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抗HBcAg人源性单链抗体细胞内表达及其抗病毒复制的实验研究

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病毒学报 2002年第3期18卷 205-210页

作者：朱明华顾广玉段凌浔李芳梅肖农戴益民第二军医大学长海医院病理科上海200433

应用人源性抗HBcAg单链抗体细胞内表达技术 ,探讨抗HBV复制基因治疗的应用价值。应用噬菌体展示和基因重组技术 ,从HBV感染的外周血淋巴细胞克隆了人源性抗HBcAg单链抗体 ,并重组至逆转录病毒载体。以人肝癌细胞smmc - 772 1和PLC/PRF/... 详细信息

应用人源性抗HBcAg单链抗体细胞内表达技术 ,探讨抗HBV复制基因治疗的应用价值。应用噬菌体展示和基因重组技术 ,从HBV感染的外周血淋巴细胞克隆了人源性抗HBcAg单链抗体 ,并重组至逆转录病毒载体。以人肝癌细胞smmc - 772 1和PLC/PRF/5为靶细胞进行基因共转染 ,分别测定实验组细胞上清中的HBsAg和HBeAg ,与对照组做比较 ,观察抗HBcAg单链抗体细胞内表达的抗病毒治疗作用。结果显示 ,在急性HBV感染的细胞株中 ,抑制病毒复制效率为 4 9%～ 6 1% ,在慢性病毒感染细胞 ,抑制率为 4 1%～ 5 4 %。实验结果表明 ,应用单链抗体细胞内表达技术 ,在抗病毒治疗研究中具有潜在的应用价值。应对HBV的 4个开放阅读框架编码产物进行全面的对比研究 ,以发现抑制效率高。

关键词：抗HBcAg人源性单链抗体细胞内表达抗病毒复制实验研究乙型肝炎病毒核心抗原细胞内免疫基因治疗

不同载体表达核酶对HBV mRNA细胞内表达的阻断作用

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世界华人消化杂志 2003年第2期11卷 161-164页

作者：李谨革连建奇贾战生冯志华聂青和王九平黄长形白雪帆中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西省西安市710038

目的:探讨多位点自剪切核酶及突变核酶对细胞内HBVmRNA的切割作用.方法:构建5个不同的多位点核酶及突变核酶的真核表达载体,将他们分别与乙型肝炎病毒全基因序列共转染HepG2细胞,用ELISA,共聚焦定量及图像分析的方法观察多位点核酶在细... 详细信息

目的:探讨多位点自剪切核酶及突变核酶对细胞内HBVmRNA的切割作用.方法:构建5个不同的多位点核酶及突变核酶的真核表达载体,将他们分别与乙型肝炎病毒全基因序列共转染HepG2细胞,用ELISA,共聚焦定量及图像分析的方法观察多位点核酶在细胞内对HBVmRNA切割作用.结果:构建的真核表达载体在细胞内确可表达出多位点核酶,核酶及突变核酶在细胞内对HBV基因的表达均有抑制作用,不同表达载体的抑制率不同,以tRNA启动子的表达载体抑制效率最高,达81%,突变核酶亦有部分反义RNA的抑制效果.结论:抗乙型肝炎病毒核酶在细胞内可抑制HBV基因的表达,不同表达载体其核酶的表达效率不同.

关键词：不同载体表达核酶 HBV mRNA 细胞内表达阻断作用真核表达载体 tRNA启动子乙型肝炎病毒

重组人促红细胞生成素在COS-7细胞内表达的研究

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川北医学院学报 1998年第4期13卷 6-9页

作者：敬保迁刘洪涛川北医学院微生物学教研室北京医科大学分子免疫研究室

目的：研究不同真核载体对人促红细胞生成素ｃＤＮＡ的表达效率。方法：人促红细胞生成素ｃＤＮＡ分别用真核表达载体ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＩ、ｐＡｄＣＩ进行重组，脂质体法转化ＣＯＳ７细胞，以ＴＦ１细胞检测ＥＰＯ的表达活性。... 详细信息

目的：研究不同真核载体对人促红细胞生成素ｃＤＮＡ的表达效率。方法：人促红细胞生成素ｃＤＮＡ分别用真核表达载体ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＩ、ｐＡｄＣＩ进行重组，脂质体法转化ＣＯＳ７细胞，以ＴＦ１细胞检测ＥＰＯ的表达活性。结果：感染ｐｃＤＮＡ３ＥＰＯ，ｐｃＤＩＥＰＯ，和ｐＡｄＣＩＥＰＯ的ＣＯＳ７细胞培养上清中人促红细胞生成素活性分别为０５×１０２，１５×１０３和２２×１０２。结论：已构建成可表达具生物活性的重组人促红细胞生成素的真核表达克隆。

关键词：重组红细胞生成素 COS-7 细胞内表达

人乳头瘤病毒6bL1双顺反子载体的构建及其在哺乳动物细胞内的表达

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中华皮肤科杂志 2011年第5期44卷 347-349页

作者：邓列华殷董胡云峰田静计雄飞范洪涛郭秀枝林泽赵永铿暨南大学附属第一医院皮肤科广州510630 陕西省人民医院皮肤科广州市天河区慢性病防治中心皮肤性病科福建医科大学附属第一医院皮肤科 Medical Department of Johnson Radnor PA USA

目的构建尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6b型晚期基因（HPV6bLI）的双顺反子表达载体，并使其在哺乳动物细胞内表达，以期建立含有HPV6bLI的细胞模型。方法表达质粒pEGFP—HPV6bL1经双酶切纯化后与经过相同双酶切的真核表达质粒pIRES2-EGFP... 详细信息

目的构建尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6b型晚期基因（HPV6bLI）的双顺反子表达载体，并使其在哺乳动物细胞内表达，以期建立含有HPV6bLI的细胞模型。方法表达质粒pEGFP—HPV6bL1经双酶切纯化后与经过相同双酶切的真核表达质粒pIRES2-EGFP连接，酶切鉴定，挑选阳性克隆进行测序。重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP转染进小鼠成纤维细胞（NIH3T3），荧光显微镜下观察EGFP蛋白的表达，RT—PCR检测HPV6b L1 mRNA的生成。结果成功构建含HPV6bL1的重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP。重组体成功转染进NIH3T3细胞，并用G418筛选。同时荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白的表达。进一步进行RT—PCR，检测到HPV6bL1mRNA的生成。结论成功构建携带HPV6bL1的重组体pIRES2-HPV6bL1-EGFP并转染入NIH3T3细胞。经荧光倒置显微镜观察及RT—PCR方法检测证明HPV6bLI在NIH3T3细胞内成功表达。

关键词：人乳头瘤病毒6b型细胞内表达哺乳动物双顺反子载体 NIH3T3细胞绿色荧光蛋白双顺反子表达载体真核表达质粒

MicroRNA在肝胆细胞内的表达与相关性的研究进展

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吉林医学 2014年第5期35卷 1053-1054页

作者：张春平李立陈亦明李旺王海雷昆明医科大学云南昆明650031 昆明市第一人民医院云南昆明650100

近年来,miRNA以其特有的基因、生物学特性及潜在的生物医学应用价值,在治疗各项难治性疾病中越来越引人注意,研究miRNA在胆管上皮细胞再生修复中的调控作用机制,从而解决胆道并发症--＆quot;阿格硫斯之踵＆quot;医学难题.1993年,LEE等... 详细信息

近年来,miRNA以其特有的基因、生物学特性及潜在的生物医学应用价值,在治疗各项难治性疾病中越来越引人注意,研究miRNA在胆管上皮细胞再生修复中的调控作用机制,从而解决胆道并发症--＆quot;阿格硫斯之踵＆quot;医学难题.1993年,LEE等在秀丽新小杆线虫发育调控研究中发现了第一个miRNA[1],7年后Pasquinelli在对线虫发育调控中发现了let-7[2].目前已有500余个miRNA在人体内发现.miRNA在肝胆疾病中对细胞凋亡、增殖、细胞周期和细胞分化发育均发挥着调控作用,通过检测胆道疾病组织中miRNA的表达水平情况,了解其调控的靶基因,进而对胆道疾病进行基因水平等进一步治疗.现报告如下.

关键词：肝胆疾病相关性细胞内表达细胞调控干细胞再生修复

HSP70L1介导的细胞内致敏DC疫苗高效诱导抗肿瘤CTL

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中国肿瘤生物治疗杂志 2017年第4期24卷 I0001-I0003页

作者：刘书逊易琳马玲江金霞宋丽君刘娟曹雪涛第二军医大学免疫学研究所医学免疫学国家重点实验室上海200433 中国医学科学院北京协和医院基础医学研究所免疫学教研室医学分子生物学国家重点实验室北京100005

在细胞内作为分子“伴侣”的热激蛋白（HSP）在细胞外具有免疫佐剂的活性，能够辅助其所“伴侣”的抗原分子激发抗原特异性免疫应答。此特性依赖于抗原提呈细胞的存在，尤其是树突状细胞（DC）：其机制在于，HSP通过与TLR2／4、CD91等... 详细信息

在细胞内作为分子“伴侣”的热激蛋白（HSP）在细胞外具有免疫佐剂的活性，能够辅助其所“伴侣”的抗原分子激发抗原特异性免疫应答。此特性依赖于抗原提呈细胞的存在，尤其是树突状细胞（DC）：其机制在于，HSP通过与TLR2／4、CD91等受体相互作用，激发抗原提呈细胞的炎性信号和抗原的交叉递呈。基于此特性，利用各种形式的HSP和抗原分子的复合抗原致敏DC是肿瘤免疫治疗的一个重要策略，已在大量基础和临床研究中得到了良好的验证。然而，合有HSP的复合抗原致敏的DC，具有制备成本高、质控和检定复杂以及安全性风险增加等对临床应用不利的阻碍。以基因修饰手段在抗原提呈细胞内表达HSP和抗原的复合蛋白，在上述环节比细胞外致敏途径更具有优势，但细胞内的HSP从机制上来讲将失去“佐剂”效应，达不到抗肿瘤的终极目的，然而细胞内致敏途径的基因修饰手段是否对所有的HSP成员都不适用，目前的研究有限。

关键词：细胞内表达 DC疫苗抗肿瘤抗原特异性免疫应答抗原提呈细胞介导抗原分子肿瘤免疫治疗

shRNA干扰Jurkat细胞株MDM2表达对细胞生物特性的影响

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临床与实验病理学杂志 2005年第3期21卷 347-350页

作者：朱有凯林汉良顾霞张萌吴红阳许湘中山大学中山医学院基础医学院病理学教研室广州510080

目的研究MDM2基因与白血病细胞生物学特性的关系。方法应用pSilencer4.1CMVneo构建MDM2shRNA表达载体pMDM2shRNA,采用脂质体将载体导入Jurkat细胞,利用G418筛选出稳定表达shRNA细胞后,行RTPCR和Westernblot等技术检测细胞MDM2表达水平... 详细信息

目的研究MDM2基因与白血病细胞生物学特性的关系。方法应用pSilencer4.1CMVneo构建MDM2shRNA表达载体pMDM2shRNA,采用脂质体将载体导入Jurkat细胞,利用G418筛选出稳定表达shRNA细胞后,行RTPCR和Westernblot等技术检测细胞MDM2表达水平、基础生长曲线、细胞周期变化以及UV照射后细胞生长变化。结果发现转染pMDM2shRNA的细胞MDM2mRNA及蛋白质的表达均下降>50%,细胞的生长减慢,出现一定程度的G1～S期阻滞,DNA损伤后细胞恢复较慢。结论MDM2基因表达下降后,可导致细胞增殖减慢以及降低损伤修复的能力;细胞内表达shRNA可长期敲低靶基因的表达,可作为较理想的基因功能研究细胞模型。

关键词： Jurkat细胞株 RNA干扰生物特性 MDM2mRNA 细胞生物学特性 Western MDM2基因 RT-PCR 基因功能研究 DNA损伤 shRNA 细胞内表达方法应用表达载体稳定表达技术检测 blot 生长曲线生长变化 uV照射周期变化基因表达损伤修复

细胞内抗体(内抗体)及其在神经系统变性疾病的应用进展

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中风与神经疾病杂志 2011年第2期28卷 181-183页

作者：车丽赫杨宇吴江吉林大学白求恩第一医院神经内科吉林长春130021

细胞内抗体（intracellular antibody,intrabody）又称内抗体,是一种能够在细胞内表达,并通过定位序列定位于胞内亚细胞结构（如胞浆、胞核、内质网和线粒体等）,与靶抗原结合并发挥其生物活性的一类抗体。胞内抗体技术主要应用在抑制... 详细信息

细胞内抗体（intracellular antibody,intrabody）又称内抗体,是一种能够在细胞内表达,并通过定位序列定位于胞内亚细胞结构（如胞浆、胞核、内质网和线粒体等）,与靶抗原结合并发挥其生物活性的一类抗体。胞内抗体技术主要应用在抑制病毒复制特别是HIV-1复制、肿瘤基因治疗方面,已经逐渐拓展到中枢神经系统疾病、

关键词：细胞内抗体神经系统变性疾病应用中枢神经系统疾病 HIV-1复制抑制病毒复制胞内抗体技术细胞内表达

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棕榈酸对胰岛β细胞激素敏感性脂肪酶的影响

中华胰腺病杂志 2010年第1期10卷 57-59页

作者：王咏波陈璐璐田源李燕华中科技大学同济医学院附属协和医院内分泌科武汉430022

长期的高脂会造成胰岛β细胞胰岛素分泌障碍和三酰甘油（TG）的堆积．而过度堆积的TG是脂毒性的重要表现。激素敏感性脂肪酶（HSL）是催化TG水解的限速酶，在胰岛β细胞内表达和活化，并可能与胰岛素分泌及β细胞TG堆积有关。但是高脂对... 详细信息

长期的高脂会造成胰岛β细胞胰岛素分泌障碍和三酰甘油（TG）的堆积．而过度堆积的TG是脂毒性的重要表现。激素敏感性脂肪酶（HSL）是催化TG水解的限速酶，在胰岛β细胞内表达和活化，并可能与胰岛素分泌及β细胞TG堆积有关。但是高脂对HSL的影响并不十分清楚。因此，本实验以不同浓度棕榈酸培养胰岛β细胞，观察其HSL的变化。

关键词：激素敏感性脂肪酶胰岛β细胞棕榈酸胰岛素分泌障碍细胞内表达三酰甘油 HSL 脂毒性