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甘薯脱毒苗组培扩繁基本培养基配方的探究与优化

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安徽农业科学 2024年第5期52卷 45-49页

作者：段芳付国召张志伟刘柏庆庄艳杨蔓芸沈嘉怡杨翠芹四川农业大学农学院四川成都611134 甘肃亚盛实业(集团)股份有限公司山丹分公司甘肃山丹734100

甘薯在种植过程中因连年种植出现的病害发生加重、产量降低、品质变劣等因素严重制约了甘薯产业的发展。甘薯脱毒技术是脱除病毒、恢复品种种性、提高甘薯产量和品质的有效途径,但生产中脱毒苗的供应能力不足,为了探索其解决办法,以徐... 详细信息

甘薯在种植过程中因连年种植出现的病害发生加重、产量降低、品质变劣等因素严重制约了甘薯产业的发展。甘薯脱毒技术是脱除病毒、恢复品种种性、提高甘薯产量和品质的有效途径,但生产中脱毒苗的供应能力不足,为了探索其解决办法,以徐薯18、龙薯9号为试验材料,根据甘薯龙薯9号扦插苗自身吸收矿质元素的量计算所得的基质培配方龙9以及1/2龙9、MS、1/2MS为处理,进行了脱毒苗组培扩繁的比较探究。结果表明,徐薯18和龙薯9号1/2龙9配方的茎节数和茎长均为最好,但试验过程中该配方出现了叶片黄化现象,故对1/2龙9配方进行了完善,并在徐薯18、龙薯9号、烟薯25、绵薯10号、遂宁524及北京1号6个甘薯品种进行了验证,结果表明1/2改良龙9配方处理下的各品种茎长和茎节数均优于MS配方,这对于解决生产中脱毒苗供应不足的问题以及经济效益的增加有极其重要的作用。

关键词：甘薯脱毒苗组培扩繁基础培养基配方

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菩提树组培扩繁技术研究

林业科技 2020年第2期45卷 23-25页

作者：黄立华辽宁省旱地农林研究所辽宁朝阳122000

以MS为基本培养基,分别加入不同浓度的生长调节物质6-BA、NAA和IBA的组合,对菩提树当年生长健壮的带侧芽茎段进行组织培养,最后筛选出菩提树初代培养的最适培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.10 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L;继代增殖的最... 详细信息

以MS为基本培养基,分别加入不同浓度的生长调节物质6-BA、NAA和IBA的组合,对菩提树当年生长健壮的带侧芽茎段进行组织培养,最后筛选出菩提树初代培养的最适培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.10 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L;继代增殖的最适培养基为MS+6-BA 1.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L;生根阶段的最适培养基为1/2MS+NAA 0.05 mg/L+IBA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L。同时还筛选出草炭土、细河沙、壤土以3∶5∶2的比例混合是菩提树组培苗移栽成活率最高的移栽基质,为73.2%。

关键词：菩提树组培扩繁

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北美红杉组培快繁体系的建立与优化

北方园艺 2019年第6期 89-95页

作者：谢忠利李旦于相君陈远书古旭何承忠西南林业大学云南生物多样性研究院，云南昆明 650224 西南林业大学云南省高校林木遗传改良与繁育重点实验室，云南昆明 650224

以北美红杉1年生带芽茎段为外植体,通过基本培养基筛选和不同植物生长调节剂水平对比试验得到北美红杉组织培养的不定芽诱导、增殖、生根等生长阶段的优化配比培养基,以期建立北美红杉高效的快繁体系。结果表明:确定最佳消毒方法为75%... 详细信息

以北美红杉1年生带芽茎段为外植体,通过基本培养基筛选和不同植物生长调节剂水平对比试验得到北美红杉组织培养的不定芽诱导、增殖、生根等生长阶段的优化配比培养基,以期建立北美红杉高效的快繁体系。结果表明:确定最佳消毒方法为75%乙醇消毒30 s,无菌水冲洗2次,再用0.1%氯化汞消毒处理10 min,无菌水冲洗4次;最佳不定芽诱导培养基配方为MS+6-BA 1.0 mg·L^(-1)+NAA 0.10 mg·L^(-1)+蔗糖30 g·L^(-1)+琼脂6 g·L^(-1),不定芽诱导效果最好,诱导芽率高达2 153.3%,且芽生长健壮;最佳不定芽增殖培养基配方为MS+6-BA 1.0 mg·L^(-1)+NAA 0.10 mg·L^(-1)+蔗糖30 g·L^(-1)+琼脂6 g·L^(-1),增殖系数高达15.8;最佳生根培养基配方为1/2MS+KT 1.5 mg·L^(-1)+IBA 1.0 mg·L^(-1)+蔗糖30 g·L^(-1)+琼脂6 g·L^(-1),其生根率达90.0%,根多且粗长,植株高大健壮;最佳移栽基质为V_(炉渣)∶V_(原土)∶V_(腐殖土)=1∶1∶1,植株成活率达91.7%。

关键词：北美红杉组培扩繁优化增殖系数

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非洲菊组培苗湿润育苗技术与成本控制研究

非洲菊组培苗湿润育苗技术与成本控制研究

作者：陈芝华南京农业大学

学位级别：硕士

非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus)为菊科大丁草属多年生宿根常绿草本花卉;因其具有丰富的色彩和广泛的适应性而深受亲昧;非洲菊栽培适应性强,在保护地条件下栽培可周年开花,且切花率高,具有较高的经济效益;现已成为全国各省农业产业结... 详细信息

非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus)为菊科大丁草属多年生宿根常绿草本花卉;因其具有丰富的色彩和广泛的适应性而深受亲昧;非洲菊栽培适应性强,在保护地条件下栽培可周年开花,且切花率高,具有较高的经济效益;现已成为全国各省农业产业结构调整的重要选择、县域经济发展的重要产业和农民增收致富的新亮点。这几年,随着非洲菊种植规模的日益壮大,非洲菊种苗需求日益旺盛;但与此同时部分育苗企业设施简陋、育苗方式落后,使得非洲菊种苗整体质量低劣,依靠打价格战占领市场,对优质种苗的认识不足,使得切花品质下降,售价低廉,加之物价、电力、人力成本的不断上涨,非洲菊种苗生产成本越来越高,市场竞争越来越激烈;这些都严重制约了非洲菊产业的健康、快速发展;随着非洲菊切花生产的发展,如何稳定育苗的高成苗率,以及如何更加高效率、低成本的生产优质种苗已成为当前非洲菊科研和生产中的重要课题。为了解决这个问题,本课题在研究非洲菊规模化组培快繁生产关键技术的同时,着重研究了非洲菊组培苗湿润育苗技术以及非洲菊种苗生产公司化运作成本分析及成本控制,主要研究结果如下：1.非洲菊规模化组培快繁关键技术研究通过对非洲菊增殖配方、不同切割操作、不同光照条件、壮苗培养及对生根培养条件进行研究,明确了适宜非洲菊规模化生产的适宜条件;结果表明：在增殖培养阶段将KT、BA两种激素交替使用或将KT、BA结合使用比单独长期使用一种激素,可有效避免由于激素使用不当而过早引起种苗弱化甚至玻璃化,使大批量中间繁殖体在继代过程中稳定增殖;切割操作以“去叶留1/2基部愈伤组织丛芽小块”切割方式为非洲菊继代苗最佳操作方式;不仅可以有效提高操作效率,还可以有效缩短继代周期及提高增殖系数;继代转接后前3天不进行光照即符合生产需求又具节能的效果,可有效节约15%左右的光照耗能;降低细胞分裂素和提高生长素用量,进行壮苗培养,这样不仅减少了小芽和弱芽的比率,基本达到了壮苗和增殖同步的效果,同时也有利于分离切割提高工作效率和之后的生根培养;生根培养中适宜的培养基为1/2MS+ IAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L+AC1.0g/L,生根时间短,生根效果理想。2.非洲菊组培苗湿润育苗技术的研究由于目前尚未见关于非洲菊湿润育苗的研究报道,为此本文对这一技术进行了初步研究。重点比较了湿润育苗、托盘育苗和传统土床育苗等3种育苗方式在冬季大棚育苗期内苗床温度的日均温度变化情况、长出新叶的时间、育苗成活率、成苗期地上部和地下部长势以及育苗成本、大田移栽缓苗期等方面的内容。结果表明：与托盘育苗和传统土床育苗相比,湿润育苗不仅适合冬季育苗,而且具有出新叶时间短、育苗成活率高、成苗整齐度高、育苗成本较低、移栽缓苗期短等优势。因此,非洲菊湿润育苗技术适合应用于工厂化种苗生产,值得在生产上进行推广3.非洲菊种苗生产成本核算与成本控制种苗生产既是一门专业技术,又是一门以效益求发展的企业管理科学,在生产中无时无刻不与生产成本和效益挂钩;种苗生产的成本构成分析是种苗企业管理的基础,通过成本构成分析可以使企业发现在生产过程中存在的问题,通过加强薄弱环节以及减少企业生产资源的浪费,以增加企业的效益;以年产500万-株非洲菊种苗公司为例,对非洲菊种苗生产的成本构成、成本分析以及如何降低非洲菊生产成本以提高经济效益进行了分析和研究,结果表明：年产500万株非洲菊组培苗成本投入约为124.5万元,正常情况下企业年利润在50万-150万元之问;研究结果为非洲菊种苗生产公司化运作提供了参考。

关键词：非洲菊组培扩繁湿润育苗成本控制

白云鄂博矿区苔藓植物区系研究及短叶对齿藓配子体愈伤组织诱导

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白云鄂博矿区苔藓植物区系研究及短叶对齿藓配子体愈伤组织诱导

作者：张小康内蒙古大学

学位级别：硕士

本文通过对白云鄂博矿区苔藓植物物种组成、区系地理成分和特点的研究,同国内其他矿区的苔藓植物区系比较,并对该矿区优势物种短叶对齿藓配子体愈伤组织的诱导,得到以下主要研究结果：1.在该矿区共发现苔藓植物8科,17属,37种,并编制了... 详细信息

本文通过对白云鄂博矿区苔藓植物物种组成、区系地理成分和特点的研究,同国内其他矿区的苔藓植物区系比较,并对该矿区优势物种短叶对齿藓配子体愈伤组织的诱导,得到以下主要研究结果：1.在该矿区共发现苔藓植物8科,17属,37种,并编制了各个科和优势属的分类检索表。2.该矿区苔藓植物的优势科是丛藓科Pottiaceae、真藓科Bryaceae;优势属是对齿藓属Didymodon、真藓属Bryum;矿区分布广且生物量较大的优势种有：短叶对齿藓Didymodon tectorum、中华赤藓Tortula sinensis、缨齿藓Jaffuelibryum wrightii、美灰藓Eurohypnum leptothallum等。通过与其他五个矿区的区系成分进行对比分析,得知本矿区苔藓植物区系成分与甘肃黑岱沟露天煤矿区物种相似度最高,和湖北大冶矿区差异最大。3.短叶对齿藓组织培养的最佳培养基为Knop培养基,最适培养条件为：温度24士2℃,湿度85%,光照4OOOlux,16h光照与8h黑暗交替培养;促进愈伤组织诱导分化的最佳激素为0.5 mg.L-1的KT激素。

关键词：白云鄂博矿区苔藓植物物种组成区系短叶对齿藓组培扩繁

早熟高产抗病龙胆品系K-1，K-2选育及繁育技术研究

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早熟高产抗病龙胆品系K-1，K-2选育及繁育技术研究

作者：王春兰中国农业科学院

学位级别：硕士

通过集团选育和系统选育的方法,在吉林左家的林缘及龙胆生产基地选育出了龙胆新品系,进行了遗传规律、大面积区域栽培试验、组培快繁技术及种子发芽、播种覆土、温度、光照等对苗期生长的影响试验研究,为龙胆新品种选育和生产上的应用... 详细信息

通过集团选育和系统选育的方法,在吉林左家的林缘及龙胆生产基地选育出了龙胆新品系,进行了遗传规律、大面积区域栽培试验、组培快繁技术及种子发芽、播种覆土、温度、光照等对苗期生长的影响试验研究,为龙胆新品种选育和生产上的应用提供了科学依据。研究结果如下:用集团选育法筛选出粗根型、长根型、多根型品系;用系统选育法选育出二个株系:早熟且高产型(代号K-1)和早熟且抗病性型(代号K-2),后代的遗传性状稳定。结合龙胆草品种选育进行了组培快繁研究,提高了优良植株的繁殖系数,加快了龙胆草新品种繁育进程,并为进一步育种提供了丰富的材料。环境条件对种苗繁育的影响研究结果如下:①种子处理:以赤霉素浓度50～100mg/Kg溶液浸种5小时,然后用清水洗净,发芽率可达70%以上;②适宜的种子发芽温度:18℃～22℃种子发芽率高达89.7%,因此龙胆草播种时间应在当地温度达到18℃～22℃时开始播种;③适宜的播种覆土深度:以龙胆草播种后不覆土出苗数最高;④畦面覆盖物选择:播种后畦面覆盖物采用松树叶、稻草帘、1㎝稻草加单层遮阳网做畦面覆盖,出苗率高,土壤保湿效果好,成本也较低,在生产中可应用;⑤适合幼苗生长的光照强度:出苗后采用透光率70%～80%的遮阳材料搭遮阳棚,效果较好,根长、根粗、根重与不遮阴的相比差异显著,保苗率高,病情较轻。

关键词：龙胆优良品系遗传规律组培扩繁苗期生长

人工miR159介导的番茄抗黄瓜花叶病毒遗传转化研究

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人工miR159介导的番茄抗黄瓜花叶病毒遗传转化研究

作者：徐艳浙江理工大学

学位级别：硕士

MicroRNA(miRNA)是一类长度在21～24nt的、广泛存在于真核生物中的非编码小RNA,它们通过与靶标mRNA的结合来发挥相应的负控调节等作用。miR159是一类高度保守的miRNA,因此人们推测它可能存在于所有的陆地植物中。初步研究表明,miR159可... 详细信息

MicroRNA(miRNA)是一类长度在21～24nt的、广泛存在于真核生物中的非编码小RNA,它们通过与靶标mRNA的结合来发挥相应的负控调节等作用。miR159是一类高度保守的miRNA,因此人们推测它可能存在于所有的陆地植物中。初步研究表明,miR159可能与一些植物花药和种子的产生相关。已有报道发现番茄中的miR159在叶片中的本底表达量较高,但是它在番茄中的具体功能目前还是未知的。近年来关于小RNA介导的基因沉默相关研究较为热门,相关研究显示虽然与miRNA结构和功能相似的siRNA具有一定的基因沉默效应,但是由于其表达不够稳定、对靶标序列识别的专一性不足等缺点,其应用前景具有较大局限性和不确定性。而miRNA则由于其内源性、表达量比较高、与靶标结合更稳定和专一等优点,被认为是基因沉默研究的新热点。黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是较为典型的三分体正义单链(positive single strand RNA, +ssRNA)病毒。它具有较为广泛的宿主,主要引起寄主花叶、矮化、绿岛、褪绿、黄化等症状,从而严重影响了植物的正常生长发育。番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)是人们日常生活中不可或缺的蔬菜型水果,提高其产量和品质的相关研究长期以来一直是热点。CMV也是引起的番茄病毒病的主要病因之一,每年因CMV造成的农业减产给经济发展和工农业生产带来了严重影响,因而研究与抗CMV相关的番茄遗传转化具有十分重要的科研价值和经济意义。本研究结合上述miRNA介导的基因沉默、番茄抗病毒相关的转基因等研究热点,主要通过人工改造的miR159对番茄进行遗传转化,并在此过程中对各个操作条件进行优化,从而初步建立了人工miR159介导的番茄抗黄瓜花叶病毒遗传转化体系。本文的主要内容分为三部分:一、通过对受体番茄Micro Tom的组培快繁及抗生素耐受性培养条件的筛选,确定了最适的分化外植体、培养条件以及分化、生根培养基配方,从而建立了Micro Tom遗传转化研究的基础。其中分化培养基配方为:MS+0.25 mg/L IAA+2mg/L 6-BA;生根培养基配方为:MS+0.5 mg/L IBA;抗生素耐受性植株高效筛选浓度配比为:50mg/L卡那霉素+200mg/L头孢霉素。二、构建含人工miR159前体(pre-amiR159)的质粒pBI121- (pre-amiR159),再用该质粒分别转化农杆菌EHA105和番茄Micro Tom,筛得到抗性番茄再生植株若干,从而初步建立了番茄amiR159介导的遗传转化体系。其中质粒的构建方法为:从CMV-Fny的RNA1上的ORF片段中筛选一段21bp的序列作为amiR159的靶标,根据此序列的互补片段设计出前体amiR159序列,人工合成前体amiR159的cDNA序列后,再将此序列连接到质粒pBI121上相应的位点。番茄的遗传转化过程主要为:通过用上述质粒转化的农杆菌侵染番茄外植体、在筛选性培养上筛选抗性再生植株等过程,初步筛选出抗性植株。在此实验过程中同时研究并优化了外植体预处理方法、农杆菌侵染浓度、农杆菌侵染时间等处理条件。三、通过对抗性番茄植株进行分子鉴定和相应的攻毒实验,得到转基因阳性植株抗CMV的综合数据,从而从抗CMV的功能性上验证了amiR159介导的番茄遗传转化体系的有效性。分子鉴定主要是通过PCR、Southern杂交方法鉴定抗性植株基因组DNA中的目的片段、RT-PCR方法鉴定抗性植株中目的RNA的表达情况,从而确定转基因阳性番茄。攻毒实验主要是对炼苗成功的转基因阳性番茄接种靶标病毒CMV-Fny,并于一定时间后进行抗病效果的检测。通过与未接病毒的番茄比较,发现转基因阳性番茄对于靶标病毒CMV-Fny具有一定的抗性,主要表现在与普通番茄相比症状减轻或不感病、植株整体生长情况良好,等等。综合这三部分的研究成果,本文初步筛选并建立了番茄amiR159抗黄瓜花叶病毒的遗传转化体系。

关键词：番茄组培扩繁人工miRNA 黄瓜花叶病毒遗传转化