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姜黄素通过调节组织蛋白酶K改善高脂诱导C57BL/6J小鼠骨结构和骨质量的实验研究

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中国药理学通报 2017年第10期33卷 1446-1451页

作者：马如风王丽丽左加成朱如愿刘海霞柳辰玥李琳陈贝贝赵丹丹莫芳芳牛建昭高思华张东伟北京中医药大学中医学院北京100029 北京中医药大学中药学院北京100029 北京中医药大学糖尿病研究中心北京100029

目的探讨姜黄素对高脂诱导的C57BL/6J小鼠骨结构和骨质量的影响及其与组织蛋白酶K(cathepsin k)表达的相关性。方法用姜黄素(50 mg·kg^(-1))干预高脂饲料诱导的C57BL/6J小鼠骨质疏松模型12周后,取小鼠股骨和胫骨,分别用HE染色、茜素红... 详细信息

目的探讨姜黄素对高脂诱导的C57BL/6J小鼠骨结构和骨质量的影响及其与组织蛋白酶K(cathepsin k)表达的相关性。方法用姜黄素(50 mg·kg^(-1))干预高脂饲料诱导的C57BL/6J小鼠骨质疏松模型12周后,取小鼠股骨和胫骨,分别用HE染色、茜素红染色和番红O/固绿染色观察骨组织微结构变化、骨代谢以及骨发育情况;用免疫组化法和Western blot法检测小鼠骨组织中组织蛋白酶K蛋白的表达。结果病理形态学结果显示,姜黄素能明显改善高脂诱导的C57BL/6J小鼠的骨组织微结构,促进软骨发育和改善骨钙化程度;骨生物力学结果表明,姜黄素能明显提高高脂诱导C57BL/6J小鼠的骨强度;免疫组化和Western blot检测结果显示,姜黄素能够明显抑制小鼠骨组织中的组织蛋白酶K表达。结论姜黄素能提高高脂诱导C57BL/6J小鼠的骨强度,改善骨微结构,其发挥骨保护作用机制之一可能与抑制组织蛋白酶K的表达相关。

关键词：姜黄素骨微结构骨生物力学骨钙化组织蛋白酶K C57BL/6J小鼠

组织蛋白酶K与慢性应激诱导的小鼠血管内膜增生的性别关联性研究

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组织蛋白酶K与慢性应激诱导的小鼠血管内膜增生的性别关联性研究

作者：胡玥桂林医学院

学位级别：硕士

目的:在慢性应激与颈动脉损伤双模型中,研究慢性应激诱导的血管新生内膜增生中组织蛋白酶K（Cathepsin k,Cat k）的作用,特别是Cat k介导的调节炎症与性别相关的作用。方法:1.选取16只雄性、32只雌性健康SPF级C57BL/6J小鼠。为排除雌激... 详细信息

目的:在慢性应激与颈动脉损伤双模型中,研究慢性应激诱导的血管新生内膜增生中组织蛋白酶K（Cathepsin k,Cat k）的作用,特别是Cat k介导的调节炎症与性别相关的作用。方法:1.选取16只雄性、32只雌性健康SPF级C57BL/6J小鼠。为排除雌激素的影响,取其中16只健康雌性小鼠进行卵巢切除（OVX,Ovariectomy）手术,并将OVX手术安排在施加慢性应激前两周。将16只雄性、16只雌性、16只OVX小鼠随机分别分为应激组和非应激组。应激14天后,全部小鼠接受颈动脉结扎手术。为研究组织蛋白酶抑制剂（E64d）在慢性应激诱导的血管内膜增生中的作用,在手术前3天随机分为对照组（盐水组）和E64d组进行给药。2.手术后分别在第4天和第14天处死小鼠,取小鼠血清、颈动脉、主动脉、大肠、脑、脾、肾脏等组织进行形态学和生化研究。3.通过制备小鼠右颈动脉冰冻切片,H＆E染色后观察和统计分析小鼠右颈动脉内膜增生情况。4.通过ELISA检测小鼠血清中炎症因子NLRP3的含量。5.通过Western Blot检测小鼠大肠、脑、脾、肾以及颈动脉Cat k以及相关炎症蛋白（NLRP3,Caspase-1,IL-1β,ASC）的含量。6.通过β-Gal染色分析小鼠主动脉血管老化情况。结果:1.在术前14天的慢性应激期间,与非应激组小鼠相比较,慢性应激使应激组雄性和雌性小鼠体重和内脏脂肪均明显降低。2.H＆E染色结果显示,慢性应激加速小鼠右颈动脉损伤相关新生内膜的形成。与非应激组小鼠相比较,在术后第14天,慢性应激促进内膜增厚;与雄性小鼠相比,在术后第14天,慢性应激促使雌性小鼠损伤动脉的新生内膜形成较轻,差异均具有统计学意义。3.ELISA结果显示,与非应激组小鼠相比较,在术后第4天时,慢性应激促使雄性小鼠血清中NLRP3水平明显升高,而在雌性小鼠中无明显变化。4.在术后第4天,与雄性小鼠相比,雌性小鼠大肠、脑、脾、肾组织中Cat k及相关炎症因子（NLRP3,Caspase-1,IL-1β,ASC）含量较低。5.在术后第4天,与雄性小鼠相比,雌性小鼠颈动脉中Cat k及相关炎症因子（NLRP3,Caspase-1,IL-1β,ASC）含量较低。Cat k药物干预（E64d）可明显减轻上述变化,模拟血管保护作用且差异具有统计学意义。而在雌性小鼠OVX手术后,Cat k药物干预（E64d）亦可明显减轻上述变化,且差异具有统计学意义,说明Cat k的药物干预可能可以不经过雌激素起作用。结论:我们研究结果表明,慢性应激促使Cat k分泌增加,激活Cat k-NLRP3炎症小体轴,促使促炎环境产生,加速血管内膜增生,从而进一步导致再狭窄。而在雌性小鼠中,慢性应激后Cat k的活性的增长明显低于雄性小鼠;Cat k的活性降低抑制了NLRP3小体水平,从而抑制了一系列的炎症反应,以抑制再狭窄的发生。

关键词：慢性应激性别再狭窄组织蛋白酶K NLRP3

温肾固疏方调节组织蛋白酶K表达影响绝经后骨质疏松症的实验研究

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温肾固疏方调节组织蛋白酶K表达影响绝经后骨质疏松症的实验研究

作者：朱媛媛南京中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察温肾固疏方对去卵巢大鼠破骨细胞Cath k表达及骨组织C0l I的影响,探讨温肾固疏方治疗绝经后骨质疏松症的作用机制。方法:通过切除大鼠双侧卵巢建立绝经后骨质疏松大鼠模型。造模后,将30只SD大鼠随机分为模型组、雌激素组、温... 详细信息

目的:观察温肾固疏方对去卵巢大鼠破骨细胞Cath k表达及骨组织C0l I的影响,探讨温肾固疏方治疗绝经后骨质疏松症的作用机制。方法:通过切除大鼠双侧卵巢建立绝经后骨质疏松大鼠模型。造模后,将30只SD大鼠随机分为模型组、雌激素组、温肾固疏方高、中、低剂量组,每组6只。假手术组仅切除卵巢旁脂肪组织。温肾固疏方高剂量组:[21.21g生药/(kg·d)];中剂量组:[l0.605g生药/(kg·d)];低剂量组:[5.3025 g生药/(kg·d)]。雌激素组:戊酸雌二醇[10 μ g/(kg·d)]。模型组和假手术组均给予生理盐水0.5 ml/100g灌胃。各组均连续干预2个月。HE染色观察骨组织形态;ELISA法测定血清PICP、ICTP、CTX、NTX的含量;免疫组化法测定骨组织ColI、Cath k表达率的变化。结果:实验结果表明,模型组大鼠骨小梁稀疏、断裂,符合骨质形态学破坏表现。各干预组大鼠骨小梁结构有所恢复,对抗骨质破坏效果显著,且中药组疗效与剂量相关,高剂量组疗效优于中、低剂量组。与假手术组相比较,模型组血清ICTP、NTX、CTX明显升高(P组织中ColI表达降低(Pk蛋白表达明显增多(P组织ColI蛋白表达升高(Pk蛋白表达显著减少(Pk表达,抑制骨组织ColⅠ分解而实现的。

关键词：温肾固疏方绝经后骨质疏松症去卵巢大鼠 Ⅰ型胶原组织蛋白酶K

血清β-胶原降解产物、组织蛋白酶K和骨保护素对绝经后骨质疏松患者诊断的研究

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中国骨质疏松杂志 2019年第9期25卷 1231-1235页

作者：王丹王治洁上海市第八人民医院妇产科

目的观察血清β-胶原降解产物(β-CTX)、组织蛋白酶K(Cathek)和骨保护素(OPG)在绝经后骨质疏松患者的诊断意义。方法选择2011年1月至2017年12月在同济医院和第八医院就诊诊断为绝经后骨质疏松的患者110例,为骨质疏松组。选择同期在我院... 详细信息

目的观察血清β-胶原降解产物(β-CTX)、组织蛋白酶K(Cathek)和骨保护素(OPG)在绝经后骨质疏松患者的诊断意义。方法选择2011年1月至2017年12月在同济医院和第八医院就诊诊断为绝经后骨质疏松的患者110例,为骨质疏松组。选择同期在我院诊断为骨量减少者(65例)和骨量正常者(30例)分别为骨量减少组和骨量正常组。观察各组血清β-CTX,Cathek和OPG水平,骨质疏松患者血清β-CTX,Cathek和OPG与骨折的关系和椎体骨折严重程度的关系,骨质疏松患者血清β-CTX,Cathek和OPG水平的相关性分析,及血清β-CTX,Cathek和OPG的受试者工作特征曲线(ROC)在诊断椎体骨折的价值。结果骨质疏松组的血清β-CTX和Cathek水平明显高于骨量减少组和骨量正常组(Pk水平明显高于未骨折组(Pk水平随着骨折严重程度的增加出现升高(Pk呈正相关(r=0.816,Pk与OPG水平呈负相关(r=-0.687,Pk(Z=2.707,P=0.007)和OPG(Z=2.926,P=0.003)检测,而β-CTX、Cathek和OPG的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合检测β-CTX、Cathek和OPG对骨质疏松患者合并椎体骨折的诊断具有重要的临床价值。

关键词： β-胶原降解产物组织蛋白酶K 骨保护素骨质疏松绝经

二至丸中抑制组织蛋白酶K活性的物质基础研究

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药学实践与服务 2023年第2期41卷 91-96,118页

作者：蒋益萍金玉娥张志玮夏天爽徐佳乐薛黎明海军军医大学药学院生药学教研室上海200433 上海市疾病预防控制中心化学品毒性检定所上海200336 上海市预防医学研究院上海200336

目的考察传统补肾经典名方二至丸中抑制组织蛋白酶K的活性部位和活性成分。方法采用高通量荧光方法筛选二至丸中正丁醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和石油醚提取部位,以及二至丸主要活性成分对组织蛋白酶K(CTSk)与荧光合成底物Z-FR-MCA结合活... 详细信息

目的考察传统补肾经典名方二至丸中抑制组织蛋白酶K的活性部位和活性成分。方法采用高通量荧光方法筛选二至丸中正丁醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和石油醚提取部位,以及二至丸主要活性成分对组织蛋白酶K(CTSk)与荧光合成底物Z-FR-MCA结合活性的抑制率,和对CTSk与硫酸软骨素A(CSA)复合物形成活性抑制率。进而考察二至丸不同提取部位和活性成分抑制CTSk生理底物I型胶原蛋白降解活性,并采用分子对接和底物结合实验验证潜在CTSk抑制剂。结果二至丸的正丁醇和石油醚提取部位对CTSk与CSA复合物形成抑制率超过90%,石油醚提取部位对CTSk与底物Z-FR-MCA结合抑制率超过90%,正丁醇提取部位对CTSk的胶原降解抑制率超过95%、石油醚提取部位为58.6%。30个有效成分中11个显示对CTSk与CSA复合物形成抑制率超过50%,有5个成分对CTSk与荧光底物Z-FR-MCA结合活性抑制率超过50%。最终筛选确定4个成分墨旱莲皂苷Ⅸ、表儿茶素没食子酸酯、女贞苷和蟛蜞菊内酯,对胶原降解抑制率超过50%,其中墨旱莲皂苷Ⅸ抑制胶原纤维与CTSk的结合率最高达60%,但均与CTSk活性位点分子对接不成功。结论二至丸中存在抑制组织蛋白酶K的活性物质,主要存在于正丁醇部位,但活性成分不是活性位点抑制剂,可能通过与其他位点结合,间接抑制CTSk与寡多糖结合,进而降低了CTSk的胶原降解活性。

关键词：二至丸骨质疏松组织蛋白酶K 活性部位潜在抑制剂

血清组织蛋白酶K、解聚蛋白样金属蛋白酶-7与慢性心力衰竭患者心室重构和预后的关系

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检验医学 2023年第10期38卷 919-925页

作者：梁卫章石建平柴丽娜韩爱子邯郸市中心医院心内科河北邯郸056000

目的探讨血清组织蛋白酶K(Cat-k)、解聚蛋白样金属蛋白酶-7(ADAMTS-7)水平与慢性心力衰竭(CHF)患者心室重构和预后的关系。方法选取2018年2月—2020年6月邯郸市中心医院CHF患者195例(CHF组)、健康体检者101名(对照组)。收集CHF患者的... 详细信息

目的探讨血清组织蛋白酶K(Cat-k)、解聚蛋白样金属蛋白酶-7(ADAMTS-7)水平与慢性心力衰竭(CHF)患者心室重构和预后的关系。方法选取2018年2月—2020年6月邯郸市中心医院CHF患者195例(CHF组)、健康体检者101名(对照组)。收集CHF患者的一般资料。检测所有研究对象的随机血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)、B型钠尿肽(BNP)、Cat-k、ADAMTS-7水平和左心室射血分数(LVEF)、心室重构参数[左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室后壁厚度(LVPWT)、室间隔厚度(IVST)],计算左心室质量指数(LVMI)。根据纽约心脏协会(NYHA)分级将CHF患者分为Ⅱ级组(65例)、Ⅲ级组(82例)、Ⅳ级组(48例)。采用Pearson相关分析评估各项指标之间的相关性。采用Logisitc回归分析评估CHF患者预后不良的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标判断CHF患者预后不良的效能。结果 CHF组血清Cat-k、ADAMTS-7高于对照组(Pk、ADAMTS-7、BNP、NT-proBNP、LVEDD、LVPWT、IVST、LVMI显著高于NYHAⅢ级组和NYHAⅡ级组(Pk、ADAMTS-7与BNP、NT-proBNP、LVEDD、LVPWT、IVST、LVMI均呈正相关(Pk、ADAMTS-7升高和LVEF降低均是CHF患者预后不良的危险因素[比值比(OR)值分别为1.057、1.772、1.075、1.335、0.903,95%可信区间(CI)分别为1.003~1.113、1.159~2.709、1.034~1.116、1.091~1.634、0.819~0.996]。ROC曲线分析结果显示,NT-proBNP、LVEF、NYHA分级、Cat-k、ADAMTS-7单项检测和联合检测判断CHF患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.729、0.704、0.803、0.720、0.688、0.886。结论血清Cat-k、ADAMTS-7与CHF患者心室重构和预后不良有关。

关键词：组织蛋白酶K 解聚蛋白样金属蛋白酶-7 心室重构慢性心力衰竭预后

海参组织蛋白酶K的部分酶学性质及其对海参自溶的影响

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中国农业大学学报 2017年第9期22卷 72-77页

作者：季晓彤王玲薛鹏年益莹周婉茹张元峰张公亮候红漫孙黎明大连工业大学食品学院辽宁大连116034 国家海洋食品工程技术研究中心辽宁大连116034 中美食品与农业创新中心山东潍坊261000

采用特异性荧光底物法检测海参体壁组织蛋白酶K(CTSk)的酶学性质并初步探讨其对海参自溶的影响。结果表明:CTSk的最适pH为5.0,最适温度为50℃,在20~40℃之间酶活力稳定性较好;Zn^(2+)、Fe^(2+)、Fe^(3+)、Cu^(2+)均对CTSk产生一定抑制作... 详细信息

采用特异性荧光底物法检测海参体壁组织蛋白酶K(CTSk)的酶学性质并初步探讨其对海参自溶的影响。结果表明:CTSk的最适pH为5.0,最适温度为50℃,在20~40℃之间酶活力稳定性较好;Zn^(2+)、Fe^(2+)、Fe^(3+)、Cu^(2+)均对CTSk产生一定抑制作用,抑制率均超过60%;而Ca^(2+)和Mn^(2+)对其活性影响不大,Mg2+可增强该酶活性、CA-074、Z-Leu-Leu-Leu-H(ZLLL)、碘乙酸、E-64、抗痛素、PMSF对CTSk的抑制率均在85%以上,EDTA和1,10-菲啰啉对该酶的抑制率分别为39.7%和16%,而DTT和L-Cys可将该酶活力分别提高至127.46%和238.3%。在海参匀浆物中分别加入特异性抑制剂CA-074和ZLLL,25℃水浴加热使其发生自溶,并通过SDSPAGE检测CTSk对海参蛋白降解的影响。结果显示ZLLL能够在一定程度上抑制海参蛋白的降解。CTSk是一种巯基氨基酸含量较高的半胱氨酸蛋白酶,具有一定的金属离子依赖性,但又易被多种金属离子抑制;CTSk有可能直接参与海参自溶过程中蛋白质的降解。

关键词：海参组织蛋白酶K 酶学特性自溶

龈沟液内组织蛋白酶K浓度与不同程度牙周炎相关性的研究

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龈沟液内组织蛋白酶K浓度与不同程度牙周炎相关性的研究

作者：白雪锦州医科大学

学位级别：硕士

目的检测牙周健康者与不同程度牙周炎患者龈沟液内组织蛋白酶K浓度的变化,探讨牙周炎的炎症程度与龈沟液内该种因子的表达水平是否具有相关性,是否可能作为反映牙周炎症损害程度的参考指标,为辅助牙周炎的诊断提供相关理论基础。方法一... 详细信息

目的检测牙周健康者与不同程度牙周炎患者龈沟液内组织蛋白酶K浓度的变化,探讨牙周炎的炎症程度与龈沟液内该种因子的表达水平是否具有相关性,是否可能作为反映牙周炎症损害程度的参考指标,为辅助牙周炎的诊断提供相关理论基础。方法一、研究对象选取2018.10.09-2019.9.14就诊于赤峰学院附属医院口腔科患者104人,牙周健康者设立为对照组（A组）,要求探诊深度≤3mm,无附着丧失及牙槽骨的吸收,共26人,13男,13女,平均年龄为38.12岁;诊断为牙周炎的患者设立为实验组B组,根据牙周病的国际新分类标准选择牙周炎分期中的前三期患者进行分组,分别为Ⅰ期牙周炎（B1组）,Ⅱ期牙周炎（B2组）,Ⅲ期牙周炎（B3组）,每组亦为26人,共78人,37男,41女,平均年龄为42.50岁。入选患者对此次试验的目的、过程知情同意,并自愿参与试验。要求入选患者无全身系统性疾病,3个月内未服用抗生素及非甾体类抗炎药物,6个月内未行牙周治疗,不吸烟,妇女未妊娠者。二、数据采集对实验的两组患者测定下颌磨牙相关指标,包括:牙龈指数（GI）、探诊深度（PD）、附着丧失（AL）、X线片显示牙槽骨吸收程度（ABL）。三、龈沟液采集取出30号吸潮纸尖,去除尖端4.5mm的部分,照射消毒。四根纸尖为一组,放入已消毒的EP管内,编号,称重,记录后待用。用吸潮纸尖在选定的龈沟液采集点插入龈袋内采集龈沟液。采集完成后,将4根吸潮纸尖置于EP管中,再次称重,记录编号和重量,EP管前后重量之差即为收集的龈沟液重量。记录后将EP管封口,置-70℃冰箱内待检。实验前将样本常温下解冻,加入缓冲剂、震荡、离心,取部分上清液,待测。四、酶联免疫吸附法（ELISA法）检测组织蛋白酶K浓度在酶标板上设空白孔、标准品孔和待测样本孔。在标准品孔中加样品液,待测样本孔中加稀释后的样品液,封板温育后甩干。将酶标试剂（空白孔除外）加入洗涤后的各孔内,封板温育后甩干。再将显色剂A和显色剂B先后加入洗涤后的各孔内,轻摇混匀,避光显色15分钟。随后加入终止溶液,即刻测量各孔的吸光度（OD值）。用SPSS25.0统计软件进行统计学分析,选用适当统计学方法进行检验。结果牙周健康对照组A组龈沟液内组织蛋白酶K浓度平均值为53.26±5.70pg/ml;牙周炎实验组龈沟液内组织蛋白酶K浓度B1组平均值为67.66±4.40pg/ml,B2组平均值为64.72±6.04pg/ml,B3组平均值为61.27±4.67pg/ml。牙周健康对照组的组织蛋白酶K浓度低于牙周炎实验各组（P＜0.05）,随着牙周炎症的逐渐加重,B1、B2、B3三组的组织蛋白酶K的浓度逐渐降低,且四组之间均有差异（P＜0.05）。实验组组织蛋白酶K浓度与GI无明显相关（P＞0.05）,与PD、AL、ABL均呈负相关（P＜0.01）,差异有统计学意义。结论1、牙周健康对照组龈沟液内组织蛋白酶K的浓度低于牙周炎实验组,随着牙周炎症逐渐加重,龈沟液内组织蛋白酶K的浓度逐渐降低。2、牙周炎的炎症程度与龈沟液内组织蛋白酶K的表达水平具有相关性,该种因子可能作为反映牙周炎症损害程度的参考指标。

关键词：龈沟液牙周炎组织蛋白酶K

组织蛋白酶K、胱抑素C与冠心病及其危险因素的相关性

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中国老年学杂志 2015年第23期35卷 6725-6727页

作者：袁琳类延娜李玉子金基永成宪武李香延边大学附属医院心内科吉林延吉133000

目的探讨组织蛋白酶K(Cat k)、胱抑素C(Cys C)与冠心病(CHD)发病、冠脉狭窄程度以及CHD危险因素之间的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定252例CHD患者和135例对照组血清Cat k水平,同时测定Cys C、血脂、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、... 详细信息

目的探讨组织蛋白酶K(Cat k)、胱抑素C(Cys C)与冠心病(CHD)发病、冠脉狭窄程度以及CHD危险因素之间的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定252例CHD患者和135例对照组血清Cat k水平,同时测定Cys C、血脂、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、糖化血红蛋白(Hb A1c)以及肌酐(Cr)水平;所有受试者均行冠脉造影,以Syntax评分评估冠脉狭窄程度。结果 CHD组血清Cat k水平(130.8±24.5)ng/dl与对照组〔(86.9±23.5)ng/dl〕比较显著升高(Pk水平〔(137.2±24.9)ng/dl〕与稳定型心绞痛(SAP)组〔(100.8±12.8)ng/dl〕比较显著升高(Pk水平与冠脉狭窄的Syntax评分呈显著正相关(r=0.236,Pk、Cys C可能与CHD的发病独立相关,其血清水平可反映CHD患者冠状动脉病变狭窄程度,可作为诊断及判断预后的新的生物标志物。

关键词：组织蛋白酶K 胱抑素C 冠心病