大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化(英文)

作     者：杨青 胡学军 许小明 高晓蓉 安利佳 苏志国 J.C.JANSON 

作者机构：大连理工大学化工学院大连116012 中国科学院化工冶金研究所生物化学工程国家重点实验室北京100080 Biosurface Science Center 

出 版 物：《生物化学与生物物理进展》 (Progress In Biochemistry and Biophysics)

年 卷 期：2002年第29卷第3期

页      面：390-393页

核心收录：

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 090102[农学-作物遗传育种] 0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 0703[理学-化学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

基　　金：辽宁省科学技术基金项目 (993 0 5 0 0 1) 瑞典政府NUTEK基金资助 .~~ 

主　　题：大连蛇岛 蝮蛇 类凝血酶基因 毕赤酵母 克隆 表达 分离纯化 

摘      要：根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇瓶中培养 ,甲醇诱导分泌表达 .上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到 :QSepharoseFF和Benzamidine Sepharose 4BCL .与天然蛇毒类凝血酶一致 ,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性 ,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱 .此重组类凝血酶在 37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽 ,但在 0℃下很稳定 .该酶的最适pH为 8 0 .