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红色诺卡氏菌细胞壁骨架对小鼠急性肝损伤的保护作用

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中华肝脏病杂志 2005年第8期13卷 618-619页

作者：陶俊王颖叶波平刘煜余江河吴梧桐中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

N-CWS是一种从红色诺卡氏菌中提取的细胞壁骨架成分[1],N-CWS对机体免疫系统有一定的调节功能,可增强体内T细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞的活性,诱导体内细胞间黏附分子-1、白细胞介素-1和干扰素-ξ等细胞因子的表达.鉴于在肝炎发病的... 详细信息

N-CWS是一种从红色诺卡氏菌中提取的细胞壁骨架成分[1],N-CWS对机体免疫系统有一定的调节功能,可增强体内T细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞的活性,诱导体内细胞间黏附分子-1、白细胞介素-1和干扰素-ξ等细胞因子的表达.鉴于在肝炎发病的早期阶段有大量炎性细胞浸润和各种细胞因子类物质的表达[2],推测N-CWS可能对肝炎有一定的治疗作用.利用四氯化碳(CCl4)致急性肝损伤小鼠模型探讨N-CWS对急性肝损伤的保护作用.

关键词：红色诺卡氏菌细胞壁骨架小鼠急性肝损伤免疫系统中毒性肝炎

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红色诺卡氏菌的生物活性

微生物学通报 2009年第3期36卷 389-392页

作者：张祝兰唐文力黄颖桢洪金基福建省微生物研究所福建福州350007

为了考察红色诺卡氏菌菌体(NC)的生物活性,通过一定浓度的NC对小鼠灌胃给药,检测其毒性及对免疫器官、巨噬细胞(MΦ)吞噬功能的影响和对肉瘤S180抑制作用。结果表明小鼠口服NC,LD50>10g/kg;NC明显增加小鼠胸腺脾脏重量、提升白细胞数量... 详细信息

为了考察红色诺卡氏菌菌体(NC)的生物活性,通过一定浓度的NC对小鼠灌胃给药,检测其毒性及对免疫器官、巨噬细胞(MΦ)吞噬功能的影响和对肉瘤S180抑制作用。结果表明小鼠口服NC,LD50>10g/kg;NC明显增加小鼠胸腺脾脏重量、提升白细胞数量和提高小鼠MΦ的吞噬活性;对小鼠腹腔MΦ具有明显的激活作用,激活了的MΦ能增强抑杀白色念珠菌作用,正常的小鼠MΦ也有一定的杀菌作用,两者差异显著;对小鼠S180腹水型转实体瘤具有明显的抑制作用。由此得出的结论是,NC毒性低,能显著增强机体免疫功能,具有抗病原微生物感染及明显的抑瘤作用。

关键词：红色诺卡氏菌免疫抑瘤生物活性

红色诺卡氏菌细胞壁骨架对小鼠膀胱癌的治疗作用

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中华实验外科杂志 1999年第6期16卷 554-555页

作者：崔喆李黎明强万明王建宇吴明明虞颂庭天津医科大学总医院泌尿外科 300052

目的　探讨红色诺卡氏菌细胞壁骨架（ＮＣＷＳ）对膀胱肿瘤的治疗效果及其机理。方法　观察皮下注射ＮＣＷＳ对小鼠同系移植膀胱癌的抗癌效应和ＮＣＷＳ对细胞免疫因子的影响。结果　给予ＮＣＷＳ的小鼠与肿瘤对照组比较肿瘤消... 详细信息

目的　探讨红色诺卡氏菌细胞壁骨架（ＮＣＷＳ）对膀胱肿瘤的治疗效果及其机理。方法　观察皮下注射ＮＣＷＳ对小鼠同系移植膀胱癌的抗癌效应和ＮＣＷＳ对细胞免疫因子的影响。结果　给予ＮＣＷＳ的小鼠与肿瘤对照组比较肿瘤消退率为４１．６７％，抑瘤率为９６．２％；ＮＣＷＳ组ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ６及ＮＫ细胞活性和部分Ｔ细胞亚群则明显高于肿瘤对照组，但未能达到正常对照组的水平。结论ＮＣＷＳ对膀胱癌具有明显的抗癌效应，其机理为通过提高机体的ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ６水平和ＮＫ的活性及部分Ｔ细胞亚群，提高机体的抗肿瘤免疫能力。

关键词：红色诺卡氏菌膀胱肿瘤免疫疗法 H-CWS

红色诺卡氏菌高产菌的ARTP诱变选育与发酵条件优化

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化学与生物工程 2024年第3期41卷 46-52页

作者：陈洲琴张祝兰杨煌建程贤严凌斌连云阳福建省微生物研究所福建福州350007 福建省新药(微生物)筛选重点实验室福建福州350007

以红色诺卡氏菌(Nocardia rubra)FIM-PO8为出发菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)技术进行诱变,经筛选获得遗传较稳定的Nocardia rubra高产菌株FIM-PO8-16,并通过单因素实验和正交实验优化了菌株FIM-PO8-16的发酵工艺。确定最佳发酵培养... 详细信息

以红色诺卡氏菌(Nocardia rubra)FIM-PO8为出发菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)技术进行诱变,经筛选获得遗传较稳定的Nocardia rubra高产菌株FIM-PO8-16,并通过单因素实验和正交实验优化了菌株FIM-PO8-16的发酵工艺。确定最佳发酵培养基组分为:酵母粉2.5%、葡萄糖2.5%、蛋白胨0.5%、糊精1.0%;最佳发酵条件为:种子液菌龄30 h、初始pH值7.2、接种量2.0%、装料量100 mL/500 mL、转速230 r·min^(-1)、发酵温度32℃。在此条件下,FIM-PO8-16菌体细胞浓度大幅提高,达到8.31%。

关键词：红色诺卡氏菌常压室温等离子体(ARTP) 发酵条件优化单因素实验正交实验

红色诺卡氏菌次级代谢产物的分离纯化及活性评价

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红色诺卡氏菌次级代谢产物的分离纯化及活性评价

作者：安芳芳福建师范大学

学位级别：硕士

红色诺卡氏菌是从土壤中分离得到的一种诺卡氏菌。诺卡氏菌属与红球菌属、分枝杆菌属、以及棒状杆菌属等共同组成了一种CMNR放线菌群体,有独特的细胞壁成分及结构,其细胞壁是由分枝菌酸、阿拉伯半乳糖、肽聚糖共价结合而成。目前,红色... 详细信息

红色诺卡氏菌是从土壤中分离得到的一种诺卡氏菌。诺卡氏菌属与红球菌属、分枝杆菌属、以及棒状杆菌属等共同组成了一种CMNR放线菌群体,有独特的细胞壁成分及结构,其细胞壁是由分枝菌酸、阿拉伯半乳糖、肽聚糖共价结合而成。目前,红色诺卡氏菌的细胞壁骨架（Nr-CWS）已作为药物应用,Nr-CWS是红色诺卡氏菌经发酵培养、细胞破碎、酶处理、有机溶剂提取后,通过研磨、乳化、冷冻干燥制成一种白色粉末,是一种免疫增强剂,具有刺激先天免疫活性和抗肿瘤活性。本文采用有机溶剂和化学试剂相结合,综合应用凝胶LH-20、正相硅胶和反相硅胶RP-C18柱层析及薄层层析技术对红色诺卡氏菌菌丝体、发酵液及细胞壁骨架的化学成分进行较系统分离纯化,并根据核磁共振波谱数据进行结构解析,并初步评价了相关活性,以期为红色诺卡氏菌代谢产物的进一步开发利用提供依据。红色诺卡氏菌菌丝体化学成分的分离纯化采用3种方式:（1）采用甲醇和氯仿浸提湿菌丝体,从12.6 g菌体获得粗提物E（0.944 g）,分离到化合物FF03和FF05;（2）采用10%四丁基氢氧化铵100℃水浴8 h,二氯甲烷萃取,从13.4 g菌体获得粗提物G（2.130 g）,分离到化合物FF06、FF07、FF09及FF23;（3）10%氢氧化钾80℃水浴1 h,二氯甲烷萃取,从13.3 g菌体获得粗提物H（1.003 g）,分离到化合物FF13、FF14、FF15、FF17。根据核磁共振波谱数据,化合物FF07、FF17、FF23分别解析为heptadecan-8-ol、n-octacos-9-enyl propionate、（E）-dodec-5-enoic acid;FF03、FF06及FF14解析为3-hydroxy-2-（tetradecanoyloxy）propyl（E）-tricos-9-enoate;FF05及FF13解析为methyl（E）-octacos-14-enoate;FF09及FF15解析为分枝菌酸methyl（E）-3-hydroxy-2-octadecylhexacos-12-enoate。分枝菌酸是有抗肿瘤作用的长链脂肪酸,粗提物G中分枝菌酸的得率为12.6%,粗提物H中分枝菌酸的得率为8.7%。除分枝菌酸外,其余化合物为首次从红色诺卡氏菌中分离得到。将18 L红色诺卡氏菌发酵液进行反相硅胶柱吸附,接着以不同浓度甲醇水洗脱（纯水、15%甲醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇）,分别浓缩后得到浸膏9.35 g、1.37 g、14.87 g、3.15 g、0.29 g、0.09 g。用乙酸乙酯:水=1:1分别萃取得到粗提物F1（25.8 mg）、F2（8.7 mg）、F3（103.4 mg）、F4（49.6 mg）、F5（25.3mg）、F6（80.4 mg）,接着用正丁醇:水=1:1分别萃取得到粗提物F7（990.9 mg）、F8（185.4 mg）、F9（2810.1 mg）、F10（320.3 mg）、F11（54.7 mg）、F12（5.2 mg）。对粗提物进行分离,从F3中分离到化合物FF10,F4中分离到化合物FF19,F8中分离到化合物FF25及FF26。根据核磁共振波谱数据,化合物FF10、FF19、FF25及FF26分别解析为Cyclo（L-leucyl-L-prolyl-L-leucyl-L-prolyl）、brevianamide F、butylβ-D-glucopyranoside、L-tryptophan,是首次从红色诺卡氏菌中分离得到。将红色诺卡氏菌菌丝体及发酵液中分离到的化合物（FF03、FF07、FF10、FF13、FF17、FF19、FF23、FF25）进行抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制、乙酰胆碱酯酶抑制、酪氨酸酶抑制活性检测。结果表明,化合物FF19、FF23、FF25有明显的抗氧化活性。化合物FF03、FF13、FF15、FF23浓度为71.41μg/m L时,对α-葡萄糖苷酶的抑制率分别为16.87%、96.14%、42.31%、95.62%,其中化合物FF13的IC为20.56μg/m L。化合物FF03、FF25在浓度为100μg/m L时,对乙酰胆碱酯酶的抑制率分别为68.37%、70.40%,其中化合物FF25的IC为74.76μg/m L。化合物FF10、FF25在浓度为500μg/m L时,对酪氨酸酶的抑制率分别为27.95%、11.10%。采用不同化学试剂对红色诺卡氏菌细胞壁骨架进行降解,离心后,将上清液浓缩,获得总降解产物,并利用TLC初步分析了降解产物。取细胞壁骨架20 mg,用10 m L 20%氨水溶液,37℃140 r/min恒温振荡6 d,处理后得到产物6.1 mg,得率30.5%;取细胞壁骨架28.9 mg,

关键词：红色诺卡氏菌化学成分结构解析活性评价

红色诺卡氏菌发酵条件优化及N-CWS提取工艺的改进研究

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红色诺卡氏菌发酵条件优化及N-CWS提取工艺的改进研究

作者：林清强福建农林大学

学位级别：硕士

目前,肿瘤及许多疾病已成为威胁人类健康的重大隐患。有研究表明,红色诺卡氏菌细胞壁骨架中的提取物具有调节机体免疫的功能,能增强T细胞、巨噬细胞、NK细胞的活性,对于人体淋巴细胞则具有致有丝分裂原活性,并能诱导机体产生干扰素。通... 详细信息

目前,肿瘤及许多疾病已成为威胁人类健康的重大隐患。有研究表明,红色诺卡氏菌细胞壁骨架中的提取物具有调节机体免疫的功能,能增强T细胞、巨噬细胞、NK细胞的活性,对于人体淋巴细胞则具有致有丝分裂原活性,并能诱导机体产生干扰素。通过多年的实验及临床研究证明它具有抗肿瘤作用,并能抗细菌、病毒的感染。在临床治疗肿瘤及妇科相关疾病上有很好的疗效。如今关于N-CWS的研究大多着重于临床上针对其对癌症、炎症的抑制作用进行尝试,而关于红色诺卡氏菌的培养条件优化的研究还停留在较低水平。本研究通过对培养基中的碳源、氮源、无机盐离子、培养基pH值、摇床速度、培养温度、溶氧和接种量等因素进行了优化,通过一系列实验得出较为适合红色诺卡氏菌生长繁殖的培养方式,当培养条件为葡萄糖／酵母膏培养基,pH7-8,26℃摇床培养(320 r/min),50 mL液体培养基接种量在1.5%(0.75 mL)时最为适合。当前,对于红色诺卡氏菌的细胞壁破碎有不同的方法,本文比较了超声波法、自溶法和碱法对Nocardia的破碎情况.试验结果表明,这三种细胞壁破碎方法中超声波法和碱法周期短,效果好;而自溶法周期长效率低,效果不佳。在超声波破碎法中全程破碎时间和输出功率是超声波法破碎的主要影响因素,采用短时多次的破碎方式和质量浓度为1.5 g/L的细胞悬浮液有利于细胞的破碎。同时利用正交法对超声波破壁的条件进行研究,得出在一定菌浓下,用于超声波破壁的最佳设置为超声波时间15s,间隔时间15s,循环数40次,功率500W。在自溶法破碎中,自溶时间是主要影响因素,NaCl质量分数为1%、温度为50℃利于细胞的自溶,经过较长时间的处理时间,10%的NaCl及pH9的液体环境利于自溶。碱液(KOH溶液)浓度为5.5%时最有利于放线菌细胞破壁,破壁时间为30分钟。传统的红色诺卡氏菌细胞壁骨架(N-CWS)成品检测中存在某些不足,本实验通过以下三方面的改进来提升检测水平。用薄层层析法来代替纸层析法并研究影响层析的一些因素,寻得最佳的层析分离效果,使二氨基庚二酸鉴定实验更为明确;同时寻求阿拉伯糖和葡萄糖标准曲线之间的规律性,用葡萄糖来代替阿拉伯糖制作标准曲线进行细胞壁糖含量测定,节约成本;用分光光度计测成品在甲醇的光吸收峰有无吸收峰代替辨色法以使甲醇残留量检测更为可靠。

关键词：红色诺卡氏菌培养条件优化细胞破碎 N-CWS 提取工艺

二次回归正交旋转组合设计优化红色诺卡氏菌超声波破壁工艺

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药物生物技术 2013年第6期20卷 522-527页

作者：林锦彬雷艳谢必峰福建师范大学生命科学学院福建福州350108

以细胞碎片得率为指标,在单因素试验的基础上采用二次回归正交旋转组合设计进行红色诺卡氏菌菌体破壁工艺优化,以期提高破壁效率。根据回归模型进行重要性效应分析,通过频率分析法获得超声破壁最佳工艺参数:固液比1∶2.5、超声功率744 ... 详细信息

以细胞碎片得率为指标,在单因素试验的基础上采用二次回归正交旋转组合设计进行红色诺卡氏菌菌体破壁工艺优化,以期提高破壁效率。根据回归模型进行重要性效应分析,通过频率分析法获得超声破壁最佳工艺参数:固液比1∶2.5、超声功率744 W、每次超声时间3 min、全程超声时间51 min,此工艺参数下,细胞碎片得率可达到约28.3%,相比原工艺上升了62.4%。在扫描电镜下观察菌体破壁前后形态,发现易破壁菌体为长杆状而难破壁菌体趋近于圆球状,优化后工艺参数所得的碎片较小;通过荷瘤小鼠体内抑瘤实验发现小碎片对S-180瘤株的抑制作用约有22.1%提升(抑瘤率分别为40.7%和49.4%),优化积极意义明显。

关键词：红色诺卡氏菌超声波二次回归正交旋转组合设计扫描电镜最优化

基于响应面法对红色诺卡氏菌发酵条件的优化及其发酵动力学研究

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药物生物技术 2015年第1期22卷 49-52页

作者：黄文伟谢必峰福建师范大学生命科学学院福建福州350108

采用响应面法(RSM)对抗肿瘤药物注射用红色诺卡氏菌细胞壁骨架生产菌——红色诺卡氏菌在5 L发酵罐中的发酵条件(搅拌转速、通气量、接种量)进行优化。当搅拌转速、通气量、接种量分别为307 r/min,3.1 L/min,9.2%时,预测的菌体最大生物量... 详细信息

采用响应面法(RSM)对抗肿瘤药物注射用红色诺卡氏菌细胞壁骨架生产菌——红色诺卡氏菌在5 L发酵罐中的发酵条件(搅拌转速、通气量、接种量)进行优化。当搅拌转速、通气量、接种量分别为307 r/min,3.1 L/min,9.2%时,预测的菌体最大生物量为79.91 g,实际生物量为80.22 g。结果表明,在红色诺卡氏菌5 L罐发酵条件优化方面,响应面法是可行的。在此基础上,对红色诺卡氏菌分批发酵的动力学进行了研究,用Logistic和Boltamann函数建立了红色诺卡氏菌发酵过程中菌体生长、底物消耗随时间变化的数学模型,并用Origin 8.0软件对实验值和模型拟合值进行比较,两者能较好的吻合。说明所建动力学模型能较好反映红色诺卡氏菌的分批发酵过程,这为工业补料-分批发酵及其放大提供了理论依据。

关键词：红色诺卡氏菌响应面法优化发酵动力学模型

红色诺卡氏菌Nr-8206株培养形态与其有效物质及杂质关系分析

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微生物学杂志 2021年第5期41卷 30-36页

作者：王丹闫泉香章朦玥薛金艳窦恒王琳张怡轩沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁沈阳110016 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司辽宁本溪117004 沈阳广播电视大学辽宁沈阳110003

筛选红色诺卡氏菌(Nocardia rubra)Nr-8206株适宜投产的最佳培养形态。将红色诺卡氏菌Nr-8206株复壮,通过涂布、形态学考察筛选典型菌落形态。通过发酵技术获得各种菌落形态菌株的生物量,进一步通过细胞破碎、化学提纯等方法获得细胞壁... 详细信息

筛选红色诺卡氏菌(Nocardia rubra)Nr-8206株适宜投产的最佳培养形态。将红色诺卡氏菌Nr-8206株复壮,通过涂布、形态学考察筛选典型菌落形态。通过发酵技术获得各种菌落形态菌株的生物量,进一步通过细胞破碎、化学提纯等方法获得细胞壁多糖产物,紫外可见光分光光度法进行有效物质含量测定及杂质的检测。结果表明,红色诺卡氏菌Nr-8206株的最佳菌落形态为菌落直径1.68 mm、橘色、有突起、有褶皱、菌落边缘丝状,编号RY2。进行菌株RY2发酵,其菌体量最多,经破碎、提纯后,其有效物质糖含量及胞壁酸含量均高于其他形态的菌落,并高于出发菌株Nr-8206,且其杂质蛋白质残余量更低,杂质更容易去除。该研究可供生产企业以该菌株作为工作菌株时提供形态选择参考。

关键词：放线菌红色诺卡氏菌筛选含量测定培养形态杂质检测