检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=细胞毒性T细胞1型"

共 1 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

粒细胞样髓源性抑制细胞自噬对小鼠Lewis肺癌移植瘤发展的影响

粒细胞样髓源性抑制细胞自噬对小鼠Lewis肺癌移植瘤发展的影响

引用

作者：郭红叶江苏大学

学位级别：硕士

目的观察Lewis lung carcinoma(LLC)细胞株来源的细胞培养上清(tumor cellconditioned medium,tCCM)对粒细胞样髓源性抑制细胞(granulocytic myeloidderived suppressor cells,G-MDSC)自噬的影响;研究肿瘤微环境下的G-MDSC自噬对其自身生存与免疫抑制功能的影响;研究G-MDSC自噬对小鼠Lewis肺癌移植瘤发展的影响。方法1.G-MDSC分离及鉴定构建小鼠Lewi s肺癌移植瘤模型,磁珠分选脾脏G-MDSC,标记细胞表面Ly-6G、Ly-6C和CD11b后,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测其纯度;将分离得到的细胞涂片后进行瑞士-吉姆萨复合染液染色,观察细胞形态。***细胞株来源的tCCM的制备Lewis细胞用含有10%NBCS(newborn calf serum)的DMEM高糖培养液培养,待细胞汇合度达到90%的时候,用无血清的DMEM替换培养液,培养24h后,收集上清。***抑制G-MDSC凋亡与上调ROS(Reactive oxygen species,ROS)用不同浓度的tCCM处理G-MDSC12h、24h,Annexin V/PI染色法,检测细胞凋亡情况,DCFDA染色后FCM检测对细胞效应分子ROS的影响。***促进G-MDSC自噬的检测磁珠分选得到的G-MDSC在含有tCCM和氯喹(Chloroquine,CQ)的10%FBS(fatal bovine serum)RPMI 1640刺激2h、4h,收集细胞,提取总蛋白,WB(western blot)检测自噬小体形成标志物LC3Ⅱ(light chain 3Ⅱ)的水平。5.自噬抑制G-MDSC凋亡的检测磁珠分选获得G-MDSC,在含有tCCM和3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA自噬的抑制剂)RPMI 1640中培养12h、24h,收集细胞,Annexin V/PI染色,FCM检测自噬对G-MDSC生存的影响。6.自噬上调G-MDSC功能的检测将G-MDSC在含tCCM和3-MA的RPMI 1640中培养。培养12h,收集细胞,与小鼠脾脏CD4t细胞共培养,培养体系中加入抗CD3/CD28抗体,形成CD4t细胞增殖体系,通过3H-胸腺嘧啶核苷([3H]-thymidine,3H-td R)掺入法检测CD4t细胞增殖情况。培养12h、24h,收集细胞,DCFDA染色后FCM检测ROS的表达;提取总蛋白检测精氨酸酶(arginase 1,ARG1)活性。7.G-MDSC自噬对小鼠Lewis肺癌移植瘤发展的影响构建小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,分别在16、23d,尾静脉注射3-MA阻断自噬的G-MDSC,观察小鼠移植瘤生长情况,FCM检测分泌IFN-γ的辅助性t细胞1型(helper t cell type 1,th1)和细胞毒性t细胞1型(cytotoxic t lymphocytes type 1,tc1)的比例。结果1.在体外,将不同浓度的tCCM加入到对G-MDSC培养体系中,FCM检测刺激12h、24h对细胞生存与效应分子ROS的影响。结果显示tCCM有利于G-MDSC在体外存活,存在浓度依赖效应;tCCM上调G-MDSCs的效应分子ROS的水平。2.将G-MDSC在含有tCCM和氯喹(Chloroquine,CQ)RPMI 1640中培养2h、4h,WB检测细胞中LC3Ⅱ水平。结果显示与对照组相比,tCCM处理2、4h上调了胞内LC3Ⅱ水平,表明了肿瘤微环境中,G-MDSC自噬的水平会上调(P1)。3.选取tCCM占培养体系体积的1/2来研究自噬对G-MDSC的影响,用3-MA抑制自噬,体外培养24h,观察抑制自噬对G-MDSC在体外存活的影响。结果显示,与1/2tCCM组相比,1/2tCCM+3-MA组活细胞比例降低,结果具有统计学差异(Pt细胞增殖的影响,结果显示1/4tCCM+3-MA组与1/4tCCM组相比,在抑制了自噬后,G-MDSC对CD4t细胞增殖的抑制作用变弱,结果具有统计学差异(P1/2tCCM+3-MA组与1/2tCCM组相比,G-MDSC抑制CD4t细胞增殖作用变弱,结果也具有统计学差异(Pt细胞增殖的抑制作用。5.体外培养12h,提取细胞总蛋白,检测ARG1活性结果显示,1/2tCCM+3-MA组与1/2tCCM组相比,在抑制了自噬后,G-MDSC细胞中ARG1活性降低,结果具有统计学差异(P1)。6.

关键词：粒细胞样髓源性抑制细胞肿瘤细胞培养上清细胞自噬辅助性t细胞1型细胞毒性t细胞1型精氨酸酶1 活性氧

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：