检索结果-南通市图书馆

作者：李云飞河北医科大学

学位级别：硕士

目的:线粒体是机体能量代谢的动力工厂,高耗能器官如骨骼肌、心脏、中枢神经系统、内分泌系统、视网膜和肝脏等易受线粒体功能的影响。由于线粒体几乎不含对自身进行修复的监控系统,因此易发mt DNA突变,导致线粒体功能缺陷或障碍,引起... 详细信息

目的:线粒体是机体能量代谢的动力工厂,高耗能器官如骨骼肌、心脏、中枢神经系统、内分泌系统、视网膜和肝脏等易受线粒体功能的影响。由于线粒体几乎不含对自身进行修复的监控系统,因此易发mt DNA突变,导致线粒体功能缺陷或障碍,引起线粒体病如心脏病、糖尿病,衰老和卵巢功能减退等。本课题组具备线粒体功能障碍模型鼠Fus1 KO鼠使用权,因此,研究线粒体功能障碍模型鼠Fus1 KO鼠的卵巢储备功能,证实其具有卵巢功能减退表型,可以为线粒体功能障碍导致卵巢储备功能减退的机制研究提供数据支撑,同时也进一步拓宽Fus1 KO模型鼠的应用范畴。另外线粒体置换技术(Mitochondrial replacement techniques,MRT)被认为可能是目前唯一阻断线粒体遗传病代际传播的有效途径。纺锤体移植技术因其不涉及卵母细胞体外成熟培养,纺锤体周围无核膜包绕,取出含细胞核胞体携带残余突变线粒体少,优势明显。研究发现,电融合纺锤体移植技术构建重构卵易发染色体异常可能与电融合电刺激有关,而病毒融合对卵胞体刺激较小,因此本研究拟应用病毒融合纺锤体移植(Spindle transfer,ST)技术,检测纺锤体组装调控关键蛋白Bub1相关激酶(Bubl related kinase,Bub Rl)和第五天囊胚的染色体核型,比较取核前后对纺锤体组装关键蛋白Bub R1定位,纺锤体形态,染色体排列和分布以及胚胎发育的影响。为纺锤体移植技术对线粒体遗传病治疗过程中存在的安全性问题提供可靠的实验依据。方法:模型来源及意义:本实验用到的线粒体功能障碍小鼠模型来源于上海市耳鼻疾病转化医学重点实验室;在此模型小鼠中,敲除基因Fus1后,Fus1蛋白丢失。Fus1蛋白主要与线粒体功能有关。由于线粒体蛋白Fus1的丢失,导致线粒体膜电位,钙摄取,呼吸储备,线粒体融合等参数的改变,造成线粒体功能障碍。1.Fus1 KO小鼠卵巢储备功能研究的方法1.1通过眼球取血法分别采取野生型(Wild type,WT)小鼠和Fus1KO小鼠的眼球血,化学发光法定量测定血清中的孕激素(Progesterone,P),雌二醇(Estradiol,E),抗缪勒管激素(Anti mullerian hormone,AMH)水平。1.2将野生型(WT)小鼠和Fus1 KO小鼠分别脱臼处死,称取小鼠体重,快速地找到双侧卵巢,把卵巢周围的脂肪组织钝性分离后,将双侧的卵巢取出,称取卵巢的重量。1.3将卵巢组织进行HE染色,观察卵巢的组织形态并统计初级卵泡和次级卵泡数目。2.病毒融合纺锤体移植对重构胚发育,纺锤体组装,染色体的排列与分布影响研究的方法2.1通过体外受精观察对照组和病毒融合后重构卵组的胚胎发育情况,分别统计两组小鼠卵的受精率、卵裂率、囊胚率、孵化率。2.2免疫荧光化学法检测病毒融合纺锤体移植取核前,取核后和融合后纺锤体组装关键蛋白Bub Rl的定位,纺锤体形态,染色体排列与分布,统计Bub R1定位正常率、纺锤体形态正常率、染色体未分离率。2.3将对照组和病毒融合后重构卵组进行体外受精后,检测对照组和病毒融合后重构卵组第五天囊胚染色体核型是否异常,统计染色体核型异常率。结果:1.Fus1 KO小鼠卵巢储备功能的研究1.1将8周龄、12周龄、20周龄、68周龄、74周龄的Fus1 KO小鼠和WT小鼠的体重和卵巢的重量进行比较,发现实验组和对照组之间没有显著统计学差异(P>0.05);1.2检测8周龄、12周龄、20周龄、68周龄、74周龄的Fus1 KO小鼠和WT小鼠的P、E、AMH水平,发现8周龄和12周龄的Fus1 KO小鼠的P、E、AMH值均显著低于WT小鼠组(P0.05);1.3 8周龄,12周龄的Fus1 KO小鼠的初级卵泡和次级卵泡数均低于WT小鼠组(P0.05);68周龄,74周龄的Fus1 KO小鼠的初级卵泡和次级卵泡数和WT小鼠组相比,没有显著统计学差异(P>0.05);2.病毒融合纺锤体移植对重构胚发育,纺锤体组装,染色体的排列与分布影响2.1对照组和病毒融合后重构卵组之间的受精率、卵裂率、孵化率分别进行比较,没有显著统计学差异(P>0.05);对照组的囊胚率显著高于病毒融合后重构卵组(P纺锤体移植取核前组,取核后组和融合后组之间的Bub R1定位正常率、纺锤体形态正常率、染色体未分离率分别进行比较,发现均没有显著统计学差异(P>0.05);2.3将对照组和病毒融合后重构卵组的第五天囊胚核型异常率相比,没有显著统计学差异(P>0.05)。结论:1.

关键词：线粒体遗传病卵巢储备功能病毒融合纺锤体移植纺锤体组装

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

不同浓度CB对小鼠纺锤体移植后重构卵的细胞骨架及囊胚发育的影响

不同浓度CB对小鼠纺锤体移植后重构卵的细胞骨架及囊胚发育的影响

引用

作者：王启航河北医科大学

学位级别：硕士

目的:线粒体DNA疾病是致病性线粒体DNA（Mitochondrial DNA,mt DNA）突变引起的线粒体功能障碍性疾病。线粒体替代治疗可以预防致病性mt DNA向子代的传递。虽然临床已有通过核质置换技术出生的婴儿,但是实验过程中获得的大多数人囊胚质... 详细信息

目的:线粒体DNA疾病是致病性线粒体DNA（Mitochondrial DNA,mt DNA）突变引起的线粒体功能障碍性疾病。线粒体替代治疗可以预防致病性mt DNA向子代的传递。虽然临床已有通过核质置换技术出生的婴儿,但是实验过程中获得的大多数人囊胚质量相对较差,可用于移植的人囊胚率极低。因此,目前阶段提升核质置换技术效率和重构人囊胚的质量,成为我们研究的重点和难点。本研究做小鼠卵纺锤体移植时,使用不同浓度的细胞松弛素B（Cytochalasin B,CB）处理,先比较电融合和仙台病毒（HVJ-E）融合的融合效率,再检测重构小鼠卵的细胞骨架和统计重构小鼠胚胎发育情况,筛选出小鼠卵纺锤体移植的最适CB浓度,为提高人类纺锤体移植技术提供可靠的实验数据。背景:本研究是在国家重点研发计划“线粒体遗传疾病治疗的辅助生殖新技术研究”中的课题3“线粒体遗传病的筛查及核质置换技术的临床转化应用研究”的基础上进行,前期赴上海交大和中科院神经所进行了核质置换技术的培训,熟练掌握了该技术的各种操作,在对操作技术的研究中明确了纺锤体移植和应用病毒融合的方法的效率最高,而这种方法的难点是CB浓度的选择,因此,针对此问题进行了更深一步的研究。方法:选择同种品系C57BL/6小鼠卵母细胞做纺锤体移植,先比较电融合和HVJ-E融合的效率,再分别使用3.5μg/m L CB（A组）、7.5μg/m L CB（B组）、10μg/m L CB（C组）、12.5μg/m L CB（D组）四个不同浓度的CB处理纺锤体移植过程,包括去核（在本研究中每6-8枚卵为一组,操作时间控制在30min以内。将准备好的卵放在含有不同浓度CB的工作液中孵育5min。用Holding针固定小鼠卵位置,把纺锤体摆成梭形,放在12-1点钟位置,再用去核针将纺锤体-染色体复合物取出）、注核（将取出的核转移到稀释1/20的仙台病毒工作液中,浸泡10-15s,然后注入到另一个去核的卵中,在将注核和去核的胞质进行挤压,利于融合）1.比较不同浓度仙台病毒的融合效率;2.统计小鼠纺锤体移植效率,包括去核率、注核率、融合率;3.统计正常小鼠卵和重构小鼠卵的受精率、卵裂率、囊胚率、孵化率;4.对各组小鼠囊胚行免疫荧光染色检测,在荧光显微镜下计数细胞总数;5.对各组重构小鼠卵的细胞骨架行免疫荧光染色检测,在激光共聚焦扫描显微镜下观察重构小鼠卵的微丝、微管恢复情况。结果:1.A组、B组的重构小鼠卵做仙台病毒融合,稀释1/20倍比稀释1/10倍的HVJ-E融合效率高;2.A组、B组、D组的重构小鼠卵与C组的重构小鼠卵相比,纺锤体移植效率无差异（P＞0.05）;3.A组、B组、C组、D组的融合小鼠卵与对照组的正常小鼠卵相比,受精率、卵裂率,无显著差异（P＞0.05）,D组囊胚率、孵化率显著降低（P＜0.05）;4.A组、B组、D组的重构小鼠囊胚与对照组的正常小鼠囊胚相比,囊胚细胞总数均显著降低（P＜0.05）;C组的重构小鼠囊胚与对照组的正常小鼠囊胚相比,囊胚细胞总数无显著差异（P＞0.05）;5.A组、B组、C组、D组重构小鼠卵母细胞融合后,0h、1h、2h的微丝恢复比率基本无差异;6.A组、B组、D组重构小鼠卵的微丝呈现不均匀分布,C组重构小鼠卵的微丝呈现均匀分布。结论:1.小鼠卵纺锤体移植,稀释1/20倍的HVJ-E融合效率好;2.本研究选择的CB浓度不影响重构小鼠卵的纺锤体移植效率、受精率、卵裂率,但影响重构小鼠卵的囊胚率、孵化率及囊胚总细胞数;3.10μg/m L CB浓度为小鼠卵纺锤体移植过程的最适浓度;4.本研究选择的CB浓度不影响重构小鼠卵的微丝恢复比率,但影响重构小鼠卵的微丝恢复状态。

关键词：细胞松弛素B 纺锤体移植细胞骨架微丝重构小鼠卵

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生殖遗传技术预防线粒体遗传病的研究进展

引用

国际生殖健康／计划生育杂志 2020年第2期39卷 153-157,162页

作者：纪冬梅曹云霞(审校) 安徽医科大学第一附属医院妇产科生殖医学中心国家卫生健康委配子及生殖道异常研究重点实验室合肥230032

发生在卵子中的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)突变引起母系家族性疾病,即线粒体遗传病。线粒体遗传病通常在婴幼儿期发病,且绝大多数线粒体疾病影响到多器官系统的正常功能,是一类严重危害人类健康的可致残致死性疾病,无有效药物... 详细信息

发生在卵子中的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)突变引起母系家族性疾病,即线粒体遗传病。线粒体遗传病通常在婴幼儿期发病,且绝大多数线粒体疾病影响到多器官系统的正常功能,是一类严重危害人类健康的可致残致死性疾病,无有效药物治疗,故女性患者不建议生育。mtDNA遗传学特征使得很多携带致病性mtDNA突变女性的遗传咨询更加困难,但可以考虑通过生殖遗传干预的方法帮助生育,降低后代患有线粒体遗传病的风险。胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)与产前诊断技术可检测突变mtDNA水平,选择正常的胚胎移植或者预防携带高水平突变mtDNA子代的出生,但并不适于所有患者。线粒体置换技术的诞生为预防严重线粒体遗传病带来希望,有望使后代患有线粒体遗传病的风险最小化,但其长期安全性、有效性仍需进一步研究。

关键词： DNA,线粒体线粒体遗传病遗传性疾病,先天性胚胎植入前遗传学诊断植入前诊断产前诊断线粒体置换纺锤体移植原核移植极体移植线粒体替代疗法

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：