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Tn细胞凋亡抑制蛋白(TnIAP)在粉纹夜蛾细胞中的表达和活性研究

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生物化学与生物物理进展 2002年第5期29卷 741-744页

作者：廖文韬杨扬吴祥甫中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

在粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)细胞Tn 5B1 4中 ,高效表达了来自粉纹夜蛾细胞Tn 5B1 4能够抑制细胞凋亡的TnIAP蛋白 .聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析表明 ,表达的重组TnIAP只有少部分是可溶性蛋白 ,大部分以不溶的形式存在 .这一结果... 详细信息

在粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)细胞Tn 5B1 4中 ,高效表达了来自粉纹夜蛾细胞Tn 5B1 4能够抑制细胞凋亡的TnIAP蛋白 .聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析表明 ,表达的重组TnIAP只有少部分是可溶性蛋白 ,大部分以不溶的形式存在 .这一结果与以往在昆虫细胞中往往表达出可溶性蛋白不同 .活性实验表明 ,可溶的重组TnIAP能够直接抑制caspase 9酶解Ac LEHD AFC的活性 ,也能抑制caspase 9激活HEK2 93细胞抽提物酶解Ac DEVD AFC的活性 .结果进一步证明。

关键词： Tn细胞凋亡抑制蛋白 TnIAP 粉纹夜蛾细胞凋亡表达活性

粉纹夜蛾离体细胞抗菌肽的诱导和抗菌活性测定

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华中师范大学学报（自然科学版） 1999年第4期33卷 564-569页

作者：洪华珠 AnnMarriFallo 华中师范大学生命科学学院武汉430079 明尼苏达大学昆虫学系圣保罗美国55108

以每细胞1 000 个灭活的大肠杆菌诱导粉纹夜蛾传代细胞,诱导细胞的上清液经三氯醋酸沉淀提取诱导蛋白,抗菌活性用液体培养抑制测定法进行检测.试验证明:细胞诱导后第8 h开始产生抗菌物质,第12 h 达最高峰;提取的抗菌物质经100℃处理4 h... 详细信息

以每细胞1 000 个灭活的大肠杆菌诱导粉纹夜蛾传代细胞,诱导细胞的上清液经三氯醋酸沉淀提取诱导蛋白,抗菌活性用液体培养抑制测定法进行检测.试验证明:细胞诱导后第8 h开始产生抗菌物质,第12 h 达最高峰;提取的抗菌物质经100℃处理4 h,仍然保持抗菌活性.

关键词：粉纹夜蛾离体细胞抗菌肽抗菌活性测定

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粉纹夜蛾传代细胞的分泌特性研究

华中师范大学学报（自然科学版） 2009年第2期43卷 278-280页

作者：张铭酒亚明黄薇彭建新华中师范大学生命科学学院武汉430079 华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理教育部重点实验室武汉430074

粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)传代细胞系BTI-Tn5BI(简称5BI)在大肠杆菌的诱导下能够产生抗菌肽。通过电生理技术检测了5BI细胞分泌抗菌肽的分泌特性。实验表明:粉纹夜蛾传代细胞具有一定的可兴奋性,能够在瞬时细胞内钙浓度升高的刺激下产... 详细信息

粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)传代细胞系BTI-Tn5BI(简称5BI)在大肠杆菌的诱导下能够产生抗菌肽。通过电生理技术检测了5BI细胞分泌抗菌肽的分泌特性。实验表明:粉纹夜蛾传代细胞具有一定的可兴奋性,能够在瞬时细胞内钙浓度升高的刺激下产生分泌,且分泌的动力学特征可用双指数拟合,证明其分泌的钙依赖性。

关键词：粉纹夜蛾 5BI细胞膜片钳

粉纹夜蛾类Cry1Ac受体氨肽酶NcDNA片段的克隆与分析

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昆虫学报 2004年第3期47卷 412-416页

作者：蒋才富刘凯于彭蓉彭建新洪华珠华中师范大学昆虫学研究所武汉430079

设计简并引物 ,采用RT PCR方法对粉纹夜蛾Trichoplusiani(H櫣ｂｎｅｒ)细胞系BTI TN 5B1 4的氨肽酶N(aminopeptidaseN ,APN)基因cDNA片段进行了克隆和序列分析 ,通过两对引物扩增出了两种氨肽酶N基因的cDNA片段 ,大小分别为 188bp和5 6 ... 详细信息

设计简并引物 ,采用RT PCR方法对粉纹夜蛾Trichoplusiani(H櫣ｂｎｅｒ)细胞系BTI TN 5B1 4的氨肽酶N(aminopeptidaseN ,APN)基因cDNA片段进行了克隆和序列分析 ,通过两对引物扩增出了两种氨肽酶N基因的cDNA片段 ,大小分别为 188bp和5 6 4bp ,分别命名为AS188(GenBank登录号 :CD80 932 4 )和AS5 6 4 (GenBank登录号 :CD80 932 6 )。对这两个片段推导的氨基酸序列进行同源性分析。

关键词：粉纹夜蛾离体细胞氨肽酶N 基因克隆序列分析

粉纹夜蛾离体细胞对Bt Cry1Ac毒素的抗性发展及其交互抗性

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植物保护学报 2003年第3期30卷 250-254页

作者：刘凯于郑丙莲蒋才富洪华珠彭建新华中师范大学昆虫学研究所武汉430079

以Cry1Ac活性毒素逐代筛选抗性粉纹夜蛾离体细胞BTI-TN-581,抗性发展速度呈S形曲线,经56代选择后,抗性比上升至1280倍。在去除选择压力后,抗性比逐渐下降。低水平抗性细胞抗性衰退较快,而高水平抗性细胞抗性衰退较缓慢。抗性比衰退至1.... 详细信息

以Cry1Ac活性毒素逐代筛选抗性粉纹夜蛾离体细胞BTI-TN-581,抗性发展速度呈S形曲线,经56代选择后,抗性比上升至1280倍。在去除选择压力后,抗性比逐渐下降。低水平抗性细胞抗性衰退较快,而高水平抗性细胞抗性衰退较缓慢。抗性比衰退至1.5倍的细胞在复筛后抗性比恢复较快。抗性细胞对苏云金杆菌工程茵GC-91(Bt GC-91)、苏云金杆菌鲇泽亚种(***)和苏云金杆菌库斯塔克亚种(***)的复合毒素晶体的活性毒素都具有较高的交互抗性,但对农药无交互抗性,对杆状病毒的敏感性也没发生变化。

关键词：粉纹夜蛾离体细胞 BtCrylAc毒素抗性发展交互抗性

粉纹夜蛾细胞系QB-Tn9-4s的克隆以及克隆株生物学特性的研究

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环境昆虫学报 2009年第1期31卷 35-40页

作者：马明李长友郑桂玲李银花李国勋青岛农业大学无脊椎动物细胞培养与细胞工程中心青岛266109

对粉纹夜蛾Trichoplusiani细胞系QB-Tn9-4s进行细胞克隆,获得了8个细胞克隆株,分别命名为QB-Tn-A、B、C、D、E、F、G和H。对基因组DNA进行RAPD-PCR鉴定,各细胞克隆株与原始细胞系具有相同的DNA扩增谱带。各细胞克隆株在形态和生物学特... 详细信息

对粉纹夜蛾Trichoplusiani细胞系QB-Tn9-4s进行细胞克隆,获得了8个细胞克隆株,分别命名为QB-Tn-A、B、C、D、E、F、G和H。对基因组DNA进行RAPD-PCR鉴定,各细胞克隆株与原始细胞系具有相同的DNA扩增谱带。各细胞克隆株在形态和生物学特性方面表现出一定的差异。克隆株QB-Tn-A、B、C、D和E以梭形细胞为主,大约占细胞总数的60%～80%;F、G和H以棒状细胞为主,比例分别为44.5%、49.5%和80.0%。8个克隆株对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)均较敏感,感染率均在92%以上,平均每个细胞病毒多角体(OBs)产量在78～110个之间,其中克隆株QB-Tn-A多角体产量最高达110个,略高于BTI-Tn5B1-4和QB-Tn9-4s,明显高于Sf-9细胞;克隆株QB-Tn-E、H、A和C的出芽性病毒(BV)产量与原始细胞系(3.37×107TCID50/mL)接近,而其它4株均低于原始细胞系。

关键词：粉纹夜蛾悬浮性细胞系细胞克隆 AcMNPV 病毒产量

粉纹夜蛾中肠微生物中产AHLs群体感应信号分子菌株的分离鉴定

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生物技术通报 2014年第7期30卷 196-200页

作者：黄媛媛马宏贾振华黄亚丽宋水山张霞河北省科学院生物研究所石家庄050081 河北省主要农作物病害微生物控制工程技术研究中心石家庄050081

利用紫色杆菌(Chromobacterium violaceum CV026)报告系统从粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)中肠中分离出两株可以产群体感应信号分子的菌株Tni-9和Se-9。通过16S rDNA序列分析结果可知,分离菌株均与蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtiiATCC 43186)有高度同源性,在系统发育树内位于同一分支。选取菌株Se-9进行生理生化特性鉴定,进一步证实该菌株为蒙氏肠球菌。将菌株Se-9进行薄层层析分析,发现该菌株可以产生两种群体感应信号分子C6-HSL和3OC6-HSL。

关键词：粉纹夜蛾中肠微生物群体感应薄层层析分离鉴定

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粉纹夜蛾新细胞系的建立及其特性研究

粉纹夜蛾新细胞系的建立及其特性研究

作者：孟敏娟河北农业大学

学位级别：硕士

昆虫细胞作为生物农药和基因表达的新型生物反应器而备受青睐。因此,不断发掘新昆虫细胞系,为科学研究和生产提供新资源,是目前研究的热点。本研究以粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)受精卵为材料,建立多株粉纹夜蛾胚胎细胞系,从中筛选了一株... 详细信息

昆虫细胞作为生物农药和基因表达的新型生物反应器而备受青睐。因此,不断发掘新昆虫细胞系,为科学研究和生产提供新资源,是目前研究的热点。本研究以粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)受精卵为材料,建立多株粉纹夜蛾胚胎细胞系,从中筛选了一株悬浮的群体倍增时间短的,高产昆虫杆状病毒和外源蛋白的昆虫细胞系,命名为QB-Tn9-4s。QB-Tn9-4s细胞在辅以10%小牛血清的TNM-FH培养基中原代培养80多天开始分裂细胞。开始细胞生长慢,并且不稳定,10天左右传代一次,细胞稳定后3～4天传代一次,现已传代60多代。QB-Tn9-4s细胞形态70%为纺锤形,大小为18.22×57.70μm,30%为圆形,半径22.19μm。该细胞原代培养时是贴壁生长的,开始传代培养时贴壁性较弱,细胞稳定传代培养后呈悬浮生长且增殖很快,群体倍增时间为25.4小时,最大生长密度可达2.0×10～6cells/mL。对苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopol-yhedrosisvirus,AcMNPV)、甘蓝夜蛾核型多角体病毒(Mamestra brassica NPV,MbNPV)、粘虫核型多角体病毒(Mythimna separata NPV,MsNPV)等病毒敏感。接种AcMNPV病毒,96小时病毒感染率达92%,多角体产量平均为(107.2±4.5)OBs/cell,是一株高产杆状病毒的细胞系。通过随机扩增DNA-聚合酶链式反应实验,用引物OPU-09,OPU-10,N0.2,***鉴定,细胞系QB-Tn9-4s的基因组DNA与粉纹夜蛾卵基因组DNA,Tn5B1-4细胞基因组DNA的条带一致,与Sf-9细胞基因组DNA条带明显不同,说明细胞系QB-Tn9-4s是一株来源于粉纹夜蛾胚胎细胞的细胞系,并且该细胞与实验室保存的其它细胞没有交叉污染。QB-Tn9-4s是一株高表达重组蛋白的昆虫细胞系。用重组病毒AcMNPV-β-gal侵染细胞,QB-Tn9-4s细胞内β-半乳糖苷酶的产量与Tn5B1-4相当,而远高于Sf-9,第8天达到最大表达量(2.53±0.034)×10～4IU/mL是Sf-9的1.98倍。随着时间的延长,QB-Tn9-4s培养基中酶量逐渐增加,第八天时QB-Tn9-4s细胞内和培养基中的酶总的表达水平达到(3.97±0.13)×10～4IU/mL。AcMNPV-SEAP感染该细胞,其细胞内的分泌型碱基性磷酸酶表达量水平明显的低于培养基中的表达水平,最高只达0.8 IU/mL。QB-Tn9-4s感染重组蛋白碱性磷酸酶总的表达水平与Tn5B1-4相当,第9天达到最大表达量(3.52±0.4)IU/mL,但是始终高于Sf-9,并且第9天表达量是Sf-9的2.32倍。

关键词：粉纹夜蛾细胞系 QB-Tn9-4s RAPD-PCR 病毒产量蛋白表达

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粉纹夜蛾5BI细胞的悬浮培养

华中师范大学学报（自然科学版） 1996年第4期30卷 472-475页

作者：彭建新杨红洪华珠潭文松华中师范大学昆虫学研究所华东理工大学生化工程研究所

报道了粉纹夜蛾５ＢＩ细胞在转瓶系统悬浮培养及血清浓度、细胞接种浓度、非离子表面活性剂ＰｌｕｒｎｉｃＦ－６８等对细胞生长的影响与作用．实验结果显示：５ＢＩ细胞能够在搅拌条件下，在含５％血清培养基中正常生长增殖，当血清浓... 详细信息

报道了粉纹夜蛾５ＢＩ细胞在转瓶系统悬浮培养及血清浓度、细胞接种浓度、非离子表面活性剂ＰｌｕｒｎｉｃＦ－６８等对细胞生长的影响与作用．实验结果显示：５ＢＩ细胞能够在搅拌条件下，在含５％血清培养基中正常生长增殖，当血清浓度降至２％时，细胞生长速率产生较明显变化；ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ－６８对细胞生长有显著的保护作用．

关键词：粉纹夜蛾 5BI细胞悬浮培养病毒杀虫剂