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组织工程神经控释系统的理论研究与临床应用

中国组织工程研究与临床康复 2009年第38期13卷 7551-7554页

作者：刘俊阎作勤复旦大学附属中山医院上海市200032

自体神经移植虽然是神经缺损修复的金标准,却由于受到取材的限制,组织工程神经因而成为最好的替代选择。组织工程神经控释系统是通过载有生长因子的组织工程神经支架在局部持续不断释放生长因子,在损伤局部形成促进神经再生的微环境,促... 详细信息

自体神经移植虽然是神经缺损修复的金标准,却由于受到取材的限制,组织工程神经因而成为最好的替代选择。组织工程神经控释系统是通过载有生长因子的组织工程神经支架在局部持续不断释放生长因子,在损伤局部形成促进神经再生的微环境,促进神经轴突再生。目前组织工程神经控释系统所用的材料和方法多种多样,每种材料和方法都有自身的优缺点,寻找合适的材料和方法控释生长因子,达到最好的神经修复效果,是组织工程神经控释系统研究的主要方向。文章主要探讨近年来一些组织工程神经控释材料在应用方法和技术上取得的新进展,并对其进行归纳总结,按照控释原理进行创新性的分类。

关键词：组织工程神经药物控释:药物控释方法

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组织工程神经用生物材料研究进展

解剖学杂志 2010年第6期33卷 709-711页

作者：杨宇民顾晓松南通大学神经再生重点实验室南通226001

交通事故、战争、地震等自然灾害频发，神经损伤患者日趋增多，但周围神经缺损后的修复与功能恢复仍不尽人意。组织工程与干细胞的研究进展为临床神经缺损后的修复和功能重建提供了新的思路。

关键词：组织工程神经生物材料周围神经缺损交通事故自然灾害功能恢复功能重建伤患者

bFGF-PLGA缓释微球生物活性组织工程神经的构建和效果评价研究

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中国修复重建外科杂志 2008年第12期22卷 1485-1490页

作者：王光林林卫高伟强肖裕华董长超四川大学华西医院骨科成都610041 华西第二医院妇科

目的探讨应用SC、ECM凝胶、bFGF-PLGA缓释微球、PLGA纤维微丝整合至高渗透性聚乳酸[poly(D,L-lacitic acid),PDLLA]导管中,构建组织工程神经的方法,并评价其修复周围神经缺损的效果。方法培养和纯化1d龄SD近交系乳鼠SC,取第1代细胞(1×... 详细信息

目的探讨应用SC、ECM凝胶、bFGF-PLGA缓释微球、PLGA纤维微丝整合至高渗透性聚乳酸[poly(D,L-lacitic acid),PDLLA]导管中,构建组织工程神经的方法,并评价其修复周围神经缺损的效果。方法培养和纯化1d龄SD近交系乳鼠SC,取第1代细胞(1×107个/mL)与bFGF-PLGA缓释微球、ECM凝胶复合,注入内置PLGA纤维微丝的高渗透性PLLDA导管中,构建组织工程神经。取成年SD大鼠60只,制备坐骨神经15mm缺损模型后,根据移植物不同随机分为5组(n=12)。A组:采用自体神经移植修复;B组:PDLLA导管,管内注满PBS液;C组:含PLGA纤维微丝的PDLLA导管,管内注满30%ECM凝胶;D组:含PLGA纤维微丝的PDLLA导管,管内注满30%ECM凝胶与SC的混合物;E组:组织工程神经。术后观察大鼠一般情况,于术后12、16、20及24周行坐骨神经功能指数(sciatic function index,SFI)测定,术后12及24周神经电生理检测,并取材行大体观察和组织学观察。结果术后大鼠均存活至实验完成。术后12、16周,E组SFI与B组差异有统计学意义(P神经传导速度(nerve conduct velocity,NCV)大于B、C组(P组织学观察术后12周,E组再生神经组织面积及有髓神经纤维数与A、B、C组比较,差异有统计学意义(P神经纤维密度和直径小于A组(P神经组织面积大于B组(P神经纤维数与A、B、C组比较有统计学意义(P神经纤维密度和直径大于B、C组(P组织工程神经修复神经缺损后,能促近神经再生,修复效果接近于自体神经移植。

关键词：组织工程神经 SC bFGF-PLGA缓释微球周围神经缺损神经再生鼠

经等离子体修饰并复合BMSCs的组织工程神经研究

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中国修复重建外科杂志 2008年第12期22卷 1481-1484页

作者：周佳沈尊理沈华金羽青刘伟娄琳陈南梁上海交通大学附属第一人民医院整形科上海200080 浙江省人民医院上海组织工程重点实验室东华大学纺织系

目的探讨经等离子体修饰的PLGA神经导管复合BMSCs后修复大鼠坐骨神经缺损的疗效。方法取30只新生SD大鼠股骨及胫骨骨髓,培养获得原代BMSCs,并传至第3代。将PGA和PLA按90∶10摩尔比例混合,制备PLGA神经导管,对其进行等离子体修饰。取30只... 详细信息

目的探讨经等离子体修饰的PLGA神经导管复合BMSCs后修复大鼠坐骨神经缺损的疗效。方法取30只新生SD大鼠股骨及胫骨骨髓,培养获得原代BMSCs,并传至第3代。将PGA和PLA按90∶10摩尔比例混合,制备PLGA神经导管,对其进行等离子体修饰。取30只4周龄SD大鼠,制备右后肢坐骨神经1cm缺损模型。按修复材料不同随机分成3组(n=10),实验组:第3代BMSCs复合经等离子体修饰PLGA神经导管;对照组:第3代BMSCs复合普通PLGA神经导管;自体组:自体神经。术后6周观察大鼠的行走步态变化,测定坐骨神经功能指数(sciatic function index,SFI)、电生理变化、腓肠肌湿重恢复率,采用再生神经轴突图像分析评价神经修复效果。结果术后大鼠均存活至实验完成。术后6周,实验组和自体组大鼠行走步态恢复情况较对照组好。实验组、对照组及自体组SFI分别为—51.02±6.54、—58.73±7.87及—48.73±3.95,组间比较差异均有统计学意义(P神经传导速度及波幅明显高于对照组(P0.05),对照组与自体组差异有统计学意义(P神经纤维密度、直径及髓鞘厚度均高于对照组(P神经导管能有效促进周围神经的再生,为研制新型的组织工程神经修复周围神经缺损提供新的思路。

关键词：组织工程神经等离子体处理PLGA BMSCs 鼠

脱细胞神经支架联合干细胞构建组织工程神经修复坐骨神经缺损的meta分析

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中国组织工程研究 2017年第22期21卷 3602-3608页

作者：向飞帆阳运康谭小琦魏代清杨琨孙远林周举西南医科大学附属医院骨与关节外科四川省泸州市646000 西南医科大学四川省泸州市646000

背景:研究表明,脱细胞神经支架不仅具有天然神经的空间三维结构,而且具有低免疫原性,但对于长段神经缺损的修复效果仍不理想。为此,有学者将脱细胞神经支架复合种子细胞构建组织工程神经,以提高其治疗效果。目的:系统评价脱细胞神经支... 详细信息

背景:研究表明,脱细胞神经支架不仅具有天然神经的空间三维结构,而且具有低免疫原性,但对于长段神经缺损的修复效果仍不理想。为此,有学者将脱细胞神经支架复合种子细胞构建组织工程神经,以提高其治疗效果。目的:系统评价脱细胞神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞移植修复大鼠坐骨神经缺损的疗效。方法:检索PubM ed、The Cochrane Library、EMbase、CNKI、WanF ang和VIP数据库,查阅关于脱细胞神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞修复大鼠坐骨神经缺损的随机对照实验,检索时限均为建库至2016年7月。由3名研究员按纳入和排除标准独立筛选文献、提取数据和评价文献的方法学质量,采用Review Manger5.3软件进行meta分析。结果与结论:最终10篇文献纳入研究,共计252只大鼠。Meta分析结果显示:(1)脱细胞神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞组的坐骨神经功能指数均优于单纯脱细胞神经支架组:2周[SMD=2.73,95%CI(1.92,3.54),P神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞组神经传导速度、潜伏期、振幅优于脱细胞神经支架组:神经传导速度[SMD=1.39,95%CI(0.99,1.78),P神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞组髓鞘厚度均优于单纯脱细胞神经支架组:术后8周髓鞘厚度[MD=0.14,95%CI(0.07,0.21),P神经纤维数[SMD=3.59,95%CI(2.63,4.55),P神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞组腓肠肌湿重优于单纯脱细胞神经支架组[SMD=4.22,95%CI(2.40,6.03),P神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞治疗大鼠坐骨神经缺损较单纯脱细胞神经支架更有助于神经再生和功能恢复。受纳入文献质量的限制,以上结论需更高质量、更大样本的随机对照实验加以验证。

关键词：生物材料材料相容性周围神经缺损骨髓间充质干细胞脂肪间充质干细胞许旺细胞脱细胞神经支架组织工程神经疗效大鼠 RCT meta分析

雪旺细胞和生物蛋白胶构建组织工程神经的初步研究

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中国修复重建外科杂志 2007年第6期21卷 577-581页

作者：李根卡余楠生黎文广西医科大学第五附属医院柳州市人民医院骨科广西柳州545001 广州医学院第一附属医院骨科

目的研究雪旺细胞-生物蛋白胶复合物构建组织工程神经,修复周围神经缺损的效果。方法取4周龄新西兰兔瓦勒变性坐骨神经,采用组织块反复种植培养法培养雪旺细胞,分离纯化,并用S-100蛋白免疫组织化学染色鉴定。收集已纯化的雪旺细胞,配制... 详细信息

目的研究雪旺细胞-生物蛋白胶复合物构建组织工程神经,修复周围神经缺损的效果。方法取4周龄新西兰兔瓦勒变性坐骨神经,采用组织块反复种植培养法培养雪旺细胞,分离纯化,并用S-100蛋白免疫组织化学染色鉴定。收集已纯化的雪旺细胞,配制成1×10^6/ml的细胞悬液,加入生物蛋白胶制成雪旺细胞-生物蛋白胶复合物,倒置相差显微镜观察雪旺细胞生长情况。将雪旺细胞-生物蛋白胶复合物填充于硅胶管（A组）和生物膜（B组）内,构建组织工程神经,分别移植桥接修复2月龄新西兰大白兔左侧10mm胫神经缺损（n=8）;C组（n=8）作自体神经移植。术后10周,行实验动物大体观察、神经电生理检测、移植体大体解剖和组织学观察。结果所有动物均存活至实验完成。术后3～4周A组所有动物左侧足底均出现溃疡,B、C组小部分动物出现足底溃疡。10周,神经电生理检测发现A组所有神经移植体未能传导电刺激;B、C组所有移植体均能传导电刺激引起腓肠肌的动作电位,两组动作电位振幅和神经传导速度分别为4.21±0.82mV、33.40±5.40m/s和4.80±1.15mV、36.55±6.43m/s,差异均无统计学意义（P〉0.05）。A组所有神经移植体内未见神经纤维长入,两端均有神经瘤形成;B、C组无明显神经瘤形成,B组整段神经移植体内有神经纤维长入。组织学观察示B、C组再生神经的新生轴突形态无明显区别,均接近正常神经组织。结论用生物膜包裹雪旺细胞-生物蛋白胶复合物,构建组织工程神经,能够促进神经再生,其修复效果接近于自体神经移植,具有临床应用前景。

关键词：组织工程神经雪旺细胞-生物蛋白胶复合物周围神经再生兔

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不同材料构建组织工程神经及其应用

中国组织工程研究与临床康复 2010年第42期14卷 7907-7910页

作者：郑胜哲卢蕾宋磊吉林省延边大学附属医院神经内科吉林省延吉市133000 吉林大学第一医院神经内科吉林省长春市130021

目的:评价组织工程神经支架材料的性能及其在神经损伤修复中的应用效果。方法:以"组织工程,组织工程神经,人工神经,神经材料,神经损伤修复"为中文关键词,以"tissue engineering,tissue engineering nerve,artificial nerve,materials,re... 详细信息

目的:评价组织工程神经支架材料的性能及其在神经损伤修复中的应用效果。方法:以"组织工程,组织工程神经,人工神经,神经材料,神经损伤修复"为中文关键词,以"tissue engineering,tissue engineering nerve,artificial nerve,materials,repairing of neuralinjury"为英文关键词,采用计算机检索2000-01/2010-03有关组织工程神经支架材料性能及其在神经损伤修复中应用的文章,排除重复研究或Meta分析类文章。结果:共纳入20篇文献讨论组织工程神经修复材料的种类及其性能。自体神经移植可作为一种较理想的方法应用于神经组织工程,不但具有理想的生物相容性、生物降解性和较高的亲和性,而且能促进神经生长因子生长、组织修复,但取材有限。明胶无抗原性,生物相容性好,可完全生物降解,可以实现神经自身的修复。壳聚糖是天然多糖中惟一大量存在的碱性氨基多糖,具有很好的生物相容性、可降解性、无毒性等,但仍满足不了完全相容的需要。纳米修饰技术有望被应用于下一代组织工程神经移植。结论:随着高分子材料学的发展,越来越多生物可降解性合成材料被证明可以支持神经再生,但仍没有发现一种很理想的神经修复材料。如何寻找一种良好的神经支架材料,具有与神经再生速度相匹配的降解速度、最佳孔隙率、导管厚度、形状等均是问题,而神经支架材料要实现与种子细胞、神经营养因子的最佳搭配才能最大程度上促进神经再生。

关键词：组织工程神经神经材料性能神经损伤修复组织工程

1,25(OH)2D3诱导神经干细胞向少突胶质细胞分化并构建长段组织工程神经的研究

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1,25(OH)2D3诱导神经干细胞向少突胶质细胞分化并构建长段组织工...

作者：向飞帆西南医科大学

学位级别：硕士

第一部分:1,25(OH)D诱导神经干细胞向少突胶质细胞分化的研究目的:培养、纯化SD大鼠的神经干细胞(NSCs),并诱导NSCs在短时间内大量地分化为少突胶质细胞;探讨得到高纯度高浓度少突胶质细胞的实验方法;观察并分析由NSCs分化而来的少突胶... 详细信息

第一部分:1,25(OH)D诱导神经干细胞向少突胶质细胞分化的研究目的:培养、纯化SD大鼠的神经干细胞(NSCs),并诱导NSCs在短时间内大量地分化为少突胶质细胞;探讨得到高纯度高浓度少突胶质细胞的实验方法;观察并分析由NSCs分化而来的少突胶质细胞生长、转归等生物学特性。方法:新生SD大鼠(48 h内),麻醉消毒后取双侧大脑皮层,剔除脑膜、血管等组织。将大脑皮层剪成糜状,反复吹打后过滤,加入DMEM/F12培养基,然后将细胞密度调整为5×10 cells/m L,按比例添加神经生长因子EGF(20 ug/m L),b FGF(10 ug/m L),B27(20 ul/m L)进行培养。取第三代NSCs进行免疫细胞化学鉴定。以含10%FBS的DMEM为特定培养基重悬离心后的神经球,开始培养。次日添加浓度为1×10 mol/L的1,25(OH)D诱导分化培养7 d。用0.0125%胰酶溶液短时消化,FBS终止消化并轻轻震动。收集细胞悬液离心,弃上清液,用含10%FBS的DMFM重悬细胞继续培养,台盼兰染色计算分化细胞的总数;次日再次加入浓度为1×10 mol/L的1,25(OH)D继续分化培养7 d,消化细胞后离心,弃上清,用含10%FBS的DMFM重悬细胞,台盼兰染色计算分化细胞的总数。第一次和第二次加入诱导剂分化培养7 d后,分别取出其中12孔的盖玻片分两组进行GC和GFAP免疫组化鉴定;另12孔用0.0125%胰蛋白酶消化1 min后,取出盖玻片分两组分别进行GC和GFAP免疫组化鉴定。即可按A、B、C、D四组进行鉴定:A组为第一次诱导直接鉴定组;B组为第一次诱导消化后鉴定组;C组为第二次诱导直接鉴定组;D组为第二次诱导消化后鉴定组。将获得的少突胶质细胞按照常规方法进行冻存复苏,观察复苏后少突胶质细胞的生长等生物学特性。结果:NSCs在培养液中悬浮生长,培养3 d左右,数十个NSCs增殖成团状,仍呈悬浮生长;神经团逐渐增大,培养7 d左右可出现较大典型的神经球。免疫细胞化学结果显示,神经球的表面含大量Nestin阳性细胞,其着色范围与细胞的形态大致相同。鉴定分化培养24 h,神经球的四周形成较多突起,临近神经球之间的突起相互连接形成网格状结构。培养7 d后出现有较多的NF-200阳性的细胞和部分GFAP阳性的细胞,其着色区域与各细胞形状大致相同。第一次加入1,25(OH)D诱导剂,神经球向四周分化形成较多突起,临近神经球之间的突起相互连接形成网格状结构。同时也可见单个细胞贴壁分化,一般长出1个突起。分化培养3 d后瓶底出现较多的胶质细胞,贴壁生长,部分细胞有1个突起,或者3个突起;培养7 d左右神经球完全分化,不见神经球的形态,部分较大的球中心细胞未分化者则裂解成片状漂浮在瓶中。瓶底铺满细胞,以有1个突起的细胞为主,可见部分细胞有3个突起。第二次加入1,25(OH)D诱导剂,继续培养7 d,瓶底铺满细胞,以1个突起的细胞为主,4个突起的细胞较少。台盼兰染色计算分化细胞的总数,第一次诱导分化所得细胞总数为(1.51±0.08)×106个,第二次诱导分化所得细胞总数为(1.34±0.12)×106个,两者存在显著性差异(P0.05)。冻存不同时段的OL复苏,其成活比例可达500%,继续培养细胞生长良好,细胞形态与生长状况接近于冻存前。结论:1,25(OH)D作为诱导剂,结合特定培养基可以诱导NSCs大量地向少突胶质细胞分化,首次采用二次诱导及低浓度胰酶短时消化法进一步纯化细胞,从而在短时间内获得高纯度高浓度的少突胶质细胞。第二部分:脱细胞神经支架复合神经干细胞来源的少突胶质细胞构建长段组织工程神经的研究目的:通过改良化学法制备保留空间三维结构、低免疫源性的人体胫神经脱细胞神经支架(ANGs);联合源于SD大鼠NSCs的少突胶质细胞和由人体胫神经制备的ANGs构建长段组织工程神经,研究组织工程神经的生物学特性,探讨构建理想组织工程神经的适宜条件。方法:采用改良化学法制备人体胫神经ANGs,取32段人体胫神经,每段长约30 mm。(1)去除取自废弃截肢肢体的胫神经干外层松散的纤维结缔组织;(2)将0.05 mol/L

关键词：少突胶质细胞 1,25(OH)2D3 无血清培养低浓度胰酶神经干细胞周围神经缺损脱细胞神经支架化学脱细胞法组织工程神经

丝素修饰纳米纤维构建组织工程神经的实验研究

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丝素修饰纳米纤维构建组织工程神经的实验研究

作者：刘俊复旦大学

学位级别：硕士

目的：P （LLA-CL）是常用的疏水性组织工程材料,具有机械性能良好和长降解时间特点。丝素蛋白的带电粘性末端上有精氨酸（R）-甘氨酸（G）-天冬氨酸（D）三肽结构,有利于细胞的粘附。本实验主要研究利用丝素修饰P （LLA-CL）材料表面,... 详细信息

目的：P （LLA-CL）是常用的疏水性组织工程材料,具有机械性能良好和长降解时间特点。丝素蛋白的带电粘性末端上有精氨酸（R）-甘氨酸（G）-天冬氨酸（D）三肽结构,有利于细胞的粘附。本实验主要研究利用丝素修饰P （LLA-CL）材料表面,改变P （LLA-CL）材料的疏水特性,观察体外实验中材料的生物相容性及体内实验中促进神经再生的效果。方法：实验主要分为体外实验和体内实验：体外实验主要是MTT实验评价P （LLA-CL）材料及丝素修饰P （LLA-CL）材料（P （LLA-CL）-SF）两种材料与雪旺细胞的相容性。体内实验主要设立：A组,白体神经组;B组,神经缺损组,C组,空白P （LLA-CL）-SF支架组修复神经缺损;D组,空白P（LLA-CL）支架组修复神经缺损;E组,负载雪旺细胞的P （LLA-CL）-SF支架组修复神经缺损;F组,负载雪旺细胞的P （LLA-CL）支架组修复神经缺损。测量各组第2、3个月坐骨神经功能指数,潜伏期比,波幅比,传导速度,肌肉湿重比,肌纤维横切面积比,再生神经轴突数目和髓鞘厚度,评价丝素修饰P （LLA-CL）材料后的神经修复效果。结果：体外实验中,P （LLA-CL）-sF材料上雪旺细胞的MTT值明显高于P（LLA-CL）材料。体内实验中,使用P （LLA-CL）-SF材料的C、E组坐骨神经功能指数,潜伏期比,波幅比,传导速度,肌肉湿重比,肌纤维横切面积比,再生神经轴突数目和髓鞘厚度均明显优于使用P （LLA-CL）材料的D、F组。结论：丝素修饰的P （LLA-CL）-SF材料的比未经修饰的P （LLA-CL）材料具有更好的生物相容性,更有利于雪旺细胞的粘附和神经的再生。

关键词： P(LLA-CL) 丝素组织工程神经