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生物化学与生物物理进展 2002年第3期29卷 390-393页

作者：杨青胡学军许小明高晓蓉安利佳苏志国 J.C.JANSON 大连理工大学化工学院大连116012 中国科学院化工冶金研究所生物化学工程国家重点实验室北京100080 Biosurface Science Center

根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇... 详细信息

根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇瓶中培养 ,甲醇诱导分泌表达 .上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到 :QSepharoseFF和Benzamidine Sepharose 4BCL .与天然蛇毒类凝血酶一致 ,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性 ,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱 .此重组类凝血酶在 37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽 ,但在 0℃下很稳定 .该酶的最适pH为 8 0 .

关键词：大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因毕赤酵母克隆表达分离纯化

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蝮蛇类凝血酶基因的分析及表达研究

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第1期31卷 81-84页

作者：潘华周元聪杨冠珍吴祥甫中国科学院上海生物化学研究所

从蝮蛇（ＡｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｈａｌｙｓＰａｌａｓ）毒腺中抽提总ＲＮＡ，经ＲＴＰＣＲ扩增该基因，克隆后经全序列测定，蝮蛇类凝血酶ｐａｌａｓｅ的ｃＤＮＡ长７０８个核苷酸，即编码２３６个氨基酸；根据同源性，推测该类凝血... 详细信息

从蝮蛇（ＡｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｈａｌｙｓＰａｌａｓ）毒腺中抽提总ＲＮＡ，经ＲＴＰＣＲ扩增该基因，克隆后经全序列测定，蝮蛇类凝血酶ｐａｌａｓｅ的ｃＤＮＡ长７０８个核苷酸，即编码２３６个氨基酸；根据同源性，推测该类凝血酶ｐａｌａｓｅ的活性中心为Ｈｉｓ４１、Ａｓｐ８６和Ｓｅｒ１８２；二硫键为Ｃｙｓ７Ｃｙｓ１３９、Ｃｙｓ２６Ｃｙｓ４２、Ｃｙｓ７４Ｃｙｓ２３４、Ｃｙｓ１１８Ｃｙｓ１８８、Ｃｙｓ１５０Ｃｙｓ１６７和Ｃｙｓ１７８Ｃｙｓ２０３；该蝮蛇毒类凝血酶ｃＤＮＡ序列及推导的氨基酸序列均为首次报道。构建Ｔ７启动子控制下的ｐａｌａｓｅ的大肠杆菌表达质粒，ＩＰＴＧ诱导ｐａｌａｓｅ获得表达。

关键词：蝮蛇类凝血酶基因克隆序列分析大肠杆菌表达

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长白蝮蛇类凝血酶基因的克隆及分析(英文)

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蛇志 2001年第3期13卷 1-9页

作者：杜道林邓晓东吴文芳吕国安徐梅中国科学院沈阳生态研究所热带作物生物技术国家重点实验室海南海口571101

从长白蝮蛇 ( Agkistrodon halys Ussurin)毒腺中抽提总 RNA,采用 RT-PCR扩增其类凝血酶基因 ,经全序列测定 ,获得 2个类凝血酶基因 ,ussurin和 ussurase,它们全长分别为 70 8和 699个核苷酸 ,即分别编码 2 36和2 33个氨基酸 ;根据同源... 详细信息

从长白蝮蛇 ( Agkistrodon halys Ussurin)毒腺中抽提总 RNA,采用 RT-PCR扩增其类凝血酶基因 ,经全序列测定 ,获得 2个类凝血酶基因 ,ussurin和 ussurase,它们全长分别为 70 8和 699个核苷酸 ,即分别编码 2 36和2 33个氨基酸 ;根据同源性 ,推测它们的活性中心分别为His43 ,Asp88和 Ser1 82 与 His40 ,Asp85和 Ser1 79;二硫键分别为 Cys7-Cys1 4 1 ,Cys2 8-Cys44 ,Cys76 -Cys2 3 4,Cys1 2 0 -Cys1 88,Cys1 52 -Cys1 6 7和 Cys1 78-Cys2 0 3 ;与 Cys7-Cys1 3 8,Cys2 5-Cys41 ,Cys73 -Cys2 3 1 ,Cys1 1 7-Cys1 85,Cys1 4 9-Cys1 6 4 和 Cys1 75-Cys2 0 0 。该蛇毒类凝血酶 c

关键词：长白蝮蛇类凝血酶基因基因克隆序列分析

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长白蝮蛇类凝血酶基因(Ussurase)的克隆及分析(英文)

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海南师范学院学报 2001年第3期14卷 85-93页

作者：杜道林吴文芳吕国安徐梅邓晓东中国科学院沈阳应用生态研究所热带作物生物技术国家重点实验室海南海口571101

从长白蝮蛇（Agkistrodon halys Ussuriensis）毒腺中抽提总RNA,采用RT-PCR扩增其类凝血酶基因,经全序列测定,类凝血酶基因ussurase全长为699个核苷酸,即编码233个氨基酸;根据同源性,推测它的活性中心为His40,Asp85和Ser179;二硫键为Cys... 详细信息

从长白蝮蛇（Agkistrodon halys Ussuriensis）毒腺中抽提总RNA,采用RT-PCR扩增其类凝血酶基因,经全序列测定,类凝血酶基因ussurase全长为699个核苷酸,即编码233个氨基酸;根据同源性,推测它的活性中心为His40,Asp85和Ser179;二硫键为Cys7-Cys138,Cys25-Cys41,Cys73-Cys231,Cys117-Cys185,Cys149-Cys164和Cys175-Cys200。该蛇毒类凝血酶cDNA序列及推导的氨基酸序列均为首次报道。

关键词：长白蝮蛇类凝血酶基因克隆序列分析

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