的水产养殖动物,其免疫防御的相关研究已取得丰硕成果,然而关于刺参体内具有抗菌活性的多肽、蛋白等免疫因子的研究目前鲜有报道,且富含半胱氨酸的WAP结构域蛋白在刺参体内的免疫功能尚不得知。因此,本论文通过高通量测序筛选出刺参含WAP结构域蛋白序列(AjWFDC-like),运用RACE技术获得了AjWFDC-like的全长;通过构建AjWFDC-like原核表达载体,诱导和纯化出AjWFDC-like重组蛋白(r AjWFDC-like)以用于制备抗体和功能验证;通过实时荧光定量PCR技术(q PCR)、western blot和IIFA分析了AjWFDC-like的表达模式和组织分布;通过牛津杯法、显微镜技术等方法探究了r AjWFDC-like的抗菌活性、对微生物的凝集作用、与微生物胞壁多糖的结合活性等体外免疫功能;同时,通过扫描显微技术初步分析了其抗菌机制,以探讨AjWFDC-like蛋白在抵抗病原入侵时发挥的免疫防御作用。获得以下研究结果:(1)从刺参中克隆出含WAP结构域蛋白的基因序列,命名为AjWFDC-like,其序列全长为1589 bp,5′非编码区和3′非编码区长度分别为103 bp和866 bp,ORF为621 bp,编码206个氨基酸残基,成熟的蛋白质分子量为20.74 k Da,其N端含有17个氨基酸残组成的信号肽。序列多重比对显示AjWFDC-like具有高度保守的WAP结构域特点,NJ系统进化树分析表明AjWFDC-like与无脊椎动物的WAP结构域蛋白聚为一簇;(2)qPCR分析发现,AjWFDC-like在刺参的各组织中广泛分布,其中在体壁和肠道中表达最多。在灿烂弧菌(Vibrio splendidus)感染或LPS胁迫下,体腔细胞和体壁组织中的AjWFDC-like出现显著性上调表达,均在24 h时其表达量达到峰值。Western blot分析表明体壁黏液和体壁组织中的AjWFDC-like蛋白表达水平在病原刺激的12～48 h之间明显上调;免疫荧光显微镜观察到体壁组织AjWFDClike表达量随着病原菌感染时间的延长而逐渐增多,有向体表外侧聚集的趋势。上述结果表明AjWFDC-like参与了病原诱导的免疫应答反应。(3)通过构建原核表达载体,体外获得了AjWFDC-like的重组蛋白(r AjWFDC-like),酶联免疫吸附试验结果表明r AjWFDC-like对LPS、PGN和MAN表现出明显的结合活性,通过荧光显微镜观察到r AjWFDC-like对哈维氏弧菌、鳗弧菌、灿烂弧菌和副溶血弧菌表现出不同程度的凝集作用,且通过牛津杯法发现r AjWFDC-like对哈维弧菌和鳗弧菌表现出抗菌活性。(4)利用荧光显微镜和扫描电镜进一步观察到r AjWFDC-like能直接作用于鳗弧菌、哈维氏弧菌的细胞膜,通过破坏其细胞膜的完整性,导致细胞的内容物泄漏而死亡。综上所述,AjWFDC-like能够响应致病因子的刺激,表现凝集细菌、结合病原相关模式分子(PAMPs)、杀菌等免疫活性,暗示着该蛋白在刺参体壁或黏液中作为抵抗病原入侵的第一道免疫防线,在刺参抵御病原微生物入侵的免疫过程中发挥着重要作用。抗菌抗病毒蛋白或多肽是海洋无脊椎动物非特异性免疫防御系统的重要组成部分,在水环境中对于宿主防御外来有害微生物的入侵扮演着重要角色。本论文的发现,不仅丰富了宿主抵抗外来病原感染或入侵过程中的免疫防御机制等相关研究内容,也为深入了解刺参非特异性免疫分子和探寻其抗病抗菌蛋白等免疫因子的提供了新思路和新见解,在水产动物健康养殖等领域中具有潜在应用价值。

关键词：刺参 AjWFDC-like 含WAP结构域蛋白 PAMP结合活性抗菌活性细菌凝集

一种香鱼C型凝集素的分子鉴定、表达及功能初探

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

一种香鱼C型凝集素的分子鉴定、表达及功能初探

作者：王维宁波大学

学位级别：硕士

C型凝集素(C-type lectins,CTLs)是动物固有免疫的组分之一,可参与模式识别、补体系统激活和炎性反应等免疫进程。本研究从香鱼(Plecogssus altivelis)转录组中获得了CTL基因(PaCTL)的cDNA序列。系统进化树分析表明,PaCTL与其他鱼类CTL... 详细信息

C型凝集素(C-type lectins,CTLs)是动物固有免疫的组分之一,可参与模式识别、补体系统激活和炎性反应等免疫进程。本研究从香鱼(Plecogssus altivelis)转录组中获得了CTL基因(PaCTL)的cDNA序列。系统进化树分析表明,PaCTL与其他鱼类CTLs自成一簇,其中与长体油胡瓜鱼(Spirinchuslanceolatus)CTL的亲缘关系最近。氨基酸序列多重比对表明,PaCTL同其他鱼类CTLs一样具有保守的C型凝集素样结构域。PaCTL mRNA在健康香鱼组织中分布广泛,在肝组织中高表达;鳗弧菌(Vibrio anguillarum)攻毒后PaCTL mRNA在肝和头肾中的表达被诱导。通过原核表达、尿素梯度复性得到重组PaCTL(recombinant PaCTL,rPaCTL),并制备多克隆抗体(anti-PaCTL)。rPaCTL能凝集鳗弧菌等8株革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌等3株革兰氏阳性菌,对D-甘露糖和L-岩藻糖具有较强的结合能力。rPaCTL在体外可增强香鱼血清对鳗弧菌的抑菌活性,并能裂解香鱼血清中的C3分子。在细胞水平上,rPaCTL可作为调理素增强香鱼单核/巨噬细胞(monocyte/macrophage,MO/MΦ)的吞噬作用,并且rPaCTL直接孵育可提高香鱼MO/MΦ的细胞因子的表达及增强杀菌能力和呼吸爆发。在动物水平上,腹腔注射不同浓度的rPaCTL能显著提高鳗弧菌感染香鱼的存活率,并能显著降低鳗弧菌在肝、脾、头肾和血液中的定植,其中25 μg/g rPaCTL的保护效果最佳。综上,PaCTL可能通过其生物学功能、对补体系统的激活以及对MO/MΦ的功能活性的调控对鳗弧菌感染香鱼产生保护作用。研究结果不仅丰富了人们对鱼类凝集素功能及作用机制的认识,并且为鱼类的早期病害防治提供了基础。

关键词：香鱼 PaCTL 细菌凝集 MO/MΦ 功能活性

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

01070 抑制细菌凝集的植物原花青素

国外药讯 2001年第1期 32-32页

作者：陈蕙芳

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

松江鲈肌酸激酶的基因克隆、表达与功能分析

海洋学报 2018年第12期40卷 21-30页

作者：刘莹莹陈学昭于珊珊柴迎梅林啸鹏祝茜山东大学(威海)海洋学院山东威海264209

前期蛋白质质谱分析发现,松江鲈(Trachidermus fasciatus Heckel)经鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激后,其皮肤黏液中的肌酸激酶(creatine kinase, CK)的表达明显上调。目前,肌酸激酶在鱼类中的功能研究尚未深入开展。本文利用RACE技术... 详细信息

前期蛋白质质谱分析发现,松江鲈(Trachidermus fasciatus Heckel)经鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激后,其皮肤黏液中的肌酸激酶(creatine kinase, CK)的表达明显上调。目前,肌酸激酶在鱼类中的功能研究尚未深入开展。本文利用RACE技术克隆获得了松江鲈CK基因的全长cDNA序列(命名为TfM-CK)。TfM-CK基因的cDNA全长为1 474 bp,开放阅读框为1 146 bp,编码381个氨基酸。序列比对分析显示,TfM-CK序列高度保守。实时荧光定量PCR显示,TfM-CK mRNA广泛表达于松江鲈各组织,在肌肉中的相对表达量最高,其次为血液。鳗弧菌刺激后,TfM-CK mRNA在肌肉、皮肤、脾脏和头肾中均上调表达。其中,脾脏中的表达量高达对照组的900多倍。原核重组表达纯化的TfM-CK(rTfM-CK)蛋白酶活测定实验结果显示,重组蛋白的酶活为22.0 U/mg。rTfM-CK对鳗弧菌、大肠杆菌(Escherichia coli)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有较强的凝集作用。由以上实验结果推测,TfM-CK可能通过细菌凝集作用参与到了松江鲈抵抗病原菌的先天免疫防御过程中。本研究为认识鱼类肌酸激酶的功能及其在病原菌防御过程中的分子免疫机制机制提供了参考。

关键词：肌酸激酶松江鲈表达先天免疫细菌凝集

维普期刊数据库

黄河鲤C1qDC和CFH基因分子特征和免疫响应研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黄河鲤C1qDC和CFH基因分子特征和免疫响应研究

作者：高园园河南师范大学

学位级别：硕士

黄河鲤（Cyprinus carpio）是河南省重要的鱼类经济物种,近年来随着养殖密度和规模的提高,黄河鲤免疫力下降,病害频发,给我省黄河鲤养殖业的可持续发展带来巨大威胁。因此,深入研究黄河鲤免疫防御机制以有效预防和控制养殖黄河鲤病害的... 详细信息

黄河鲤（Cyprinus carpio）是河南省重要的鱼类经济物种,近年来随着养殖密度和规模的提高,黄河鲤免疫力下降,病害频发,给我省黄河鲤养殖业的可持续发展带来巨大威胁。因此,深入研究黄河鲤免疫防御机制以有效预防和控制养殖黄河鲤病害的发生具有重要的理论和实践意义。鱼类属于低等脊椎动物,其适应性免疫尚不完善,先天性免疫在其免疫系统中占有重要位置。补体系统是先天性免疫的重要组成部分,在抵御病原感染和调节机体免疫等方面发挥不可替代的作用,因此,对于补体系统相关成分的研究将有助于我们深入理解黄河鲤的免疫防御机制。C1q DC（C1q-domain-containing）蛋白是指在C末端含有C1q结构域的一类蛋白,该类蛋白是重要的模式识别受体,在激活补体系统和防御病原感染过程中发挥重要的作用。为研究黄河鲤C1q DC基因对病原类似物的免疫识别特性和表达响应,本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆得到黄河鲤C1q DC基因c DNA全长序列,使用RT-q PCR检测其在黄河鲤不同组织和病原类似物刺激后的表达情况。体外检测了C1q DC蛋白对细菌的凝集活性及其与病原相关分子模式（LPS和PGN）的结合活性。结果表明C1q DC基因全长958 bp,包含一个726 bp的开放阅读框,编码241个氨基酸。氨基酸序列同源性比对及系统进化分析结果显示黄河鲤C1q DC基因与鲤科其它鱼类同源性最高。组织分布显示C1q DC基因在所有受检测的组织中均有表达,且以肝脏和鳃中的表达量最高。LPS和Poly I:C刺激后,C1q DC基因表达量在肝脏和脾脏中出现显著上调（p＜0.05）,而在头肾和体肾中显著下降（p＜0.05）。细菌凝集试验显示体外表达的C1q DC蛋白对嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）具有明显的凝集活性,并且可以有效识别病原相关分子模式LPS和PGN。以上结果表明黄河鲤C1q DC基因在病原识别及免疫防御中可扮演重要角色。CFH（Complement factor H）蛋白作为一类重要的补体调节蛋白,在调节补体激活反应平衡和抵御病原感染过程中发挥重要作用。为研究黄河鲤补体调节蛋白CFH在抵御病原类似物感染过程中发挥的作用,本文采用RT-PCR技术从黄河鲤中克隆获得CFH基因开放阅读框序列并进行了生物信息学分析,使用RT-q PCR技术分析其在不同组织中的表达分布以及病原类似物LPS和Poly I:C处理后的表达水平变化。结果显示黄河鲤CFH基因开放阅读框为2817 bp,编码939个氨基酸,氨基酸序列同源性比对及系统进化分析结果显示黄河鲤C1q DC基因与鲤科其它鱼类同源性最高。CFH基因在健康黄河鲤各组织器官中广泛分布,且在肝脏中表达量最高。病原类似物刺激后,脾脏中CFH基因的表达出现先上调后下降的趋势,在头肾和体肾中分别呈现逐渐下降和上升的趋势。以上结果表明黄河鲤CFH基因在抵抗病原感染的免疫响应中也发挥重要作用。

关键词：黄河鲤 C1q结构域蛋白补体因子H 细菌凝集免疫响应

拟穴青蟹甲壳肽（Crustin）的免疫功能研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

拟穴青蟹甲壳肽（Crustin）的免疫功能研究

作者：王月河南师范大学

学位级别：硕士

拟穴青蟹(Scylla paramamosain),简称青蟹,是我国重要的经济蟹类之一,广泛分布于我国的东海和南海等海域。近年来,伴随着蟹类养殖规模的扩大以及其集约化养殖的发展,各种养殖病害频发严重制约了蟹类养殖产业的发展。青蟹凭借其独特的先... 详细信息

拟穴青蟹(Scylla paramamosain),简称青蟹,是我国重要的经济蟹类之一,广泛分布于我国的东海和南海等海域。近年来,伴随着蟹类养殖规模的扩大以及其集约化养殖的发展,各种养殖病害频发严重制约了蟹类养殖产业的发展。青蟹凭借其独特的先天性免疫系统,在外界不良生存环境中有效地抵御外界病原菌的入侵,因而其先天免疫防御机制的研究备受关注。甲壳肽(Crustin)是甲壳动物免疫系统的重要效应分子,本研究我们从青蟹中鉴定了3个甲壳肽基因,分别命名为SpCrus3、SpCrus4和SpCrus5。当前文献报道将甲壳肽分为5类,在I型甲壳肽中,信号肽序列和WAP结构域之间含一个半胱氨酸富含区。通过对获得的SpCrus3和SpCrus4序列进行分析,我们发现这两个分子均属于I型甲壳肽,并且这两个基因的cDNA序列含有相同的5’端。表达模式分析显示:SpCrus3和SpCrus4主要在鳃中表达;在副溶血弧菌或金黄色葡萄球菌刺激后,SpCrus4上调表达,而SpCrus3下调表达。虽然SpCrus3和SpCrus4具有66.06%的相似性,但SpCrus4的抗菌活性强于SpCrus3。微生物结合实验表明SpCrus3和SpCrus4对所有受试微生物均具有结合活性。多糖结合实验表明这两个蛋白对细菌多糖如脂多糖(LPS)、脂磷壁酸(LTA)和肽聚糖(PGN)都具有结合活性,并且SpCrus3和SpCrus4对LPS和LTA的结合活性强于PGN。此外,SpCrus4对LTA的结合活性强于SpCrus3,这可能是这两个蛋白之间抗菌活性呈现显著差异的原因。凝集实验表明SpCrus4对微生物的凝集活性强于SpCrus3,这种增强的凝集活性可能有助于SpCrus4表现出更强的抗菌活性。基于以上结果,我们提出了SpCrus3和SpCrus4参与青蟹抗菌免疫的模型:SpCrus3在健康的青蟹中高度表达以保持低水平的抗菌活性;当细菌感染青蟹时,诱导产生大量的SpCrus4表现出对细菌更强的抗菌活性。根据当前分类标准,II型甲壳肽在N端邻近信号肽区有一段较长的富含甘氨酸的疏水区域(GRR)和一个半胱氨酸富含区,同时在C端含有一个WAP结构域。GRR结构域是区分I型和II型甲壳肽的主要标记基序,并且一些研究表明含有GRR的II型甲壳肽比I型甲壳肽具有更广泛的抗菌谱。我们发现SpCrus5序列的C端含有一个GRR结构域,这与经典的II型甲壳肽的含有N端GRRs结构域不同。表达模式分析显示:SpCrus5主要在鳃中表达;在副溶血弧菌或金黄色葡萄球菌刺激后,SpCrus5上调表达,表明SpCrus5可能参与抗菌免疫反应。为了进一步阐明这种C端GRR结构域是否影响SpCrus5的功能,我们通过删除GRR结构域获得了GRR缺失突变体(SpCrus5-ΔGRR)。SpCrus5成熟蛋白的抗菌活性强于SpCrus5-ΔGRR,前者对革兰氏阴性菌的抗菌谱也广于后者;SpCrus5蛋白对微生物细胞的结合活性和多糖结合活性强于SpCrus5-ΔGRR;SpCrus5和SpCrus5-ΔGRR凝集所有受试的革兰氏阳性菌。上述实验表明,SpCrus5对微生物多糖的结合活性以及对微生物的凝集活性有助于发挥其抗菌活性,并且其C端GRR结构域能够增强SpCrus5的抗菌活性并拓宽其抗菌谱。虽然根据经典分类方法,SpCrus5属于I型甲壳肽,但SpCrus5与大多数II型甲壳肽具有高度相似性并且其功能与一些II型甲壳肽相似,表明SpCrus5更像一个非经典的II型甲壳肽。综上所述,本研究对青蟹中3个甲壳肽基因进行了表达模式及免疫功能研究,发现SpCrus3、SpCrus4和SpCrus5是青蟹免疫体系中的重要抗菌蛋白,它们以不同的方式参与青蟹免疫反应。本研究为了解甲壳肽序列和功能多样性、抗菌机制以及多个甲壳肽如何协作提供免疫保护提供了新的见解。

关键词：拟穴青蟹甲壳肽抗菌活性细菌结合细菌凝集

致倦库蚊被武昌罗索线虫感染后免疫基因差异表达及功能分析

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

致倦库蚊被武昌罗索线虫感染后免疫基因差异表达及功能分析

作者：芦丹丹华中师范大学

学位级别：硕士

蚊类是多种病原体和寄生虫的传播媒介,能引起疟疾、登革热和淋巴丝虫病等严重传染性疾病,属于重要的公共卫生害虫。武昌罗索线虫(Romanomermis wuchangensis)可感染并杀死十余种库蚊及伊蚊幼虫,是一种很有发展前景的生物灭蚊剂。其感染... 详细信息

蚊类是多种病原体和寄生虫的传播媒介,能引起疟疾、登革热和淋巴丝虫病等严重传染性疾病,属于重要的公共卫生害虫。武昌罗索线虫(Romanomermis wuchangensis)可感染并杀死十余种库蚊及伊蚊幼虫,是一种很有发展前景的生物灭蚊剂。其感染库蚊后可引发宿主体内包括模式识别受体(Pattern recognition receptors, PRRs)在内的多种分子参与的一系列的免疫反应。昆虫通过PRRs识别和结合病原物的病原相关分子模式(Pathogen-associated molecule patterns, PAMPs)来启动先天性免疫反应。C型凝集素(C-type lectins, CTLs)作为一种重要的模式识别受体,在病原的识别和清除方面发挥着多种功能并扮演着重要角色。本研究对致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)被武昌罗索线虫感染后的存活率进行了分析;并通过荧光定量的方法分析了致倦库蚊被武昌罗索线虫感染后不同时期模式识别受体基因CTL12 (C-type lectin 12)、 PGRPLC (Peptidoglycan recognition protein LC)、 PGRPLE (Peptidoglycan recognition protein LE)、PGRPS1 (Peptidoglycan recognition protein S1)、 PGRPS6 (Peptidoglycan recognition protein S6), TOLL信号通路基因TOLL9A、CACT(Cactus), IMD(Immune deficiency)信号通路基因IMD (Immune deficiency) 、REL1A (Relish 1A), JAK/STAT (Janus kinase/signal transducer and activator transcription)信号通路基因DOME(Domeless)、 HOP (Hopscotch)、 STAT1A (Signal transducer and activator of transcription 1A),凝结黑化途径基因SRPN6 (Serine proteinase inhibitor 6)、CLIPC2 (Clip-domain serine protease C2),免疫效应分子基因PPO2 (Prophenoloxidase 2)、PPO5 (Prophenoloxidase 5)、CECA2 (Cecropin 2),自噬途径基因ATG5 (Autophagy-related protein 5)、ATG8 (Autophagy-related protein 8)等19个免疫相关基因的表达情况;筛选出显著下调表达的免疫基因CTL12,并对其进行了蛋白原核表达和体外功能实验,初步探究了致倦库蚊CqCTL12基因在其抵御细菌和线虫感染的免疫反应中的功能和作用。实验结果如下：1.致倦库蚊被武昌罗索线虫感染后的存活率分析。结果发现6天后感染组孑(?)的存活率极显著低于对照组(p细菌的凝集实验表明：rCqCTL12能显著凝集革兰氏阴性菌Escherichia coli和革兰氏阳性菌Staphylococcus aureus,具有典型的Ca2+依赖效应。5. rCqCTL12与武昌罗索线虫感染期幼虫的体外结合。实验表明：rCqCTL12能在体外与甲醛杀死的及活体状态下的感染期幼线虫结合,且这种结合与Ca2+存在与否无关。上述实验结果表明,包括CqCTL12在内的致倦库蚊多种免疫基因在抵御线虫和细菌侵染过程中发挥着重要作用。研究结果为后续武昌罗索线虫在卫生害虫蚊类的生物防控上的应用提供了基础性资料。

关键词：武昌罗索线虫致倦库蚊荧光定量 C型凝集素 CqCTL12 CqATG8 细菌凝集线虫结合