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细胞松弛素B对K562细胞脱核作用的观察

第一军医大学学报 2002年第12期22卷 1087-1089页

作者：危敏马文丽毛向明宋艳斌张宝冯春琼郑文岭第一军医大学分子生物学研究所广东广州510515 广州军区总医院分子肿瘤学研究所广东广州510010

目的观察细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对K562细胞形态和增殖能力的影响.方法以人红白血病K562细胞为细胞模型,经不同浓度的CB作用不同时间(4～48 h),通过相差显微镜和Giemsa染色观察细胞形态学改变.细胞计数法绘制细胞不同条件下的... 详细信息

目的观察细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对K562细胞形态和增殖能力的影响.方法以人红白血病K562细胞为细胞模型,经不同浓度的CB作用不同时间(4～48 h),通过相差显微镜和Giemsa染色观察细胞形态学改变.细胞计数法绘制细胞不同条件下的生长曲线.结果细胞形态发生显著变化,处理组细胞出现不同程度的脱核,细胞生长受到显著抑制.结论CB对K562细胞的脱核作用与其浓度呈正相关,随作用时间延长而增强;秋水仙素有显著提高CB诱发细胞脱核的作用;CB对细胞的增殖能力有显著抑制作用.

关键词：细胞松弛素 K562细胞细胞脱核秋水仙素细胞增殖白血病

细胞松弛素对嗜热四膜虫皮层细胞骨架蛋白的影响(英文)

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水生生物学报 2002年第5期26卷 501-504页

作者：庞延斌李书强华东师范大学生物系上海200062

测定了细胞松弛素B对嗜热四膜虫BF1 株和BF5 在生殖接合期的皮层骨架蛋白 ,尤其是在接合子接合膜形成和原核交换阶段影响甚大。作者发现CB处理后 ,与对照组相比较 ,皮层骨架蛋白 1 46KD消失 ,2 7KD、43KD、47KD和 1 74KD含量下降 ,32KD... 详细信息

测定了细胞松弛素B对嗜热四膜虫BF1 株和BF5 在生殖接合期的皮层骨架蛋白 ,尤其是在接合子接合膜形成和原核交换阶段影响甚大。作者发现CB处理后 ,与对照组相比较 ,皮层骨架蛋白 1 46KD消失 ,2 7KD、43KD、47KD和 1 74KD含量下降 ,32KD、41KD、5 1KD和 5 4KD保持不变。结果显示 ,松弛素B对微纤毛蛋白 2 7KD、43KD、47KD、1 46KD和 1 74KD有影响。

关键词：细胞松弛素嗜热四膜虫皮层细胞骨架蛋白

细胞松弛素B对山羊颞下颌关节盘细胞及细胞骨架肌动蛋白的影响

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口腔医学研究 2016年第8期32卷 775-779页

作者：张文霞康宏吕玮李燕梅钟妮包广洁兰州大学口腔医学研究所甘肃兰州730000 西北民族大学甘肃省口腔疾病研究重点实验室甘肃兰州730030 西北民族大学口腔医学国家民委重点实验室甘肃兰州730030

目的:肌动蛋白作为细胞骨架的重要结构蛋白,其与细胞形态和功能有着密切关系。因此本实验通过肌动蛋白抑制剂-细胞松弛素B检测细胞骨架完整性与山羊颞下颌关节盘细胞功能变化的关系。方法:检测不同浓度的细胞松弛素B对关节盘细胞增殖及... 详细信息

目的:肌动蛋白作为细胞骨架的重要结构蛋白,其与细胞形态和功能有着密切关系。因此本实验通过肌动蛋白抑制剂-细胞松弛素B检测细胞骨架完整性与山羊颞下颌关节盘细胞功能变化的关系。方法:检测不同浓度的细胞松弛素B对关节盘细胞增殖及形态的影响并得出最适浓度;观察最适浓度作用后细胞凋亡、粘附及肌动蛋白形态和mRNA表达的变化。结果:2μmol/L浓度的细胞松弛素B对关节盘细胞增殖活性具有明显抑制作用,但随培养时间延长抑制率明显降低,无促进凋亡作用;细胞粘附率明显下降;与对照组相比,处理组细胞突起结构逐渐消失,形态变圆,肌动蛋白纤维丝明显的断裂,荧光强度降低;肌动蛋白mRNA表达降低。结论:细胞松弛素B可能是通过破坏肌动蛋白的结构抑制了颞下颌关节盘细胞形态及功能。

关键词：颞下颌关节盘细胞松弛素肌动蛋白细胞骨架

细胞松弛素B用于全血或分离淋巴细胞培养改进离体微核试验的方法

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国际放射医学核医学杂志 1994年第5期 214-215页

０９５细胞松弛素Ｂ用于全血或分离淋巴细胞培养改进离体微核试验的方法［英］／ＥｌｌａｒｄＳ…／／Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ．－１９９３，８（４）．－３１７～３２０为比较全血和分离淋巴细胞两种培养体系的敏感性和代谢能力，对两... 详细信息

０９５细胞松弛素Ｂ用于全血或分离淋巴细胞培养改进离体微核试验的方法［英］／ＥｌｌａｒｄＳ…／／Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ．－１９９３，８（４）．－３１７～３２０为比较全血和分离淋巴细胞两种培养体系的敏感性和代谢能力，对两个供体的全血和其分离淋巴细胞进行培...

关键词：淋巴细胞全血白细胞微核试验离体细胞松弛素细胞分裂抑素

细胞松弛素D对大鼠脊髓星形胶质细胞水通道蛋白和内向整流性钾通道4.1基因表达的影响

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中国康复理论与实践 2014年第7期20卷 616-620页

作者：杜文佳汪玉良党跃修雷栓虎黄良增汪静马靖琳安丽萍兰州大学第二医院骨科甘肃兰州市730030 甘肃省骨关节病重点实验室甘肃兰州市730030

目的探讨不同浓度细胞松弛素D(CytD)对大鼠脊髓星形胶质细胞骨架重构,水通道蛋白(AQP)1、AQP4及内向整流性钾通道4.1(Kir4.1)基因表达的影响。方法原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞,加CytD 0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml... 详细信息

目的探讨不同浓度细胞松弛素D(CytD)对大鼠脊髓星形胶质细胞骨架重构,水通道蛋白(AQP)1、AQP4及内向整流性钾通道4.1(Kir4.1)基因表达的影响。方法原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞,加CytD 0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml、0.80μg/ml和1.00μg/ml共培养2 h、12 h和24 h。MTT法检测细胞增殖情况;鬼笔环肽联合Hoechst 33342套染后激光共聚焦显微镜下观察共培养2 h后细胞骨架重构情况;RT-PCR法检测共培养2 h时AQP1、AQP4和Kir4.1 mRNA表达水平。结果细胞生存率随CytD浓度升高和作用时间延长而减少。CytD使大鼠脊髓星形胶质细胞微丝发生解聚、弯曲,但极性未失。CytD 0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml上调AQP1、AQP4和Kir4.1 mRNA表达。结论适当浓度CytD可以重建星形胶质细胞骨架,上调大鼠脊髓星形胶质细胞AQP1、AQP4和Kir4.1基因表达。

关键词：星形胶质细胞细胞松弛素细胞骨架水通道蛋白内向整流性钾通道脊髓大鼠

细胞松弛素化合物Chaetoglobosin F的结构修饰研究

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细胞松弛素化合物Chaetoglobosin F的结构修饰研究

作者：谭庆伟扬州大学

学位级别：硕士

天然产物作为新药先导化合物的重要来源,其独特的药理活性对某些人类疾病具有较好的治疗效果。但大多数天然产物因较强的毒副作用、水溶性差、活性选择性较差、代谢不稳定等缺点,而并不具备直接成药的特性。因此,对活性天然产物进行结... 详细信息

天然产物作为新药先导化合物的重要来源,其独特的药理活性对某些人类疾病具有较好的治疗效果。但大多数天然产物因较强的毒副作用、水溶性差、活性选择性较差、代谢不稳定等缺点,而并不具备直接成药的特性。因此,对活性天然产物进行结构修饰和改造,消除不必要的官能团、引入对靶点作用具有选择性的基团和封闭代谢位点等,可以大大提高其成药性,为新药研发提供更多可选择的先导药物。细胞松弛素(Cytochalasins)是一类由Phomopsis sp.、Chaetomium sp.和Aspergillinia sp.等真菌代谢产生的具有聚酮-氨基酸杂合骨架结构的天然产物,因具有抗肿瘤、免疫抑制、神经细胞保护等多种药理活性而备受关注,是一类极具潜力的先导化合物。Chaetoglobosin F是从白茅内生菌***发酵产物中分离得到的一个细胞松弛素化合物,前期研究发现,其具有抗肿瘤、抗病毒、神经保护等作用。本学位论文尝试对Chaetoglobosin F的结构进行修饰和改造,以期获得结构较为新颖的Chaetoglobosin F衍生物,丰富细胞松弛素类化合物库,并为新药研发提供更多的先导化合物。根据Chaetoglobosin F的结构特征,本学位论文采用不同类型的化学反应对其进行结构修饰和改造,包括:C-20羟基的氧烷基化反应、乙酰化反应、卤化反应、消除反应和酯化反应;C-19/20水解反应;C-20羟基及C-13/14双键的氧化反应;C-13/14和C-17/18双键的烯烃复分解缩环反应;C-19/23羰基的还原反应等。实验中利用LC-MS进行反应分析,最终成功发生10个反应,获得11个衍生物,具体如下:通过m-CPBA氧化反应得到吲哚结构C-2'、3'双键氧化断裂的衍生物1;通过NBS溴代反应得到C-6/7环氧烯丙醇重排及C-2'/5'位溴代的衍生物2;通过三乙基氧鎓六氯化锑氧化反应得到C-6/7环氧重排及C-20羟基氧化的衍生物3;通过MeI甲基化反应得到1'/2位氮甲基化的衍生物4;通过HWE烯基化反应得到C-20碳链延伸的衍生物5;通过Petasis试剂反应和HG-Ⅱ催化剂反应都得到C-20羟基氧化的衍生物6和7;通过NaBH4还原反应得到C-19/23羰基还原的衍生物8和9,并成功培养获得衍生物9的单晶;通过钯-碳催化氢化反应得到双键还原的衍生物10;通过异氰酸苄酯反应得到C-20羟基酯化的衍生物11。进一步采用HR-ESI-MS、1D,2D-NMR、X-ray单晶衍射及文献比对的方法对衍生物进行鉴定结构,并采用SciFinder进行结构查新,衍生物1-5和8-11被鉴定为新化合物,衍生物6和7被鉴定为已知物Chaetoglobosin C。本学位论文还采用改进Ellman's法对化合物1、2、3、4、5、6、8和9进行乙酰胆碱酯酶抑制活性测定,他克林为阳性对照药。结果发现,在100 μg/mL浓度下,化合物1、2、3、4、5、6、8和9对AChE表现出一定的抑制作用,其抑制率分别为35.23%、15.42%、25.53%、14.04%、17.96%、35.34%、24.17%和 33.23%。阳性对照药他克林具有显著的 AChE抑制活性,其IC50值为0.7 μg/mL。

关键词：天然产物细胞松弛素 ChaetoglobosinF 结构修饰

细胞松弛素类化合物体外抗氧化活性及其构效关系初步研究

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细胞松弛素类化合物体外抗氧化活性及其构效关系初步研究

作者：鞠婧婧扬州大学

学位级别：硕士

内生真菌(EndophytEC fungi)是指其在生活史的某一段时期生活在植物组织内,对植物组织没有引起明显病害症状的真菌。内生真菌种类繁多,能产生结构多样的活性代谢产物,近年来已成为国内外资源开发利用的研究热点之一。本文所研究的八种... 详细信息

内生真菌(EndophytEC fungi)是指其在生活史的某一段时期生活在植物组织内,对植物组织没有引起明显病害症状的真菌。内生真菌种类繁多,能产生结构多样的活性代谢产物,近年来已成为国内外资源开发利用的研究热点之一。本文所研究的八种细胞松弛素(cytochalasin, Cyt)类化合物是从白茅内生菌球毛壳菌Chaetomium globosum IFB-WZQ和青皮内生菌拟茎点霉Phomopsis sp. IFB-E060固体发酵产物中分离获得的。分别是：chaetoglobosin F (编号WQ-1)、chaetoglobosin Fex (WQ-2)、chaetoglobosin E (WQ-3)、cytoglobosin A (WQ-4)、penochalasin C (WQ-6)、 isochaetoglobosin D (WQ-9)、cytochalasin H (QS-1)和18-methoxycytochalasin J (QS-2)。它们都具有相似的氢化异吲哚-1-酮结构母核,在10位有吲哚或苯环取代。早期在对编号为QS-1化合物抗癌活性研究时,对其它活性也进行了筛选,发现该化合物具有较好的抗氧化活性,且对PC12细胞损伤有一定潜在的保护作用。查阅文献未见有类似的报道。鉴于该类化合物拥有相同的母核,其差异主要在母核和大环的取代基上。为此,本研究应用体外抗氧化模型、H2O2和MPP+损伤细胞模型,考察八种Cyt类化合物是否具有抗氧化活性?其活性强度与结构的关系如何?对自由基及神经毒素引起的细胞损伤是否具有保护作用?通过对该类化合物抗氧化活性构效关系规律的揭示,将为寻找具有强抗氧化活性的先导化合物提供实验资料,对植物内生菌这一新型药用资源的开发利用提供有益思路。主要实验结果如下：1.清除自由基能力测定方法：(1)DPPH自由基测定：采用微量比色法测定DPPH自由基吸光度,计算清除率。Cyt类化合物的浓度为10-6,10-4,10-4,10-3,10-2,10-1,5×10-1mmol/L, VE为阳性药。(2)ABTS自由基测定：采用ABTS法微量比色测定ABTS自由基吸光度,计算清除率。以Trolox(维生素E的类似物)为标准对照,计算Trolox当量总抗氧化能力(TEAC)。Cyt类化合物的浓度为10-6,10-5,10-4,10-3,10-2mmol/L。(3)应用SPSS17.0计算半抑制浓度(EC50),反映药物的效价强度,Scott法计算最大效应(Emax),反映药物的效能。采用单因素方差分析和SNK检验,进行抗氧化能力排序。结果：(1)DPPH自由基清除能力：最大清除率Emax>90%的有：WQ-9、QS-1和WQ-1;Emax=35%～60%:WQ-2、WQ-4、WQ-3和QS-2;通过对ECso和Emax统计分析,八种Cyt类化合物的抗氧化作用效价强度排序为：WQ-9=QS-1=WQ-1>WQ-2> WQ-4=WQ-3>QS-2。效能排序与上述一致。WQ-6EC50无法计算,无清除自由基能力。(2)ABTS自由基清除能力：依据EC50,八种化合物清除ABTS自由基能力排序为：QS-1=WQ-9=WQ-1>WQ-2>WQ-3>QS-2>WQ-4,WQ-6EC50无法计算;依据Emax,效能排序为：QS-1=WQ-9=WQ-1>WQ-2=WQ-3=QS-2=WQ-4>WQ-6。QS-1的TEAC最大,达到Trolox的746倍,其次是WQ-1和WQ-9为373倍,WQ-4最低为0.001倍,WQ-6无法计算。结论：除WQ-6外,其余七种化合物均有不同程度的体外抗氧化活性,其中,QS-1、WQ-9和WQ-1活性最强。2.抗H202损伤细胞作用研究方法：通过对不同浓度(50～800μmol/L)H2O2作用不同时间(2,3,4,5,6h)考察,确定H2O2制备PC12细胞损伤模型条件。MTT法测定细胞存活率;比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性。分组：(1)对照组：含0.01%DMSO的DMEM溶液;(2)模型组：200μmol/LH2O2溶液;(3)阳性药物组：1000μmol/L VE溶液;(4)Cyt类化合物组：浓度为0.001,0.0025,0.005,0.01,0.05,0.1,0.2μmol/L。EC50(μmol/L)和Emax计算以及统计分析同上。结果：(1)H2O2损伤PC12细胞模型：以200μmol/L H2O2溶液作用PC12细胞4h,细胞存活率为41.3%±3.6%(P<0.001),培养基上清液中LDH活性出对照组16.9±1.4U/dl上升为109.1±2.5U/dl(P<0.05)。表明H

关键词：细胞松弛素细胞损伤过氧化氢 MPP+ 抗氧化构效关系

细胞松弛素Pericoannosins C-E的全合成研究

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细胞松弛素Pericoannosins C-E的全合成研究

作者：樊一君辽宁石油化工大学

学位级别：硕士

细胞松弛素是一类具有诸如抗肿瘤、抗菌和抗病毒等生物学活性的天然产物。它们具有十分丰富的骨架多样性,可以分为双环骨架细胞松弛素、三环骨架细胞松弛素以及多环骨架细胞松弛素和多聚体等。Pericoannosins C-E便是该家族中的一个重... 详细信息

细胞松弛素是一类具有诸如抗肿瘤、抗菌和抗病毒等生物学活性的天然产物。它们具有十分丰富的骨架多样性,可以分为双环骨架细胞松弛素、三环骨架细胞松弛素以及多环骨架细胞松弛素和多聚体等。Pericoannosins C-E便是该家族中的一个重要组成部分。该家族天然产物迄今为止有两大类的合成策略,其一是仿生的分子内D-A反应的合成策略;另一个便是分子间的D-A反应。本文便是按照第一种合成策略对这样三个天然产物进行合成。分析了Pericoannosins C-E这类天然产物6/6/5三环结构,首先采用Grob碎裂化对D-A前体进行构建,之后按照仿生的策略经过分子内D-A反应构建出所需的萘环骨架,之后经过Aldol反应以及一些后续氧化态的调整,希望能够完成了Pericoannosins C-E的首次全合成。但令人遗憾的是最终结果与天然产物并不一致。之后通过手性助剂来控制D-A反应的对应选择性来得到单一手性的D-A产物,不过结果仍然差强人意。最终通过天然产物单晶结构修正了最初结构鉴定过程中的一些错误,之后在这个基础上对路线中一些条件进行修改,最终成功完成了细胞松弛素类天然产物pericoannosins C-E的首次全合成。本文工作一方面开发了一条简介高效的路线对这类含有萘环的6/6/5三环骨架天然产物进行合成,另一方面,结合之前对Periconiasins A-E的合成工作,完整的验证了这样一类细胞松弛素的生源途径,对后续该类细胞松弛素的研究提供了坚实的基础。

关键词：细胞松弛素天然产物全合成 Pericoannosin

细胞松弛素Aspochalasin生物合成途径研究

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细胞松弛素Aspochalasin生物合成途径研究

作者：刘璇西南大学

学位级别：硕士

细胞松弛素是一类具有广泛生物活性和复杂化学结构的聚酮-氨基酸杂合类真菌次级代谢产物。细胞松弛素类化合物通过与激动蛋白丝的结合影响细胞移动、胞质分裂等细胞活动,因此,其具有良好的抗肿瘤、抗真菌、抗寄生虫和抗HIV病毒等活性,... 详细信息

细胞松弛素是一类具有广泛生物活性和复杂化学结构的聚酮-氨基酸杂合类真菌次级代谢产物。细胞松弛素类化合物通过与激动蛋白丝的结合影响细胞移动、胞质分裂等细胞活动,因此,其具有良好的抗肿瘤、抗真菌、抗寄生虫和抗HIV病毒等活性,展现了良好的药物先导化合物潜力,具有重要的开发价值。细胞松弛素具有11-14个碳的大环并异吲哚酮环的三环核心骨架。但是,由于参入氨基酸种类的不同,聚酮链具有不同程度的氧化修饰,以及大环被氧化断裂开环或形成多环体系等修饰,细胞松弛素的结构呈现多样性。除此而外,其它化学结构与细胞松弛素结构的聚合,更是极大地丰富了其结构的复杂性。对细胞松弛素生物合成的研究,了解其合成规律与机制,可以为后续采用途径工程或代谢工程方法,定向创制生物活性更好的细胞松弛素类化合物奠定基础。近20年来,细胞松弛素的生物合成基因簇已被广泛报道。细胞松弛素生物合成基因簇除了细胞色素P450单氧化酶、核黄素依赖的单加氧酶、氧化还原酶、氧乙酰基转移酶等后修饰基因以外,还有由高度保守的聚酮-非核糖体肽合成酶、烯醇还原酶、α/β-水解酶和Diels–Alder环化酶四个基因组成的核心骨架基因盒。基于众多生物合成基因簇的确定,细胞松弛素类化合物的后修饰途径已被广泛研究与阐明,但是(1)由核心骨架基因盒形成的细胞松弛素的最初骨架结构是什么?(2)多聚化或多环化类型的细胞松弛素化合物的形成机制是什么?等细胞松弛素合成过程中的基本科学问题并未得到解决。基于上述科学问题,我们选择亮氨酸类细胞松弛素aspochalasin类化合物作为研究对象,采用异源生物合成策略,取得如下结果:(1)在黄柄曲霉(Aspergillus flavipes)KLA03中鉴定了负责aspochalasin类化合物合成的基因簇aspo。该基因簇共有八个基因,除了高度保守的聚酮-非核糖体肽合成酶(Aspo E)、烯醇还原酶(Aspo H)、α/β-水解酶(Aspo C)、Diels–Alder环化酶(Aspo B)外,还有核黄素依赖的氧化酶(Aspo A)、细胞色素P450单氧化酶(Aspo F)、短链脱氢/还原酶(Aspo D)和转录调节因子(Aspo G);(2)通过在构巢曲霉(Aspergillus nidulans)中异源表达的方式,解析了aspochalasin母核骨架和终产物的完整合成途径。其中由aspo EHCB合成的aspochalasin Z为aspochalasin类化合物的核心骨架结构;(3)通过体内与体外实验,相继阐明了Aspo F,Aspo A和Aspo D的催化顺序与催化功能。其中Aspo F负责aspochalasin Z上C和C位惰性碳骨架的连续C-H羟化反应,分别生成TMC169和aspochalasin D;Aspo A催化罕见的异构化反应,并依赖于烯醇互变反应,巧妙地消除了TMC169和aspochalasin D中C-C双键,将二者转变为aspochalasin Q和aspochalasin P;Aspo D催化位置选择性的还原反应,能高效地将aspochalasin Q和aspochalasin P中C位的酮基还原生成periconiasin A和flavichalasine G,其中aspochalasin P可能为其最适底物;(4)在酸性条件下,三环的TMC169和aspochalasin D会分别自发形成多环的F14945-D1和aspergilin PZ,且以TMC169为例,我们发现酸性条件下,其可与腺嘌呤和半胱氨酸发生自发聚合形成多聚产物,但aspochalasin Q在相同条件下并不能发生上述多环形成与聚合反应。由此说明,多环与多聚类aspochalasin化合物的生成依赖于C-酮-C-C不饱和双键的高反应性;(5)Aspo A的催化机理,F14945-D1和aspergilin PZ的自发转化的形成机理均得到合理推测。综上所述,通过合成基因体内异源表达、化合物体内喂养和生物酶体外转化等方法,本课题重点阐明了aspo基因簇中各基因的催化功能和aspochalasin类化合物的完整合成途径,并证实了aspochalasin Z为aspochalasin类化合物的核心骨架结构;发现并验证了Aspo A催化双键异构化反应的功能,揭示了分离所获得的aspochalasin类多环与聚合化合物可能为自发产物的后续衍生产物,其中Aspo A催化的异构化反应是aspochalasin类化合物天然途径与自发途径的转化开关。本课题的研究结果,为了解细胞松弛素类化合物结构多样性和复杂性的转化关系,及后续细胞松弛素类化合物的代谢工程改造提供了明确且可参考的研究基础。

关键词：细胞松弛素生物合成非天然产物异构化异源表达