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细胞永生化的研究进展

畜牧与兽医 2022年第2期54卷 141-146页

作者：闫美淋雍芳赵淑琴郜原甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 甘肃动物生殖生理及繁殖调控重点实验室甘肃兰州730070

永生细胞系具有无限增殖能力,其自我更新能力、增殖分化模式、基因表达调控以及癌症等疾病研究一直以来也是分子细胞生物学领域的研究热点与难点。细胞永生化是指细胞在体外培养的时候,由于自身基因改变或者外界因素刺激,例如细胞周期... 详细信息

永生细胞系具有无限增殖能力,其自我更新能力、增殖分化模式、基因表达调控以及癌症等疾病研究一直以来也是分子细胞生物学领域的研究热点与难点。细胞永生化是指细胞在体外培养的时候,由于自身基因改变或者外界因素刺激,例如细胞周期检查点通路受损、端粒酶的再次激活上调、原癌基因激活等影响,使细胞分裂加快,并突破了自我衰老与凋亡机制,从而实现了无限增殖,可以进行长期传代培养。目前,科研人员已成功建立了很多不同物种、不同组织来源的永生化细胞系,在研究真核细胞发育、分子调控机制等方面发挥了重要作用,但是细胞发生永生化的分子机制和影响细胞永生的因素还需要继续探索。本文综述了目前已发现的部分细胞永生化机制,以及各种不同组织来源永生化细胞系的重要性,为揭示更多的细胞永生化机制和细胞系建立方法提供基础。

关键词：细胞永生化端粒胚胎干细胞

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细胞永生化技术研究进展

野生动物学报 2021年第2期42卷 585-590页

作者：刘育昆邹登朗祁得胜刘忠浩都玉蓉马建滨青海师范大学生命科学学院青海省青藏高原生物多样性形成机制与综合利用重点实验室西宁810008

细胞永生化作为细胞生物学研究的热点,在细胞实验中发挥很大的作用,使目的细胞永生化,建立永生化细胞系,可以更好地开展细胞实验。细胞永生化技术的成功应用,不仅为生物实验研究提供了有力的工具,也为有效准确地诊断疾病提供了新道路。... 详细信息

细胞永生化作为细胞生物学研究的热点,在细胞实验中发挥很大的作用,使目的细胞永生化,建立永生化细胞系,可以更好地开展细胞实验。细胞永生化技术的成功应用,不仅为生物实验研究提供了有力的工具,也为有效准确地诊断疾病提供了新道路。本文在细胞永生化基本机制的基础上,就细胞永生化技术方法、检测方法以及存在的问题等方面研究进展进行概述。

关键词：细胞永生化永生化技术方法永生化检测方法

细胞永生化机制及不同细胞永生化方法研究进展

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东南大学学报（医学版） 2015年第5期34卷 821-824页

作者：黄今杨融辉马海英中国医科大学基础学院病理生理学教研室辽宁沈阳110001

永生化细胞是一种在理化刺激、基因突变、病毒感染等外界刺激下,可以在体外无限增殖的不衰老细胞株。细胞永生化机制有放射性因素、端粒-端粒酶激活、病毒基因转染及抑癌基因受抑制等学说。作者在总结细胞永生化原理的基础上阐述不同组... 详细信息

永生化细胞是一种在理化刺激、基因突变、病毒感染等外界刺激下,可以在体外无限增殖的不衰老细胞株。细胞永生化机制有放射性因素、端粒-端粒酶激活、病毒基因转染及抑癌基因受抑制等学说。作者在总结细胞永生化原理的基础上阐述不同组织细胞永生化的技术方法及生长状态。

关键词：细胞永生化体外培养端粒酶病毒癌基因文献综述

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一种高效细胞永生化载体的构建及其功能分析

农业生物技术学报 2013年第8期21卷 984-992页

作者：宋子仪杨浩高倩李岳峰史新娥庞卫军杨公社西北农林科技大学动物科技学院动物脂肪沉积与肌肉发育实验室

细胞永生化在基因功能验证、转基因动物制作、药物研发等领域发挥关键作用,然而由于细胞永生化难度大,所以到目前为止仅有少数种类的细胞被永生化。为了解决这一技术问题,本研究拟通过构建人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase revers... 详细信息

细胞永生化在基因功能验证、转基因动物制作、药物研发等领域发挥关键作用,然而由于细胞永生化难度大,所以到目前为止仅有少数种类的细胞被永生化。为了解决这一技术问题,本研究拟通过构建人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的慢病毒表达载体来提高原代细胞永生化效率,从而最终建立细胞系。本研究先用PCR的方法从载体pBABE-neo-hTERT上扩增获得hTERT基因片段,然后将其连接到慢病毒骨架载体pLV-puro上,最终获得目标载体pLV-puro-hTERT。为了验证这一载体的有效性,先将其包装成慢病毒颗粒,再对猪原代前体脂肪细胞进行侵染,然后用嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,之后检测了阳性克隆的端粒酶的活性、细胞增殖和分化能力。研究结果表明,与对照组相比,pLV-puro-hTERT慢病毒侵染猪前体脂肪细胞,可使细胞端粒酶mRNA的表达水平上调12倍,并极显著的促进了猪前体脂肪细胞的增殖,同时不影响猪前体脂肪细胞的分化。本研究所构建的慢病毒表达载体能够有效的提高原代细胞的增殖能力,同时保持了原代细胞的生物学特性,这将为进一步永生化原代细胞提供便利。

关键词：细胞永生化 hTERT 慢病毒猪前体脂肪细胞

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SV40与细胞永生化

中国修复重建外科杂志 2000年第3期14卷 170-174页

作者：解慧琪杨志明屈艺华西医科大学附属第一医院骨科成都610041 华西医科大学医学分子生物学开放实验室

目的　探讨 SV40如何介导细胞永生化 ,与细胞永生化现象相关的因素及它们的作用。方法　复习近十年有关细胞永生化与复制衰老现象研究的文章 ,对 SV40介导的细胞永生化及其相关因素进行综述。结果细胞永生化涉及病毒 DNA的整合 ,端粒酶... 详细信息

目的　探讨 SV40如何介导细胞永生化 ,与细胞永生化现象相关的因素及它们的作用。方法　复习近十年有关细胞永生化与复制衰老现象研究的文章 ,对 SV40介导的细胞永生化及其相关因素进行综述。结果细胞永生化涉及病毒 DNA的整合 ,端粒酶的活化 ,生长抑制因子的失活等多方面的因素 ,它们的作用机制密切相关。结论　细胞永生化的研究有助于更广义地理解细胞生物学现象 ,并可作为标准细胞在细胞工程及组织工程的研究中发挥作用。

关键词：细胞永生化 SV40 端粒酶组织工程

端粒酶反转录酶基因介导的人骨髓基质干细胞永生化研究

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解放军医学杂志 2010年第10期35卷 1230-1234页

作者：滕勇胡蕴玉王捍国王臻关玉成高杰兰州军区乌鲁木齐总医院骨一科乌鲁木齐830000 第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032 第四军医大学口腔医院牙体科西安710032

目的建立永生化人骨髓基质干细胞系,为组织工程提供种子细胞库及标准化细胞系。方法取单克隆培养的人骨髓基质干细胞,采用脂质体转染法将人端粒酶反转录酶(hTERT)基因导入细胞,G418筛选后获得阳性克隆,体外连续扩增培养,RT-PCR检测转染... 详细信息

目的建立永生化人骨髓基质干细胞系,为组织工程提供种子细胞库及标准化细胞系。方法取单克隆培养的人骨髓基质干细胞,采用脂质体转染法将人端粒酶反转录酶(hTERT)基因导入细胞,G418筛选后获得阳性克隆,体外连续扩增培养,RT-PCR检测转染细胞内hTERT基因的整合与表达。取转染后第100代细胞,用成骨诱导条件培养基(普通培养基加地塞米松、β-甘油磷酸、维生素C)、软骨诱导条件培养基(普通培养基加地塞米松、TGF-β、维生素C)、心肌细胞诱导条件培养基(普通培养基加5-氮胞苷)分别向成骨、软骨、心肌细胞诱导培养。于培养后第7、14、21、28天,采用免疫细胞化学染色观察成骨细胞诱导Ⅰ型胶原、骨钙素的表达;采用茜素红染色观察钙结节形成;采用免疫细胞化学染色观察软骨细胞诱导Ⅱ型胶原的表达,同时进行甲苯胺蓝染色;采用免疫细胞化学染色观察心肌细胞诱导横纹肌肌动蛋白的表达,分析细胞系向成骨、软骨及心肌细胞分化的能力。结果 hTERT稳定转染入人骨髓基质干细胞,转化细胞端粒酶表达阳性。转化细胞在体外长期连续培养下生长良好,已传至136代。取第100代细胞进行诱导分化,结果显示其能向成骨、软骨及心肌细胞分化。结论外源性hTERT的导入可致人骨髓基质干细胞永生化,并维持成体干细胞的多向分化特性,可为组织工程提供种子细胞库并为组织工程种子细胞研究提供标准化细胞。

关键词：基因转染细胞永生化端粒,末端转移酶骨髓基质干细胞

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细胞永生化技术及其应用研究进展

生命科学研究 2011年第4期15卷 363-368页

作者：庄金秋梅建国王文秀沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院中国山东滨州256600 吉林大学畜牧兽医学院中国吉林长春130062

细胞永生化是目前细胞生物学研究的热点之一.引起细胞永生化的因素很多,其中端粒酶在这一过程中发挥重要作用.细胞永生化技术在未来的成功应用,不仅为生物制品的研究与开发提供了有力工具,而且也为疾病的诊断与治疗提出了新的思路.就细... 详细信息

细胞永生化是目前细胞生物学研究的热点之一.引起细胞永生化的因素很多,其中端粒酶在这一过程中发挥重要作用.细胞永生化技术在未来的成功应用,不仅为生物制品的研究与开发提供了有力工具,而且也为疾病的诊断与治疗提出了新的思路.就细胞永生化技术的原理、方法、途径及其应用等方面研究进展作一综述.

关键词：细胞永生化端粒酶应用

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细胞永生化技术及其应用研究进展

细胞永生化技术及其应用研究进展

中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会

作者：庄金秋梅建国王文秀沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院吉林大学畜牧兽医学院

细胞永生化是目前细胞生物学研究的热点之一。引起细胞永生化的因素很多,其中端粒酶在这一过程中发挥重要作用。细胞永生化技术在未来的成功应用,不仅为生物制品的研究与开发提供了有力工具,而且也为疾病的诊断与治疗提出了新的思路。... 详细信息

细胞永生化是目前细胞生物学研究的热点之一。引起细胞永生化的因素很多,其中端粒酶在这一过程中发挥重要作用。细胞永生化技术在未来的成功应用,不仅为生物制品的研究与开发提供了有力工具,而且也为疾病的诊断与治疗提出了新的思路。该文就细胞永生化技术的原理、方法、途径及其应用等方面研究进展作一综述。

关键词：细胞永生化端粒酶应用

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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不同动物原代细胞的永生化方法及其应用

中国兽医杂志 2023年第8期59卷 97-103页

作者：侯碧巍董书餐刘德武孙宝丽李耀坤郭勇庆邓铭柳广斌华南农业大学动物科学学院广东广州510642

细胞永生化是一项运用多种手段人为地将不同类型的外源性永生化基因导入目的细胞,打破细胞的正常分裂周期并使其具备无限增殖能力的技术,现已被广泛应用于不同动物原代细胞中。为了探究促使细胞永生化的几种常用方法如何介导细胞永生化... 详细信息

细胞永生化是一项运用多种手段人为地将不同类型的外源性永生化基因导入目的细胞,打破细胞的正常分裂周期并使其具备无限增殖能力的技术,现已被广泛应用于不同动物原代细胞中。为了探究促使细胞永生化的几种常用方法如何介导细胞永生化,不同方法之间的相关因素有何关联和区别,以及这些方法如何应用到不同动物的细胞中,本文通过对几种促使细胞永生化的作用机制、方法及其在不同动物细胞(如猪单核细胞/巨噬细胞系、牛肠上皮细胞系、牦牛瘤胃上皮细胞系、鸡前脂肪细胞系、鸡胚胎成纤维细胞系、鸭肠上皮细胞系、兔黑色素细胞系和斑节虾淋巴细胞系等)中的应用现状进行概述,发现细胞永生化主要涉及端粒与端粒酶激活、病毒基因[如人类疱疹病毒(EBV)、猴空泡病毒40(SV40)和人乳头瘤病毒(HPV)基因]的转染整合,以及运用Cre-LoxP介导的重组系统对细胞进行可回复性永生化等多个方法,且其核心都是对细胞端粒酶活性的调控。此外,不同动物细胞可通过上述多种方法实现永生,但是也有极少部分细胞受其自身性质的影响,只可选择某一特定方法。因此,对不同动物原代细胞永生化方法及其应用进行研究,不仅可为建立具备功能性的永生化细胞系提供理论依据,也为其在基础分子生物学研究和生物医药领域更广泛的潜在应用提供科学资料。

关键词：原代细胞细胞永生化端粒酶病毒基因可回复性永生化