检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞连接在机械通气相关肺损伤中的研究进展

临床医学进展 2023年第7期13卷 12052-12055页

作者：古海云赵涛李刚日照市人民医院麻醉科山东日照

机械通气是临床全身麻醉和危重症患者维持有效氧合的重要手段。由于机械通气患者增加,机械通气相关肺损伤(Ventilation-induced lung injury, VILI)的发生率也持续增加,严重可导致急性呼吸窘迫综合征。细胞连接在机械通气相关肺损伤起... 详细信息

机械通气是临床全身麻醉和危重症患者维持有效氧合的重要手段。由于机械通气患者增加,机械通气相关肺损伤(Ventilation-induced lung injury, VILI)的发生率也持续增加,严重可导致急性呼吸窘迫综合征。细胞连接在机械通气相关肺损伤起到关键作用,本文拟从机械通气相关肺损伤中细胞连接变化的研究进展进行综述。

关键词：细胞连接紧密连接机械通气相关肺损伤

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞连接蛋白在肝星状细胞活化中的作用

细胞连接蛋白在肝星状细胞活化中的作用

作者：刘爽大连医科大学

学位级别：硕士

[背景]肝硬化是进展性肝纤维化的终末期,如果不加以预防,可能发展为肝硬化,甚至肝癌和肝衰竭。在肝纤维化的进展过程中起着核心作用的是肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的活化。当前的研究主要集中在细胞因子促活化的作用上,已... 详细信息

[背景]肝硬化是进展性肝纤维化的终末期,如果不加以预防,可能发展为肝硬化,甚至肝癌和肝衰竭。在肝纤维化的进展过程中起着核心作用的是肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的活化。当前的研究主要集中在细胞因子促活化的作用上,已经阐明诸多因子的分子机制,但是对细胞因子活化途径的干预,对于抗纤维化的治疗效果无法达到预期。而细胞间接触和连接是活化后的HSC的重要表现,本课题组之前的研究也发现细胞接触与非接触共培养,HSC会表现出不同的活化状态,因此,肝硬化发病新的机制的探索将有助于肝纤维化的治疗取得突破。[目的]通过将静止的肝星状细胞与活化的肝星状细胞进行接触培养与非接触共培养进行对照,观察细胞间连接蛋白CX-43表达及阻断后对肝星状细胞活化的影响,从而揭示其对HSC活化的作用。[方法]1.通过蛋白酶,胶原酶,后分散液序贯灌注的方法灌注雄性S-D大鼠的肝脏,分散肝脏细胞并使之消化,再通过密度梯度离心,和细胞的贴壁时间的差异性,得到分离的肝星状细胞,并且量子点标记。将分离得到的大鼠的的原代HSC(静止表型),与HSC-T6细胞株(活化表型)依照一定的比值接种在提前用Matrigel胶包被的transwell体系内。分组:非阻滞剂组分为:A组(非接触共培养组):上室接种1.3×10个/ml,接种2ml的HSC-T6细胞,下室接种1.3×10个/ml,接种2ml的原代HSC。B组(接触共培养组):将原代HSC 1.3×10个/ml与HSC-T6细胞株1.3×10个/ml按照1:1混悬,上室和下室各接种2ml混悬液。C组(阴性对照度):上室和下室均加入1.3×10个/ml,接种2ml。阻滞剂组:记为Bi组,将原代HSC 1.3×10个/ml与HSC-T6细胞株1.3×10个/ml按照1:1混悬,上室和下室各接种2ml混悬液,并且加入CX-43阻滞剂gap26.2.观察指标:通过免疫荧光技术观察24h,48h各分组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在原代HSC中的表达量,反映细胞活化状况,并观察原代HSC中细胞连接蛋白-43(CX-43)的表达量,以此来验证CX-43与HSC活化是否具有一定的关系。[结果]非阻滞剂组α-SMA:A组:原代HSC 24h,48h均未活化,不表达α-SMA。B组:原代HSC 24h已经开始活化,48h明显活化,从24h的表达少量的α-SMA,到48h表达大量的α-SMA,从细胞形态学上观察,已经发生显著变化,如细胞体积增大,胞突延伸展开,伪足伸出。C组:原代HSC细胞24h和48h全都没有发生活化,不表达α-SMA。阻滞剂组:Bi组,原代HSC 24h尚未活化,不表达α-SMA。非阻滞剂组CX-43:A组:原代HSC 24h,48h均未活化,不表达CX-43,B组:原代HSC 24h已经开始活化,表达少量的CX-43,48h明显活化,细胞体积增大,胞突延伸展开,伸出伪足,表达大量的CX-43。C组:原代HSC 24h和48h均未活化,不表达CX-43。阻滞剂组:Bi组,原代HSC 24h尚未活化,不表达CX-43。[结论]1.通过与活化的HSC接触共培养后,静止的原代HSC活化速度加快,说明影响HSC活化的因素之一是细胞间连接。2.活化的HSC表达细胞连接蛋白CX-43,阻断CX-43可以抑制HSC活化进程,说明CX-43与原代HSC的活化有促进作用。

关键词：肝星状细胞细胞连接细胞连接蛋白-43 平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

HIV-1损伤黏膜细胞连接的分子机制研究

HIV-1损伤黏膜细胞连接的分子机制研究

作者：陈明真山东师范大学

学位级别：硕士

艾滋病(Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)是一种由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)感染引起的疾病,其中HIV-1是引发艾滋病的主要致病株。HIV-1的主要传播途径包括母婴传播、血液传播和性传播。性传播中,... 详细信息

艾滋病(Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)是一种由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)感染引起的疾病,其中HIV-1是引发艾滋病的主要致病株。HIV-1的主要传播途径包括母婴传播、血液传播和性传播。性传播中,黏膜上皮接触是HIV-1感染的关键步骤。HIV-1通过增加黏膜通透性,破坏黏膜上皮屏障,促进其病毒传播。黏膜上皮细胞层的细胞连接蛋白复合体形成了黏膜屏障。包括我们课题组在内的研究人员证明,微管的动态组装及其稳定性调节在黏膜上皮屏障稳态维持中发挥着重要的作用。微管的动态性受到微管结合蛋白的调控,其中包括微管解聚蛋白stathmin。我们之前的研究发现HIV-1包膜蛋白gp120可以引起stathmin蛋白水平的降低,导致微管过度稳定,进而破坏细胞连接蛋白复合体,最终促使HIV-1突破黏膜上皮屏障,侵犯人体的免疫系统。但是,这一过程的分子基础尚不清楚,有待进一步研究。在本文中,我们初步探究了HIV-1破坏黏膜上皮屏障以启动其感染周期的分子机制。用假型HIV-1颗粒处理黏膜上皮细胞,实验结果显示HIV-1感染导致细胞的紧密连接及黏附连接破坏、微管稳定性过度增加、stathmin蛋白水平的降低。通过免疫沉淀联合质谱鉴定,我们发现PKG1(protein kinase c GMP-dependent 1)和ADCK3(aar F domain containing kinase 3)是stathmin的相互作用蛋白。进一步地,我们对PKG1和ADCK3进行深入筛选,实验结果表明,PKG1 si RNA敲低细胞内的PKG1蛋白可以回复HIV-1引起的细胞连接损伤,而ADCK3敲低则没有明显效果。因此,PKG1很有可能在HIV-1感染黏膜上皮进程和stathmin分子之间起了重要的桥梁作用。我们推测:蛋白质激酶PKG1很有可能通过磷酸化stathmin在HIV-1感染中发挥作用。免疫沉淀实验证明PKG1与stathmin在体内及体外均相互作用。过表达PKG1增加了stathmin的磷酸化水平,并伴随着stathmin蛋白表达水平的降低。Stathmin蛋白磷酸化质谱分析结果显示,HIV-1 gp120处理细胞后,stathmin的第38位和第63位的丝氨酸位点被磷酸化修饰。进一步的免疫印迹结果显示,stathmin的第63位点的丝氨酸磷酸化水平增加。利用PKG1的抑制剂与HIV-1 gp120共处理细胞后,stathmin第63位点的丝氨酸磷酸化水平降低。更重要的是,PKG1抑制、stathmin-GFP过表达均可以回复HIV-1gp120诱导的细胞连接损伤,而stathmin第63位点丝氨酸磷酸化缺陷突变体的过表达可以更好地恢复细胞连接的完整性。综上所述,我们发现HIV-1暴露会激活PKG1,导致stathmin蛋白的第63位点丝氨酸被磷酸化修饰、微管过度稳定和细胞连接破坏,最终使得黏膜上皮屏障受损。我们的研究结果进一步揭示了HIV-1感染黏膜上皮的分子机制,该机制的揭示有助于制定有效预防HIV-1感染的诊疗策略。

关键词：细胞连接紧密连接微管微管结合蛋白 stathmin

Par3在成牙本质细胞胞间连接及其生物学功能中的作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

口腔医学研究 2022年第4期38卷 350-356页

作者：王珏钰肖敏白玉程小刚吴昊泽况金鑫余擎军事口腔医学国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔疾病重点实验室第四军医大学口腔医院牙体牙髓病科陕西西安710032

目的:通过下调分离缺陷基因3(partitioning defective-3,Par3)的表达探究其对小鼠成牙本质细胞系细胞(odontoblast lineage cells,OLCs)胞间连接的调控作用及相关生物学影响。方法:通过免疫荧光实验分别观察Par3在大鼠牙髓组织及小鼠成... 详细信息

目的:通过下调分离缺陷基因3(partitioning defective-3,Par3)的表达探究其对小鼠成牙本质细胞系细胞(odontoblast lineage cells,OLCs)胞间连接的调控作用及相关生物学影响。方法:通过免疫荧光实验分别观察Par3在大鼠牙髓组织及小鼠成牙本质细胞中的表达及分布;利用Western blot检测炎症状态下成牙本质细胞Par3的表达情况;利用小干扰RNA(siRNA)敲低成牙本质细胞Par3的表达后,通过透射电镜观察Par3表达下调前后小鼠成牙本质细胞胞间连接结构的变化;利用Western blot及细胞免疫荧光技术检测Par3表达下调前后细胞紧密连接相关分子ZO-1(zonula occludens-1)的表达及分布情况;最后,通过EdU(5-ethynyl-2’-deoxyuridine)、Transwell及流式细胞术等检测Par3表达下调对成牙本质细胞增殖、迁移及凋亡等生物学功能的影响。结果:Par3在大鼠牙髓组织中与成牙本质细胞分布一致。体外条件下Par3表达于成牙本质细胞胞质内,且在炎症状态下表达水平下降。Par3表达下调后小鼠成牙本质细胞胞间连接不连续,紧密连接相关蛋白ZO-1表达下调且其分布由细胞膜转移至细胞质;Par3表达下调组与对照组相比,细胞增殖、迁移能力增强,凋亡能力受抑制。结论:Par3表达下调可通过影响ZO-1的表达/分布破坏小鼠成牙本质细胞胞间连接,同时通过促进细胞增殖及迁移等能力增强了细胞的修复能力。

关键词：成牙本质细胞细胞连接 Par3 反应性牙本质

细胞连接相关基因在大鼠肝再生中表达模式(英文)

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Journal of Genetics and Genomics 2007年第10期34卷 892-908页

作者：李红蕾陈晓光张富春马纪徐存拴新疆大学生命科学与技术学院河南师范大学生命科学学院新乡453007

细胞连接是组织、器官形成的基础。为在基因转录水平了解紧密连接、粘附连接、粘着斑和间隙连接相关基因在肝再生中作用,本文用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得上述基因,用Rat Genome 230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中表达情况,... 详细信息

细胞连接是组织、器官形成的基础。为在基因转录水平了解紧密连接、粘附连接、粘着斑和间隙连接相关基因在肝再生中作用,本文用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得上述基因,用Rat Genome 230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中表达情况,将3次检验结果相同或相似、在肝再生中发生有意义表达变化、真手术组和假手术组表达差异显著的基因视为肝再生相关基因。初步证实上述4种细胞连接中79、53、109和53个基因与肝再生相关。其中,肝再生启动(部分肝切除后0.5～4h)、G0/G1过渡(PH后4～6h)、细胞增殖(部分肝切除后6～66h)、细胞分化和组织结构功能重建(部分肝切除后72～168h)等4个阶段起始表达的基因数和基因的总表达次数为124、43、122、10和249、145、957、306。表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共上调972次,下调540次,表明肝再生中大多数细胞连接相关基因表达加强,少数基因表达降低。它们表达的相似性分为均上调、上调占优势、均下调、下调占优势、上调和下调相近等5类,涉及102、38、73、27和16个基因,它们表达的时间相关性分为0.5和1h、2h、4和6h、8和12h、16h、18和48h、24h、30和42h、36h、54和60h、66和72h、96h、120h、144和168h等14组,表明肝再生中细胞生理生化活动具有阶段性。它们的表达模式分为41类,表明肝再生中细胞生理生化活动具有多样性和复杂性。根据肝再生中基因表达变化和表达模式推测,肝再生早期和前期间隙连接形成增强,晚中期和后期间隙连接形成减少;早期、前期和后期粘着斑形成增强;紧密连接和粘附连接的形成贯穿于整个肝再生。

关键词：部分肝切除 Rat Genome 230 2.0芯片细胞连接肝再生相关基因

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

耳蜗内细胞连接蛋白研究进展

中华耳科学杂志 2015年第1期13卷 25-29页

作者：王博胡博华杨仕明中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所北京100853 中国航天员科研训练中心北京100094 纽约州立布法罗大学听力和耳聋研究中心美国纽约14214

耳蜗内的细胞连接具有高度复杂性和有序性,它们是维持耳蜗结构和听觉功能的必要条件。本文将对耳蜗内的细胞连接蛋白进行分类,并简要综述连接蛋白在耳蜗中的功能和作用。

关键词：耳蜗细胞连接连接蛋白

透射电镜在糖尿病大鼠肠上皮细胞连接分析中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

解剖学杂志 2018年第3期41卷 249-252页

作者：常志尚毋亚仙刘立娜谭金山刘颖梁惠青岛大学生物医学公共支撑平台青岛266071 青岛大学基础医学院青岛266071 青岛大学国家重点实验室培育基地青岛266071 青岛大学公共卫生学院青岛266071

探讨透射电镜技术在糖尿病大鼠肠上皮细胞连接分析中的应用。采用高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法建立糖尿病大鼠模型,采用罗氏血糖仪检测大鼠尾血血糖,采用透射电镜观察大鼠回肠上皮细胞连接的病理学改变,采用免疫印迹检测大... 详细信息

探讨透射电镜技术在糖尿病大鼠肠上皮细胞连接分析中的应用。采用高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法建立糖尿病大鼠模型,采用罗氏血糖仪检测大鼠尾血血糖,采用透射电镜观察大鼠回肠上皮细胞连接的病理学改变,采用免疫印迹检测大鼠回肠组织claudin、occludin、ZO-1蛋白表达水平。成功构建糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠肠上皮细胞间紧密连接与正常对照组比较稍感松弛,电子密度有所降低;中间连接、缝隙连接则出现缝隙异常增宽现象。与正常对照组比较,模型组细胞连接相关蛋白claudin、occludin、ZO-1表达水平显著降低。透射电镜技术可应用于糖尿病大鼠肠上皮细胞连接病理形态学分析,对糖尿病大鼠肠黏膜屏障功能评价具有重要意义。

关键词：糖尿病细胞连接细胞连接相关蛋白透射电镜大鼠

低剂量纳米颗粒诱导血管内皮细胞产生ROS及其对内皮细胞连接完整性的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

低剂量纳米颗粒诱导血管内皮细胞产生ROS及其对内皮细胞连接完整...

作者：杨爱云北京协和医学院

学位级别：硕士

目的:纳米颗粒在生物医学领域获得了广泛研究,其应用已经涉及到生物医学以及工业和日常生活的诸多方面。随着纳米颗粒暴露机会的增加,安全性问题引起政府监管部门、科学界、企业界及公众的关注。研究显示,当暴露剂量达到一定限度后,纳... 详细信息

目的:纳米颗粒在生物医学领域获得了广泛研究,其应用已经涉及到生物医学以及工业和日常生活的诸多方面。随着纳米颗粒暴露机会的增加,安全性问题引起政府监管部门、科学界、企业界及公众的关注。研究显示,当暴露剂量达到一定限度后,纳米颗粒会介导细胞产生活性氧自由基(Reactive Oxide Species,ROS),引起氧化应激反应,并激活下游信号通路,导致细胞凋亡。血管内皮细胞存在于富血管化的多种器官中,是营养、代谢产物以及细胞运动的“门卫”。血管内皮细胞的功能与其相互间的连接密不可分;内皮细胞的相互连接在细胞定位、增殖、凋亡以及信号传导中均发挥重要作用。纳米颗粒很容易通过呼吸或静脉暴露途径进入循环血液系统,由此获得与血管内皮细胞接触的机会。实验室前期研究发现,银纳米颗粒能够引起血管内皮细胞的ROS升高,由此导致细胞间连接蛋白VE-钙粘蛋白(VE-Cadherin)表达降低。本课题的目的是研究和比较若干常见纳米颗粒在低剂量暴露下对血管内皮细胞内活性氧以及细胞间连接的影响,探讨二者之间的关联性,为建立纳米颗粒安全性评价方法提供实验研究依据。方法:选用化学成分、尺寸、表面修饰不同的纳米颗粒,包括:柠檬酸钠修饰的金纳米颗粒(Au-NPs)和铂纳米颗粒(Pt-NPs),Au-NPs 有 10nm、30nm、50nm三种粒径,Pt-NPs有5nm、30nm、70nm三种粒径;表面无修饰的二氧化硅纳米颗粒(SiO2-NPs),有20 nm、50 nm、100 nm三种粒径;表面无修饰的两种不同晶型的二氧化钛纳米颗粒,包括锐钛矿单晶型(TiO2-NPs)、锐钛矿与金红石晶型混合相的P25-NPs,其中锐钛矿型的TiO2-NPs包括30nm、80nm、100nm三种粒径;两种不同修饰的磁性纳米颗粒,包括葡聚糖修饰的Fe2O3纳米颗粒(Dex-Fe2O3)和二巯基玻珀酸修饰的Fe2O3纳米颗粒(DMSA-Fe2O3);以及氧化多壁碳纳米管(MWCNTs)。在理化性质表征方面,采用透射电镜(TEM)观察纳米颗粒的尺寸和形貌,利用动态光散射(DLS)测定纳米颗粒的Zeta电势;在细胞研究方面,以人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)为研究对象,通过CCK-8法测定纳米颗粒暴露24 h后的细胞活性;通过透射电镜观察HUVECs对不同纳米颗粒的摄取;采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针,利用流式细胞分析术和荧光显微镜检测纳米颗粒介导的内皮细胞内ROS水平;采用过氧化氢酶(CAT)试剂盒检测纳米颗粒对细胞内抗氧化酶水平的影响;通过VE-Cadherin抗体对细胞进行荧光标记,利用激光共聚焦显微镜观察内皮细胞间连接的变化;采用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理来研究细胞内ROS水平与细胞间连接之间的关系;采用Image J软件测算和分析细胞间连接的间隙宽度;应用激光共聚焦显微镜观察40-kD异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖标记内皮细胞跨单层运动;通过western blot分析经纳米颗粒暴露后内皮细胞连接蛋白和骨架微管蛋白的表达水平。结果:(1)除MWCNTs呈管状结构外,其它几种纳米颗粒均呈颗粒状,尺寸均匀。(2)不同纳米颗粒对内皮细胞活性的影响不同,即使是相同化学组成的纳米颗粒,其尺寸和表面修饰不同,对内皮细胞的毒性也不同。在实验浓度范围内,与对照组相比,MWCNTs、Au-NPs、Dex-Fe2O3对血管内皮细胞的毒性较低,Pt-NPs、SiO2-NPs、TiO2-NPs、P25-NPs、DMSA-Fe2O3 的细胞毒性均表现出明显的浓度依赖性,随着实验浓度的增加,细胞毒性增强。(3)纳米颗粒能被内皮细胞摄取,在细胞毒性低于一级的低剂量暴露条件下,纳米颗粒均会诱导细胞内ROS产生,同时引起细胞内过氧化氢酶活性上调,导致VE-Cadherin表达降低和微管蛋白乙酰化下调,这些影响最终导致内皮细胞间隙形成。(4)抗氧化剂NAC处理可降低纳米颗粒引起的胞内ROS水平上调,细胞间连接蛋白表达趋于正常。结论:低剂量暴露的纳米颗粒能引起细胞内ROS的上调和过氧化氢酶活性增强,导致内皮细胞间连接蛋白VE-Cadherin下调,血管内皮细胞间隙增大,内皮层通透性增加。提示在评价纳米颗粒体内应用的安全性时,除采用常规方法检测其对细胞活性的影响外,还应考虑评价其对血管内皮细胞内活性氧水平及细胞间连接的作用。

关键词：纳米颗粒内皮细胞活性氧细胞连接

Par3在成牙本质细胞胞间连接及生物学功能中的作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Par3在成牙本质细胞胞间连接及生物学功能中的作用研究

作者：王珏钰中国人民解放军空军军医大学

学位级别：硕士

研究背景:龋病主要是细菌介导的牙体硬组织慢性进行性破坏性疾病,成牙本质细胞位于牙髓的最外侧,呈高柱状紧密排列,是牙髓组织防御细菌入侵的第一道屏障。成牙本质细胞发挥其屏障功能的关键因素在于其完善的胞间连接,目前研究表明成牙... 详细信息

研究背景:龋病主要是细菌介导的牙体硬组织慢性进行性破坏性疾病,成牙本质细胞位于牙髓的最外侧,呈高柱状紧密排列,是牙髓组织防御细菌入侵的第一道屏障。成牙本质细胞发挥其屏障功能的关键因素在于其完善的胞间连接,目前研究表明成牙本质细胞具有4种细胞连接,包括紧密连接、缝隙连接、桥粒及黏附连接。成牙本质细胞胞间连接除具有屏障功能以外,还被认为与成牙本质细胞的分化、矿化相关。在上皮细胞中,分离缺陷基因3(Partitioning defective-3,Par3)对上皮细胞胞间连接的结构和功能的调控作用是近年来的研究热点,而成牙本质细胞具有和上皮细胞类似的胞间连接结构。然而成牙本质细胞内是否表达Par3分子,该分子对成牙本质细胞胞间连接的作用如何尚不清楚。此外,在细菌的入侵下牙髓组织将启动一系列复杂的损伤修复反应,包括细胞的增殖、粘附、迁移及细胞外基质的分泌、矿化等生物学活动,成牙本质细胞形成反应性牙本质是该损伤修复反应中极为重要的一环。在肿瘤细胞中报道Par3可通过影响细胞连接介导细胞的表观遗传学变化,然而在成牙本质细胞中Par3是否也存在类似的生物学作用及潜在的分子机制如何也需进一步阐明。目的:1.检测Par3于生理状态及炎症状态下在成牙本质细胞中的表达情况2.探究Par3对小鼠成牙本质细胞系细胞(Odontoblast lineage cells,OLCs)胞间连接的调控作用3.探究极性相关分子Par3在OLCs生物学行为中的作用4.基于全转录组测序技术分析Par3对OLCs的生物学作用及潜在的分子机制研究方法:第一部分:通过免疫荧光实验分别观察Par3在大鼠牙髓组织及OLCs中的表达及分布;利用Western Blot检测炎症状态下OLCs中Par3的表达情况;利用siRNA敲低OLCs中Par3的表达后,通过透射电镜观察Par3表达下调前后OLCs胞间连接结构的变化;利用Western Blot及细胞免疫荧光技术检测Par3表达下调前后细胞连接相关分子带状闭合蛋白-1(Zonula occludens-1,ZO-1)的表达及分布情况。第二部分:通过 EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)、Transwell 及流式细胞术等检测 Par3 表达下调对成牙本质细胞增殖、迁移、周期及凋亡等生物学功能的影响;此外,对Par3表达下调组及对照组OLCs矿化诱导28天,利用Western Blot、茜素红及碱性磷酸酶染色观察Par3对OLCs矿化能力的影响。第三部分:通过全转录组测序技术筛选Par3表达下调后的差异表达基因,结合Dr.Tom系统进行生物信息学分析矿化相关差异基因及信号通路,利用Western Blot检测AKT磷酸化水平及利用RT-qPCR检测编码14-3-3蛋白的mRNA表达水平。研究结果:1.Par3在大鼠牙髓组织中与成牙本质细胞的分布位置存在重叠。体外条件下Par3广泛分布于成牙本质细胞内,并在细胞膜周围呈现高表达,并且炎症诱导可降低成牙本质细胞Par3的表达水平。2.Par3表达下调后小鼠成牙本质细胞胞间连接结构松散,细胞连接相关蛋白ZO-1的表达下调且其分布由细胞膜转移至细胞质;3.Par3表达下调组与对照组相比,细胞增殖、迁移能力增强,凋亡及矿化能力受抑制;4.测序结果一共筛选出2996个差异基因(| log2(FC)|>0,Q细胞周期、缝隙连接及PI3K-AKT等负责调控细胞增殖、迁移及炎症反应的信号通路。5.Par3表达下调可通过促进AKT的磷酸化过度激活PI3K-AKT通路;结论:1.Par3表达下调可通过影响ZO-1的表达及分布破坏OLCs胞间连接。2.Par3表达下调尽管可促进细胞的增殖及迁移等防御修复能力然而细胞诱导形成矿化组织的能力却被抑制。3.Par3分子可能通过与14-3-3蛋白相互作用活化PI3K-AKT通路而影响成牙本质细胞系细胞的细胞连接及诸多生物学功能。

关键词：成牙本质细胞反应性牙本质 Par3 细胞连接