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中国医药工业杂志 2005年第4期 219-252页

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4株鸭源肠球菌的鉴定和致病性

中国兽医学报 2007年第6期27卷 821-824,829页

作者：韩梅红谷长勤胡薛英周诗其杨峻邵华斌程国富华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430209

对临床分离的4株鸭源肠球菌郑1株、郑2株、郑3株、北京株和1株粪肠球菌参考菌株进行了系统鉴定，并用SDS-PAGE和Western-blot技术对各菌株细胞壁蛋白图谱进行比较分析。结果5个菌株的形态、染色、生理生化特性均与粪肠球菌特性一致；它... 详细信息

对临床分离的4株鸭源肠球菌郑1株、郑2株、郑3株、北京株和1株粪肠球菌参考菌株进行了系统鉴定，并用SDS-PAGE和Western-blot技术对各菌株细胞壁蛋白图谱进行比较分析。结果5个菌株的形态、染色、生理生化特性均与粪肠球菌特性一致；它们均对青霉素、万古霉素和庆大霉素敏感而对四环素耐药；5个菌株人工感染雏鸭及小白鼠均有致病性，但各菌株间致病力存在差异，北京株最强，参考株最弱，其余3株介于北京株和参考株之间；各菌株的细胞壁蛋白经SDS-PAGE在相对分子质量33370～131690之间均显示数十条蛋白带，其中郑2株和北京株在相对分子质量66840处均有1条染色较深的蛋白带，而用Western-blot分析显示抗北京株胞壁蛋白抗体只能检测到北京株相对分子质量为66840的抗原蛋白。以上结果表明，这5个被检菌株为致病性粪肠球菌，且致病性以北京株最强。

关键词：鸭肠球菌鉴定致病性细胞壁蛋白

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小麦细胞壁钙调素的研究初报

科学通报 1988年第8期33卷 624-626页

作者：叶正华孙大业郭季芳中国科学院植物研究所河北师范大学中国科学院植物研究所北京石家庄

在植物细胞内钙离子作为第二信使通过钙调素（Calmodulin,简称CaM）而起调节作用,已有许多研究证实和评述。植物体内大部分的Ca是存在于细胞壁中,Ca和细胞壁的相互作用发挥着重要的生理功能,如细胞壁结构的稳定性,酸性生长,离子交换特性... 详细信息

在植物细胞内钙离子作为第二信使通过钙调素（Calmodulin,简称CaM）而起调节作用,已有许多研究证实和评述。植物体内大部分的Ca是存在于细胞壁中,Ca和细胞壁的相互作用发挥着重要的生理功能,如细胞壁结构的稳定性,酸性生长,离子交换特性,向地性,细胞壁酶活性的调节等。在植物细胞壁中Ca的功能是否通过CaM起调节作用,目

关键词：细胞壁蛋白胚芽鞘黄化 PDE 提取液水溶性钙调素麦类作物小麦

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水稻纹枯病菌胞外蛋白酶特性研究

植物保护 2010年第4期36卷 55-59页

作者：范文艳文景芝马建陈瑾石园园黑龙江八一农垦大学农学院大庆163319 东北农业大学农学院哈尔滨150030

植物病原菌产生蛋白水解酶被认为是病原菌侵染寄主的一个重要策略。作者对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani Kühn)产生的胞外蛋白酶的特性进行了研究。结果表明,水稻纹枯病菌产生一个分子量约为49.5ku的胞外蛋白酶。该酶对胰蛋白酶专... 详细信息

植物病原菌产生蛋白水解酶被认为是病原菌侵染寄主的一个重要策略。作者对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani Kühn)产生的胞外蛋白酶的特性进行了研究。结果表明,水稻纹枯病菌产生一个分子量约为49.5ku的胞外蛋白酶。该酶对胰蛋白酶专一性底物Benz-Phe-Val-Arg-NA有较高的活性,并能从羧基端降解Arg和Lys。胰蛋白酶抑制剂对该酶活性有较强的抑制作用,表明该蛋白酶是一种类胰蛋白酶。在离体试验下,该蛋白酶可以降解水稻细胞壁蛋白并释放羟脯氨酸。SDS-PAGE电泳分析显示,至少有4个多肽被降解,分子量范围分别在14.4～20.1、20.1～31ku和31～43ku范围内。说明该胞外蛋白酶具有降解水稻细胞壁的能力,因此,该蛋白酶可能在水稻纹枯病菌的致病过程中起重要作用。

关键词：水稻纹枯病菌细胞壁蛋白胞外蛋白酶致病性

金黄色葡萄球菌A蛋白的原核表达及其功能研究

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中国兽医杂志 2009年第10期45卷 20-22页

作者：刘洪贵杨颗粒武瑞王建发张敏林玉才黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)是细胞壁抗原的成分,占整个细胞壁蛋白的6.7%,通过胞壁肽聚糖以共价键与之结合.该蛋白常被作为一种免疫学工具广泛应用,可用于单克隆抗体或多克隆抗体的纯化;检测和提纯IgM;与多种报告分子(荧光染料、酶标记、... 详细信息

金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)是细胞壁抗原的成分,占整个细胞壁蛋白的6.7%,通过胞壁肽聚糖以共价键与之结合.该蛋白常被作为一种免疫学工具广泛应用,可用于单克隆抗体或多克隆抗体的纯化;检测和提纯IgM;与多种报告分子(荧光染料、酶标记、生物素、胶体金、放射性标记等)偶联后用于组织化学、Western、ELISA等的抗体检测;去除肿瘤患者和带瘤动物血清中的封闭抗体,从而降低血清对淋巴细胞介导的细胞毒的封闭作用.

关键词：金黄色葡萄球菌A蛋白原核表达细胞壁蛋白抗体检测多克隆抗体单克隆抗体放射性标记 ELISA

一株高效产酸菌株的分离、鉴定与生物特性研究

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食品工业 2013年第3期34卷 124-127页

作者：张欢欢马成杰周围曾小波程国军中南民族大学生命科学学院武汉430074 光明乳业股份有限公司技术中心上海200072

为选择性能优良的乳酸菌用于乳制品的生产,从固体奶酪中分离出一株具有高效产酸能力的乳酸菌（3-J）。通过对该菌株的16S rDNA进行测序和同源性比较,发现它与多个乳杆菌菌株的同源性达到99%。对其细胞壁蛋白、产酸能力、人工模拟胃液耐... 详细信息

为选择性能优良的乳酸菌用于乳制品的生产,从固体奶酪中分离出一株具有高效产酸能力的乳酸菌（3-J）。通过对该菌株的16S rDNA进行测序和同源性比较,发现它与多个乳杆菌菌株的同源性达到99%。对其细胞壁蛋白、产酸能力、人工模拟胃液耐受能力以及产胞外多糖能力等特性进行了研究。结果表明：利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术分析出乳酸菌的细胞壁蛋白在27.0~97.0 kDa范围内的峰度较高。菌株在对数期pH急剧下降,酸度急剧上升,酸度最高的产酸时间为30 h。菌株在人工模拟胃液环境中存活率达到14.67%,具有耐酸能力。乳酸菌发酵液中含有胞外多糖（EPS）,其含量可达到25.90 mg/L。选择性能优良的乳酸菌对生产高质量的乳制品具有重要的意义。

关键词：系统发育细胞壁蛋白产酸能力模拟胃液胞外多糖(EPS)

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作物根系对干旱胁迫逆境的适应性研究进展

土壤与环境 2002年第4期11卷 430-433页

作者：朱维琴吴良欢陶勤南浙江大学环境与资源学院浙江杭州310029

主要就作物根系的形态性状、根系提水作用、生理代谢、根系细胞壁蛋白及其生长性能与干旱胁迫间的关系作了综述;指出应加强对干旱逆境下根系发育及根系生长性状变化上的遗传机理研究。

关键词：作物根系干旱胁迫逆境适应性研究进展形态性状细胞壁蛋白

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大豆疫霉PsHSFsL基因的功能研究

大豆疫霉PsHSFsL基因的功能研究

作者：李坤缘安徽农业大学

学位级别：硕士

大豆疫霉(Phytophthora sojae)是一种破坏性极强的植物病原卵菌,其引致的大豆疫病是大豆生产上的毁灭性土传病害。为了探讨大豆疫霉的分子致病机制,本研究在课题组前期转录组测序结果的基础上,选取了一个可能参与调控大豆疫霉休止孢萌... 详细信息

大豆疫霉(Phytophthora sojae)是一种破坏性极强的植物病原卵菌,其引致的大豆疫病是大豆生产上的毁灭性土传病害。为了探讨大豆疫霉的分子致病机制,本研究在课题组前期转录组测序结果的基础上,选取了一个可能参与调控大豆疫霉休止孢萌发的基因Ps HSFs L,并构建了其沉默和过表达2种质粒载体,再使用PEG介导的原生质体转化方案,将2种质粒分别转入大豆疫霉;通过含有G418抗性的培养基来筛选出备选转化子,再利用定量验证,挑选出效率较好的沉默与过表达转化子各2株。通过对这4株转化子进行生长表型测定、微观形态的观察和致病力强弱的研究,明确该基因在大豆疫霉中的功能,并得出以下结论:1、基因Ps HSFs L的沉默与过表达,对大豆疫霉孢子囊的形态大小没有显著影响,而该基因的沉默,会导致大豆疫霉休止孢出芽的形态出现分叉、畸形。2、基因Ps HSFs L的沉默,会显著降低大豆疫霉胞外蛋白漆酶的活性,而基因Ps HSFs L的过表达,会显著提高大豆疫霉分泌的总蛋白和漆酶的含量。3、胁迫条件对转化子生长速率的影响结果显示,基因Ps HSFs L的沉默与过表达转化子,仅对活性氧的胁迫表现出显著敏感。4、通过测定比较野生型与这4株转化子对大豆植株、大豆叶片、黄豆芽的致病力,结果表明,基因Ps HSFs L的沉默,会显著降低大豆疫霉的致病力。综上所述,我们证实了该基因与大豆疫霉休止孢出芽的正确形成有关,并参与调控大豆疫霉对大豆的致病性,这证实了大豆疫霉的细胞壁蛋白在致病性中的重要性。本研究结果为研究该类蛋白质在大豆疫霉侵染大豆期间的作用机制提供了理论依据,也为研究大豆疫霉的致病机理提供了新的研究思路和方法。

关键词：大豆疫霉 PsHSFsL 细胞壁蛋白休止孢萌发致病力

生物质质外体蛋白与纤维素酶的协同作用关系研究及其提取工艺初探

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生物质质外体蛋白与纤维素酶的协同作用关系研究及其提取工艺初探

作者：卢迪北京化工大学

学位级别：硕士

本论文主要研究了玉米秸秆在储存过程中质外体蛋白含量的变化情况，及其与Penicilllum expansum纤维素酶的协同作用关系，从一个全新的视角来探讨植物细胞壁成分对纤维素酶解的影响因素。并初步研究了质外体蛋白的提取工艺。研究表明... 详细信息

本论文主要研究了玉米秸秆在储存过程中质外体蛋白含量的变化情况，及其与Penicilllum expansum纤维素酶的协同作用关系，从一个全新的视角来探讨植物细胞壁成分对纤维素酶解的影响因素。并初步研究了质外体蛋白的提取工艺。研究表明，随着储存时间的延长，可抽提的玉米秸秆质外体蛋白的数量日趋减少，6个月时蛋白含量只有新鲜时的34.71％，之后蛋白降解或失活速度有所减缓，蛋白含量趋于稳定。储存玉米秸秆质外体蛋白没有内源性纤维素酶活力，而新鲜玉米秸秆有内源性EG活性，但它的稳定性较差，储存半年后基本降解或失活。质外体蛋白与***纤维素酶之间有明显的协同作用关系，这种协同作用关系，随着储存时间的延长而减弱。当反应体系中质外体蛋白浓度约为1mg／ml时，储存秸秆质外体蛋白对PFA活力、棉花酶活力、β-葡萄糖苷酶活力有最大增效作用，增效率分别达到95.32％、102.06％和96.6％，而对CMCase却表现出抑制作用，最大抑制率为49.52％。从质外体蛋白与***纤维素酶各组分相互关系上看，这种协同作用关系，主要表现为质外体蛋白-EG-BG的协同作用，而对在纤维素酶解过程中其起核心作用的CBH酶活力没有影响。消除内源性EG的影响后，新鲜玉米秸质外体蛋白对PFA活力、棉花酶活力、β-葡萄糖苷酶活力的促进率，以及CMCase的抑制率均高于储存秸秆的质

关键词：质外体蛋白纤维素酶纤维素酶活力细胞壁蛋白提取工艺

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寄生疫霉菌PnGR1基因功能的初步研究

寄生疫霉菌PnGR1基因功能的初步研究

作者：刘丹丹西北农林科技大学

学位级别：硕士

卵菌是一类独特的真核微生物，形态类似真菌，但在进化上与硅藻、褐藻接近，共属于茸鞭生物界。疫霉属（Phytophthora）是卵菌最重要的属之一，疫霉菌所引起的植物病害常具有流行性和毁灭性，被称为疫病。疫霉菌有营养菌丝、产孢菌丝、... 详细信息

卵菌是一类独特的真核微生物，形态类似真菌，但在进化上与硅藻、褐藻接近，共属于茸鞭生物界。疫霉属（Phytophthora）是卵菌最重要的属之一，疫霉菌所引起的植物病害常具有流行性和毁灭性，被称为疫病。疫霉菌有营养菌丝、产孢菌丝、游动孢子、休止孢和萌发的休止孢等几个特征明显的无性发育阶段阶段，其侵染循环一般起始于游动孢子阶段，包括与寄主接触、粘附在寄主表面、入侵寄主、菌丝定殖和营养获取以及产孢等一系列过程。 PnGR1（Phytophthora nicotianae glycine-rich repeat containing protein1）基因是在研究烟草疫霉菌（又称寄生疫霉菌）休止孢萌发阶段转录特征时鉴定到的一个特异性高表达的基因，是一个至少包括7个序列上高度相似的基因的家族成员。本研究通过生物信息学分析、亚细胞定位、基因过表达等方法对PnGR1基因在无性发育和致病过程中的作用进行了研究，主要取得了以下结果： 1. PnGR1蛋白与致病疫霉菌（P. infestans）碳水化合物结合蛋白PITG19548序列高度相似，和原鸡的弹性蛋白（elastin）也有一定的序列相似性，具有信号肽，定位在细胞外，富含疏水性的GVAGVGVGVP模体序列，具有O-糖基化位点。 2．通过序列相似性搜索和同源性分析得到22个PnGR1蛋白的同源蛋白，均来自于卵菌，命名为GR（glycine-rich repeat containing protein）蛋白家族。对这些同源基因进行系统发育分析发现PnGR1基因与寄生疫霉菌的PpGR2基因和辣椒疫霉菌（***）的7个PcGR基因亲缘关系最近。GR基因的进化表现出同质化（Homogenization）现象，可能与致同进化和净化选择有关。 3.利用莴苣霜霉菌（Bremia lactucae）Hsp70基因的启动子和Ham34基因的终止子构建PnGR1与GFP基因的融合表达载体，通过PEG/CaCl2介导的原生质体方法转化寄生疫霉菌，得到625个转化子，并最终筛选得到13个在菌丝生长和无性产孢过程中表现稳定的转化子。在转化子中，PnGR1-GFP融合蛋白组成型表达。观察转化子不同发育时期绿色荧光信号的分布情况，发现菌丝、厚垣孢子和卵孢子中，绿色荧光在细胞壁上累积;孢子囊中，绿色荧光在乳突处累积;休止孢中，绿色荧光在特定结构处累积，萌发后，绿色荧光在芽管的顶端大量累积。此外，在一定条件下，菌丝中PnGR1-GFP融合蛋白会特异性累积，累积部位的菌丝会产生凸起或吸器状结构。 4.对休止孢的萌发率和萌发休止孢的粘附性测定，发现PnGR1-GFP转化子的萌发率略高于野生型和对照，粘附性则显著强于野生型和对照。在烟草叶片上利用游动孢子悬液和菌丝块接菌发现，PnGR1-GFP转化子的致病性较野生型和对照均有所提高。 5.采用发夹结构作为沉默构建，通过寄生疫霉菌遗传转化，得到274个PnGR1基因的原初沉默转化子。通过检测转化子中siRNA的累积，对51个原初沉默转化子进行了筛选，结果发现小分子RNA区域没有任何条带，而几乎所有转化子的大分子RNA区域均有一条明显的条带。采用萌发率、粘附性两个指标对37个转化子进行筛选后发现转化子3-9的粘附性有所下降。对26个转化子的致病性进行测试发现，转化子2-22的致病性有所下降。

关键词：寄生疫霉菌重复模体粘附细胞壁蛋白致病性