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甘露聚糖结合蛋白选择性糖识别的分子机制

生命的化学 1996年第6期16卷 3-5页

作者：陈政良广州第一军医大学免疫学教研室

甘露聚糖结合蛋白选择性糖识别的分子机制陈政良（广州第一军医大学免疫学教研室，广州５１０５１５）关键词甘露聚糖结合蛋白，糖识别甘露聚糖结合蛋白（ｍａｎｎａｎ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＢＰ）是一种血浆蛋白，因被发... 详细信息

甘露聚糖结合蛋白选择性糖识别的分子机制陈政良（广州第一军医大学免疫学教研室，广州５１０５１５）关键词甘露聚糖结合蛋白，糖识别甘露聚糖结合蛋白（ｍａｎｎａｎ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＢＰ）是一种血浆蛋白，因被发现能选择性识别并结合酵母菌外壁上的...

关键词：甘露聚糖结合蛋白糖识别分子机制

人干细胞生长因子Ca^(2+)依赖糖识别结构域缺失突变体的重组表达及生物学活性的初步探讨

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生物技术通讯 2005年第3期16卷 235-238页

作者：原野要晖宇李秀森郭子宽吴英江小霞毛宁军事医学科学院基础医学研究所北京100850

本文作者已有的研究结果证明,完整的人干细胞生长因子(hSCGF)没有种属特异性,即可以作用于小鼠骨髓造血细胞。这一点与在Ca2+依赖糖识别结构域(CRD)缺失了78个氨基酸残基的截短分子(hSCGFβ)有所不同。本研究从hSCGF全长cDNA中完全删除... 详细信息

本文作者已有的研究结果证明,完整的人干细胞生长因子(hSCGF)没有种属特异性,即可以作用于小鼠骨髓造血细胞。这一点与在Ca2+依赖糖识别结构域(CRD)缺失了78个氨基酸残基的截短分子(hSCGFβ)有所不同。本研究从hSCGF全长cDNA中完全删除了CRD结构域编码序列,进一步探讨CRD结构域的生物学功能。由于该突变体序列GC含量较高,因此将该缺失突变体序列克隆在GST融合表达载体中进行融合表达。通过低温(28℃)诱导,表达产物主要以可溶蛋白的形式存在。利用亲和层析纯化CRD结构域完全缺失的hSCGF突变体融合蛋白,通过检测重组突变分子的协同刺激造血活性有无改变来初步探讨CRD结构域在hSCGF分子中的生物学功能。研究结果表明,去掉完整CRD结构域的突变分子仍然具有造血刺激活性。据此推断CRD结构域在hSCGF分子中可能对于受体配体结合起辅助作用。

关键词：细胞生长因子缺失突变体 Ca^2+ 结构域糖识别生物学活性重组表达生物学功能全长cDNA 融合表达载体研究结果 CRD 种属特异性氨基酸残基造血细胞小鼠骨髓编码序列 GC含量可溶蛋白表达产物融合蛋白层析纯化

石英晶体微天平和原子力显微镜识别糖类化合物的苯硼酸接枝聚合物多层薄膜

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分析化学 2015年第11期43卷 1728-1734页

作者：袁文静钟彤闫晶薛中原齐伟王桦生命有机分析中心山东省重点实验室曲阜师范大学化学与化工学院

硼酸受体识别体系近年来被广泛用于糖的分子识别研究,硼酸在一定酸度条件下,可特异性结合含顺式邻位多羟基的物质(如二醇、糖等)。本实验利用EDC/NHS化学交联,3-氨基苯硼酸(APBA)与聚丙烯酸(PAA)反应,制得苯硼酸接枝的聚合物PAA-PBA,进... 详细信息

硼酸受体识别体系近年来被广泛用于糖的分子识别研究,硼酸在一定酸度条件下,可特异性结合含顺式邻位多羟基的物质(如二醇、糖等)。本实验利用EDC/NHS化学交联,3-氨基苯硼酸(APBA)与聚丙烯酸(PAA)反应,制得苯硼酸接枝的聚合物PAA-PBA,进而将此聚合物进行层层组装,获得苯硼酸功能化薄膜。利用石英晶体微天平(QCM)和原子力显微镜(AFM)分别从宏观和微观的角度监测分析了此薄膜表面对糖类化合物的识别性质。结果表明此类薄膜对一定浓度(>50μg/m L)的糖类化合物均能表现出明显识别,其中,对果糖识别最为明显。此体系抗干扰性好,可重复使用,长期保存后仍能较好保持性能。微观表面形貌观察发现糖类化合物在薄膜表面识别均匀,识别后薄膜表面粗糙度发生明显变化。本研究成果可望用于开发高选择性、高灵敏度的糖识别体系。

关键词：苯硼酸层层组装技术糖识别石英晶体微天平原子力显微镜

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人血浆MBL的分离纯化及其特性鉴定

免疫学杂志 1998年第1期14卷 12-14页

作者：陈政良韩强涛易正山张丽芸卢晓彭良平第一军医大学免疫学教研室

应用甘露聚糖－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析，从人血浆中分离纯化了甘露聚糖结合凝集素（ＭＢＬ）。在还原条件下进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，该结合蛋白显示２９ＫＤ的单一条带。１２５Ｉ－甘露聚糖与ＭＢＬ的结合是浓度依赖、可饱和... 详细信息

应用甘露聚糖－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析，从人血浆中分离纯化了甘露聚糖结合凝集素（ＭＢＬ）。在还原条件下进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，该结合蛋白显示２９ＫＤ的单一条带。１２５Ｉ－甘露聚糖与ＭＢＬ的结合是浓度依赖、可饱和的，且受Ｎ－乙酰甘露糖胺、Ｎ－乙酰葡糖胺、甘露糖及Ｌ－岩藻糖的抑制，但葡萄糖、半乳糖及其它单糖则否。这种结合依赖Ｃａ２＋，达５０％最大结合量的Ｃａ２＋浓度大约为１ｍｍｏｌ／Ｌ。

关键词：甘露聚糖结合蛋白亲和层析糖识别钙依赖性

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半乳凝素-9临床研究进展

中华实验外科杂志 2014年第2期31卷 455-458页

作者：王军刘洋马骉张伟辉魏云巍哈尔滨医科大学附属第一医院微创胆道外科 150001

半乳凝素-9（Gal-9）是一个“串联重复”的半乳糖凝素，存在两个保守的碳水化合物识别域（CRD），一个由148个氨基酸残基组成的N一末端糖识别结构域（N—CRD）和由149个氨基酸残基组成的C-末端糖识别结构域（C-CRD），该“串联重复”能... 详细信息

半乳凝素-9（Gal-9）是一个“串联重复”的半乳糖凝素，存在两个保守的碳水化合物识别域（CRD），一个由148个氨基酸残基组成的N一末端糖识别结构域（N—CRD）和由149个氨基酸残基组成的C-末端糖识别结构域（C-CRD），该“串联重复”能诱导活化的T淋巴细胞凋亡。

关键词：半乳凝素临床研究 T淋巴细胞凋亡氨基酸残基碳水化合物糖识别 C-末端诱导活化

甘露聚糖结合凝集素的分离纯化及其与单糖配体的结合活性鉴定

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上海免疫学杂志 2003年第6期23卷 414-416页

作者：沈杰尚世强于晓虹王克夷浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室杭州310003 浙江大学医学院生物化学与分子生物学教研室杭州310031 中国科学院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

从羊血清中分离纯化甘露聚糖结合凝集素 (MBL ) ,并研究其与单糖配体的结合活性 ,为进一步研究MBL与病原微生物的识别结合活性提供研究基础。用甘露聚糖 Sepharose 4B亲和柱行亲和层析 ,从羊血清中分离纯化出MBL分子 ,行还原性SDS PAG... 详细信息

从羊血清中分离纯化甘露聚糖结合凝集素 (MBL ) ,并研究其与单糖配体的结合活性 ,为进一步研究MBL与病原微生物的识别结合活性提供研究基础。用甘露聚糖 Sepharose 4B亲和柱行亲和层析 ,从羊血清中分离纯化出MBL分子 ,行还原性SDS PAGE测定其分子量。用VII型胶原酶鉴定其胶原样结构。用酶联凝集素试验 (ELLA)鉴定其与单糖配体的结合活性。得到纯化的羊血清MBL分子有两种单体 ,相对分子质量分别为 2 90 0 0和 330 0 0。羊血清MBL具有胶原样结构 ,可以被胶原酶消化。羊血清MBL与辣根过氧化物酶表面糖链中甘露糖的结合受N 乙酰葡糖胺、L 岩藻糖、D 氨基葡糖、N 乙酰氨基半乳糖不同程度的抑制。MBL与单糖配体的结合活性预示了其潜在的与表面富含这些糖基结构的病原微生物的识别结合能力。

关键词：甘露聚糖结合凝集素亲和层析糖识别酶联凝集素试验

基于苯硼酸体系糖响应性光子晶体水凝胶的制备及性能研究

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基于苯硼酸体系糖响应性光子晶体水凝胶的制备及性能研究

作者：徐品全武汉理工大学

学位级别：硕士

响应性光子晶体在物理化学传感、智能显示以及光学器件方向具有巨大的开发潜力,也是光子晶体开发研究的一个重要方向。糖响应性光子晶体水凝胶是光子晶体研究领域的一个主要研究方向,其在糖浓度检测、糖识别以及药物释放领域有着十分重... 详细信息

响应性光子晶体在物理化学传感、智能显示以及光学器件方向具有巨大的开发潜力,也是光子晶体开发研究的一个重要方向。糖响应性光子晶体水凝胶是光子晶体研究领域的一个主要研究方向,其在糖浓度检测、糖识别以及药物释放领域有着十分重要的开发前景与应用价值。但是糖响应光子晶体水凝胶也存在聚合速度慢、稳定性差、机械强度低、修饰方法单一等缺点。针对上述问题,本文选取超顺磁性磁性纳米粒子为有序组装基元,异丙基丙烯酰胺(NIPAM)与丙烯酰胺化苯硼酸为凝胶骨架,制备响应性光子晶体水凝胶并研究其性能。论文主要工作如下:1.合成四种丙烯酰胺化苯硼酸类单体,将4种不同的苯硼酸类单体通过ATRP聚合接枝到金片表面,用AFM观测表面形貌,使用QCM-D研究其对于不同单糖的吸附作用。结果表明:对于三种不同单糖,聚合物均表现出良好的吸附性能,而且对于果糖的吸附效果最佳,葡萄糖其次,半乳糖最弱。对于不同单体,含有硫脲基团3-ATPBA与4-ATPBA的聚合物对于糖的吸附能力显著强于不含硫脲基团3-PBA与4-PBA的聚合物,这可能是由于硫脲基团与糖之间存在氢键作用,在苯硼酸与糖作用过程中起到了协同作用,增大了体系与糖的结合力。2.利用溶剂热法制备超顺磁性FeO@PVP磁性纳米粒子团簇。以其为光子晶体的有序组装基元,采用原位催化聚合的方法,将丙烯酰胺化的苯硼酸功能单体与NIPAM共聚形成凝胶骨架,制备糖、温度多重响应性光子晶体水凝胶。对光子晶体水凝胶的温度响应性能研究表明:少量功能单体的加入对其温敏性影响不大,随着功能单体含量的增加,由于其空间位阻作用影响聚合物链段的柔性,光子晶体水凝胶温度响应性变差。对光子晶体水凝胶的糖响应性能研究表明:含有少量功能单体的光子晶体水凝胶与糖结合时,光子禁带偏移较小,随着功能单体含量的增加,水凝胶与果糖与半乳糖作用时发生溶胀,光子晶体衍射峰发生红移。而与葡萄糖作用时,则表现出特殊的收缩响应性,光子晶体衍射峰发生蓝移。含有不同的功能单体的水凝胶对于糖的响应也表现出差异性,含有硫脲基团的Poly(PNI-co-3-ATPBA)光子晶体水凝胶与糖作用时,衍射峰表现出更大的偏移。

关键词：响应性光子晶体糖识别丙烯酰胺化苯硼酸智能水凝胶

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多吡咯有机分子笼的合成及识别性能研究

多吡咯有机分子笼的合成及识别性能研究

作者：张军中南民族大学

学位级别：硕士

有机分子笼是一类具有特定空腔结构的笼状有机分子,在超分子化学领域扮演着重要角色。近年来,新型有机分子笼不断涌现,在气体储存和分离、主客体化学、传感、催化等领域中有着广阔的应用前景。本论文从三维分子笼的角度设计并合成了两... 详细信息

有机分子笼是一类具有特定空腔结构的笼状有机分子,在超分子化学领域扮演着重要角色。近年来,新型有机分子笼不断涌现,在气体储存和分离、主客体化学、传感、催化等领域中有着广阔的应用前景。本论文从三维分子笼的角度设计并合成了两类多吡咯分子笼,即酯类多吡咯有机分子笼和酰胺类多吡咯有机分子笼。这两类有机分子笼既具有氢键受体和供体,又具有合适的空腔尺寸,可以通过三维方向与客体多重相互作用,对阴离子和糖分子有良好的识别性能。本论文主要的内容分为以下四个章节:第一章,主要概述了有机分子笼的定义、发展历程、合成方法和应用。自Cooper等人报道的第一项开创性工作以来,有机分子笼受到越来越多的关注,有机分子笼的种类可分为酰胺类分子笼、亚胺类分子笼和硼酸酯类分子笼等。有机分子笼的合成方法,比如基于不可逆键的有机分子笼和基于可逆键的有机分子笼;有机分子笼可以应用于离子或分子的识别、气体吸附及化合物分离和活性化合物的捕捉。第二章,主要讲述了酯类多吡咯有机分子笼的合成探索。以双乙基酯基吡咯为原料,通过Vilsmeier反应、卤代反应、席夫碱反应和Suzuki偶联反应等一系列反应合成了三种不同取代基酯类多吡咯有机分子笼2-2(a,b,c)。三种分子笼的苯环上乙基取代基越多,其溶解性就越好;将分子笼2-2(a,b)通过硼氢化钠的还原得到酯类多吡咯有机分子笼2-1(a,b)。这些有机分子笼已通过H NMR、C NMR、高分辨质谱和X-射线单晶衍射等表征方法确认了其结构。第三章,主要研究了酯类多吡咯有机分子笼2-2(a,b)和2-1(a,b)对阴离子和糖分子的识别性质。研究发现化合物2-2a对Ac O有较强的识别,结合常数为5.12×10M;化合物2-2b对HPO有较强的识别,结合常数为5.25×10M;化合物2-2a和化合物2-2b均对辛基-beta-D-吡喃葡萄糖苷有明显的识别。然而,分子笼2-1(a,b)表现出与2-2(a,b)不同的识别性能,发现化合物2-1a对HSO有明显的识别;化合物2-1b对F有明显的识别;化合物2-1a和化合物2-1b均对辛基-beta-D-吡喃葡萄糖苷有明显的识别。第四章,主要讲述了酰胺类多吡咯有机分子笼4-2的合成探索。从前体化合物4-3出发,通过席夫碱反应合成了目标化合物4-2。然而该化合物溶解性较差,因此选用紫外-可见吸收光谱研究化合物4-2对阴离子的识别性能,发现其对HPO、HSO、Ac O有较明显的识别。为了改变化合物4-2的溶解性,进行了还原的尝试并没有成功。

关键词：有机分子笼超分子化学阴离子识别糖识别席夫碱反应

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甘露聚糖结合凝集素的分离纯化和活性研究

甘露聚糖结合凝集素的分离纯化和活性研究

作者：沈杰浙江大学

学位级别：硕士

研究背景与目的：甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)，又称甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)，是一种钙离子依赖的(C型)血清凝集素，在防御抵抗多种病原微生物的天然免疫中起着重要的作用，对6个月到2岁的婴... 详细信息

研究背景与目的：甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)，又称甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)，是一种钙离子依赖的(C型)血清凝集素，在防御抵抗多种病原微生物的天然免疫中起着重要的作用，对6个月到2岁的婴幼儿尤其重要。 MBL是一个由若干个相同的亚单位组成的寡聚体分子，每条肽链的C端是一凝集素结构域(碳水化合物识别结构域)，近N端是一胶原样区。这两个结构区与MBL的生物学功能密切相关。其凝集素结构域可以与某些特定的糖配体结合，尤其是与病原微生物表面的糖链结合后，可通过胶原样区激活MBL相关丝氨酸蛋白酶，进而激活补体系统，这条途径称为凝集素途径。MBL也可直接与吞噬细胞表面的胶原凝素受体结合，发挥调理吞噬功能或引起其它的免疫反应。正常情况下MBL的血清浓度很低，1.5mg/L左右，但在感染的早期可升高2-3倍。因基因突变而导致的MBL表达水平降低或结构异常，与免疫功能处于不成熟阶段的儿童对感染的易感性增强密切相关。浙江大学硕土学位论文本研究旨在用亲和层析法分离纯化出MBL分子，并测定其与单糖配体以及与儿童临床上常见细菌的结合活性，探讨其在儿童天然免疫中的作用。方法：将甘露聚糖与漠化氰活化的 SSph。Se 4B偶联，制成亲和柱基质一甘露聚糖Sopharose 4B。将羊血清或人血浆过亲和柱，在钙离子存在的条件下，MBL分子可与柱上的甘露聚糖结合。用EDTA通过螫合钙离子，从亲和柱上洗脱MBL，从而分离纯化出MBL。用还原性10％SDS－PAGE测定羊及人MBL分子单体的分子量。羊血清MBL经胶原酶消化后，将其产物行还原性 10％SDS－PAGE，观察 MBL分子量的变化。用酶联凝集素试验测定羊血清MBL与单糖配体及与常见细菌的结合活性。结果：①MBL的分离纯化：羊血清与人血浆分别经亲和层析后，得到纯化的 MBL分子。在还原条件下行SDS－PAGE，羊血清MBL在29kD和 33kD及更高分子量处有蛋白质条带;人血浆N旧L在30kD及90 kDkD 处有蛋白质条带;②MBL分子胶原样结构的鉴定：羊血清MBL分子被胶原酶消化后，在还原性SDS－PAGE上显示22．4kD及ZI．6kD处有蛋白质条带;③羊血清MBL与单糖配体的结合活性：羊血清MBL分子对各单糖配体的结合有一定的选择性，从大到小依次为：N乙酞氨基葡萄糖＞卜岩藻糖＞＊－氨基葡萄糖＞N－乙酚氨基半乳糖;④羊血清MBL与常见细菌的结合活性：羊血清MBL对不同的细菌有不同的结合力：对解鸟氨酸克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌有很强的结合力;对溶血性葡萄球菌、阴沟肠杆菌、表皮葡萄球菌的结合力相对较弱;对肺炎克雷伯氏菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌的不同菌株结合力差异较大。结论：用甘露聚糖石Cpharose 4B亲和柱行亲和层析能从哺乳动物血清（血．2．浙江大学硕士学位论文浆）中分离纯化出有活性的MBL分子，人血浆MBL单体的分子量是30kD，羊血清MBL单体有两种，分子量分别为29kD和33kD。羊血清MBL分子与其它哺乳动物的MBL分子一样，也具有胶原样结构域。羊血清MBL对各种单糖的结合有不同的选择性，其选择性与人血浆MBL类似。羊血清MBL对不同的细菌有不同的结合力，对革兰氏阴性菌的结合力相对较阳性菌强。

关键词：甘露聚糖结合凝集素儿童天然免疫糖识别细菌