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竹节参多糖的提取分离、结构修饰与活性研究

竹节参多糖的提取分离、结构修饰与活性研究

作者：王如锋武汉工业学院

学位级别：硕士

本论文主要对竹节参中多糖成分进行了系统深入的研究。优化了竹节参多糖的提取工艺;分级获得5种竹节参多糖;比较分析了5种竹节参多糖样品和未分级前的竹节参多糖（Z）的化学组成及结构异同;进行了竹节参多糖成分体内、体外药理活性的评... 详细信息

本论文主要对竹节参中多糖成分进行了系统深入的研究。优化了竹节参多糖的提取工艺;分级获得5种竹节参多糖;比较分析了5种竹节参多糖样品和未分级前的竹节参多糖（Z）的化学组成及结构异同;进行了竹节参多糖成分体内、体外药理活性的评价研究;开展了竹节参多糖成分化学结构修饰的研究，获得了竹节参硫酸酯化多糖和竹节参多糖铁复合物，得到了两种产物的最佳合成工艺。主要研究内容如下： 1.通过响应面优化设计法对竹节参多糖的提取工艺进行了优化研究，结果表明：得到的拟合方程可信度高，拟合程度好，失拟项不显著;通过软件分析，竹节参多糖的最佳提取工艺为：提取时间为3.74h、提取温度为93.90°C、液料比为40.22。 2．对Sevag法脱蛋白后的竹节参多糖进行分级醇沉，在40%、50%、60%、75%、90%醇浓度下分别得到Z1、Z2、Z3、Z4和Z55种竹节参多糖组分;分别采用硫酸-苯酚法、间羟联苯法和考马斯亮蓝法对竹节参多糖进行了多糖含量、糖醛酸含量和蛋白质含量的分析测定，结果表明：Z1多糖含量最高，为98.01%;Z2糖醛酸含量最高，为27.71%;Z中含有极少量的蛋白质，其余样品未检出蛋白质。FT-IR检测6种多糖样品都具有明显的多糖特征峰，都含有糖醛酸和α-吡喃型糖环。 3.通过薄层色谱法对6种竹节参多糖样品中单糖组成进行初步定性分析;气相色谱法进行定性、定量分析，通过对HP-5、DB-17和DB-35MS三种色谱柱的选择及糖醇乙酸酯衍生法和糖腈乙酸酯衍生法的比较，确定采用糖醇乙酸酯衍生法和DB-35MS色谱柱进行GC分析。测定出多糖样品中单糖组成为阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖，Z、Z1、Z2、Z3、Z4和Z5中单糖组成（Ara：Gal：Glc）的摩尔比分别为0.49:1:5.799、0.505:1:13.170、0.344:1:6.197、0.319:1:1.311、0.436:1:1.007、2.252:1:2.824。 4.采用氯磺酸-吡啶法成功合成竹节参硫酸酯化多糖，产物硫取代度可达0.7801;紫外和红外光谱证实竹节参硫酸酯化多糖具有-SO3的特征吸收峰，且未改变多糖类物质的本质。通过FeCl3法成功制取竹节参多糖铁复合物,产物中的铁核是以三价铁通过氧桥和羟基桥聚合而形成的以β-FeOOH聚合铁核为结构中心的聚合状态。 5.竹节参多糖药理活性的研究，通过对清除羟基自由基、清除超氧阴离子自由基和清除DPPH自由基能力的研究，考察了6种竹节参多糖体外抗氧化活性的能力，结果表明：竹节参多糖都具有显著的体外抗氧化活性，样品之间的抗氧化的能力存在较大差异，达到一定浓度后Z5的活性最好;各样品在相同浓度下，清除三者自由基中以清除DPPH能力最强，Z5浓度为10mg/ml时，清除DPPH效率已达90%。采用二甲苯致耳肿胀模型、腹腔毛细血管通透性试验和小鼠热板、扭体试验分别考察其抗炎镇痛的作用，结果表明竹节参多糖能够有效延长小鼠痛阈值，减少扭体次数，抑制耳肿胀，降低毛细血管通透性。

关键词：竹节参多糖提取结构修饰活性研究

竹节参多糖提取分离和免疫调节及抗肿瘤活性研究

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竹节参多糖提取分离和免疫调节及抗肿瘤活性研究

作者：李春艳中南大学

学位级别：硕士

目的建立竹节参多糖(Panax j aponicus poly saccharide, PJPS)含量的测定方法,获得合理、稳定、效率高的PJPS提取工艺,探讨其在免疫调节和抗肿瘤方面的活性。方法 1以无水葡萄糖为标准品,采用分光光度法,对蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法的... 详细信息

目的建立竹节参多糖(Panax j aponicus poly saccharide, PJPS)含量的测定方法,获得合理、稳定、效率高的PJPS提取工艺,探讨其在免疫调节和抗肿瘤方面的活性。方法 1以无水葡萄糖为标准品,采用分光光度法,对蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法的测定条件和方法学进行考察,并比较两种方法测定竹节参多糖含量的结果。 2以PJPS提取率为考察指标,以单因素实验为基础,采用正交试验确定最佳提取工艺,通过木瓜蛋白酶法、分步醇沉对PJPS进行精制。 3通过小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、迟发型超敏反应(Delayed-type hypersensitivity, DTH)实验、血清溶血值测定实验从非特异性免疫应答、细胞性免疫应答和体液免疫应答三个方面研究PJPS对环磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫调节能力。 4采用MTT法检测不同浓度PJPS分别在24h、48h及72h对人肺癌细胞HTB182、人肠癌细胞SW480、人肾癌细胞HEK293、人鼻咽癌细胞5-8F及人肝癌细胞HepG2增殖的作用。结果 1蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法均可用于测定竹节参中多糖含量,但蒽酮硫酸法的测定结果高于苯酚硫酸法,其标准曲线的线性,稳定性和重现性均优于苯酚硫酸法。 2PJPS的最佳提取工艺为：40倍溶剂用量,浸泡40min,100℃,提取两次,每次4h。木瓜蛋白酶法能较好地去除PJPS中的蛋白质,分步醇沉实验将PJPS分为PJPS I和PJPS II两部分。 3PJPS能显著提高环磷酰胺所致免疫低下小鼠巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,且与阳性对照香菇多糖组的作用相当,对免疫低下小鼠的廓清指数K和吞噬指数α具有明显的提高作用,也能明显改善免疫低下小鼠的脾脏和胸腺指数及血清中IgM水平,且对免疫低下小鼠血清中IgM水平改善程度明显优于阳性对照香菇多糖。 4与阴性对照组相比,不同浓度PJPS在24h、48h、72h对人肺癌细胞HTB182、人肠癌细胞SW480、人肾癌细胞HEK293、人鼻咽癌细胞5-8F及人肝癌细胞HepG2增殖无显著性影响。结论 1蒽酮硫酸法更适于测定竹节参中多糖的含量,此方法简单快速,重现性好,测定结果可靠。 2PJPS的最佳提取工艺为：40倍溶剂用量,浸泡40min,100℃,提取两次,每次4h。 3PJPS能从非特异性免疫应答、细胞性免疫应答和体液免疫应答三个方面不同程度地调节环磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫功能。 4PJPS对人肺癌细胞HTB182、人肠癌细胞SW480、人肾癌细胞HEK293、人鼻咽癌细胞5-8F及人肝癌细胞HepG2无增殖抑制作。

关键词：竹节参多糖含量测定提取免疫调节抗肿瘤

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竹节参多糖成分及活性的研究

竹节参多糖成分及活性的研究

作者：许彬武汉工业学院

学位级别：硕士

本文系统研究了竹节参多糖成分的提取、分离、纯化工艺,对其多糖成分的理化性质及化学结构进行了分析研究,得到了一个化学结构明确的均一多糖成分,同时对竹节参多糖成分的活性进行了系统的评价研究,主要内容如下: 1.比较了竹节参多糖不... 详细信息

本文系统研究了竹节参多糖成分的提取、分离、纯化工艺,对其多糖成分的理化性质及化学结构进行了分析研究,得到了一个化学结构明确的均一多糖成分,同时对竹节参多糖成分的活性进行了系统的评价研究,主要内容如下: 1.比较了竹节参多糖不同的提取方法:分别采用水提法、生物酶法对竹节参多糖的提取工艺进行优化研究。研究结果表明生物酶法较水提法得率高,优化后的工艺能够有效酶解纤维素和果胶,使竹节参多糖成分易于浸出,对多糖结构没有破坏性,且该工艺较简单,时间短,耗能低,得率高,水提法提取竹节参中多糖成分得率为11.61%,生物酶法提取多糖得率为23.2%。 2.采用Sevage法、TCA法和木瓜蛋白酶法对竹节参多糖进行脱蛋白研究:研究结果表明木瓜蛋白酶的脱蛋白率和多糖回收率最高,木瓜蛋白酶能有效去除竹节参粗多糖中的游离蛋白质,多糖损失率小。 3.比较活性炭和大孔树脂对竹节参多糖的脱色效果:研究结果表明大孔树脂D101不仅能有效脱除色素,而且基本不吸附多糖。这是一种理想的脱色方法。 4.提取分离到均一多糖成分:通过DEAE-纤维素离子交换树脂和葡聚糖凝胶Sephadex G-75柱层析得到一个均一多糖组分,其紫外扫描表明不含有核酸与蛋白质,红外光谱分析表明不含糖醛酸的中性糖,糖组分分析表明都含葡萄糖和半乳糖,分子量为6383,目前尚未见此均一多糖成分的相关研究报道。 5.进行了多糖成分的活性评价研究:竹节参多糖PJCP-1能有效拮抗D-半乳糖所致小老鼠免疫器官胸腺和脾脏的萎缩,降低小鼠血清MDA含量,提高小鼠血清SOD、肝GSH-Px和脑CAT的活力,从而清除体内代谢时产生的自由基离子,阻断体内脂质过氧化,并分解过氧化氢以减少脂质过氧化物和氧自由基对机体的损伤以延缓衰老。

关键词：竹节参多糖提取分离纯化活性评价

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鄂产竹节参多糖的抗炎、镇痛活性

中国医院药学杂志 2012年第7期32卷 491-494页

作者：王如锋陈平贾放马芳汤进杨小林武汉工业学院生物与制药工程学院．湖北武汉430023

目的:提取分离竹节参多糖,初步研究其化学组成及评价抗炎镇痛的活性。方法:采用化学法测定竹节参多糖的成分,红外光谱分析其结构;采用二甲苯致耳肿胀模型、腹腔毛细血管通透性试验和小鼠热板、扭体试验分别考察其抗炎、镇痛效果。结果:... 详细信息

目的:提取分离竹节参多糖,初步研究其化学组成及评价抗炎镇痛的活性。方法:采用化学法测定竹节参多糖的成分,红外光谱分析其结构;采用二甲苯致耳肿胀模型、腹腔毛细血管通透性试验和小鼠热板、扭体试验分别考察其抗炎、镇痛效果。结果:分析显示竹节参多糖中含有α-吡喃糖环结构;竹节参多糖能够有效延长小鼠痛阈值,减少扭体次数,抑制耳肿胀,降低毛细血管通透性。结论:竹节参多糖为竹节参中抗炎镇痛活性成分之一。

关键词：竹节参多糖成分活性

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鄂产竹节参多糖成分抗疲劳作用的研究

中国医院药学杂志 2006年第12期26卷 1459-1461页

作者：刘桂林陈平张俊红张宇廖朝林武汉工业学院生物与制药工程系湖北武汉430023 湖北省农科院中药材研究所湖北恩施445000

目的：研究鄂产竹节参多糖类成分对小鼠的抗疲劳作用。方法：取♂性昆明种小鼠，体重20～25g，随机分为低、中、高3组，经灌胃给予小鼠竹节参多糖提取物300，600，1200mg·kg^-1·d^-1。同时设空白对照组（纯化水），连续灌胃30d。分别... 详细信息

目的：研究鄂产竹节参多糖类成分对小鼠的抗疲劳作用。方法：取♂性昆明种小鼠，体重20～25g，随机分为低、中、高3组，经灌胃给予小鼠竹节参多糖提取物300，600，1200mg·kg^-1·d^-1。同时设空白对照组（纯化水），连续灌胃30d。分别观察小鼠的体重变化情况、负重游泳时间、血清尿素氮、肝糖原和血乳酸的含量。结果：低、中、高3个剂量组对实验小鼠体重变化均无影响，可显著延长小鼠的游泳时间，降低小鼠血清尿素氮的含量；中、高剂量组能明显降低运动后小鼠血乳酸含量并提高肝糖原的储备值。结论：鄂产竹节参多糖类成分具有抗疲劳的作用。

关键词：竹节参多糖抗疲劳作用小鼠

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竹节参多糖的药理活性研究概况

大众科技 2021年第10期23卷 68-71页

作者：唐浪黄胜杨付明吴广阳雷雅婷湖北民族大学医学部湖北恩施445000 湖北民族大学医学部生化教研室湖北恩施445000

随着民族特色药物的研究与发展,竹节参活性成分之一的竹节参多糖的药理活性研究亦越来越多,竹节参多糖具有抗炎、抗氧化、免疫调节、改善学习记忆、保护神经元、降血脂、护肝、抗疲劳及抗肿瘤等多种药理活性。笔者主要对近年来知网、维... 详细信息

随着民族特色药物的研究与发展,竹节参活性成分之一的竹节参多糖的药理活性研究亦越来越多,竹节参多糖具有抗炎、抗氧化、免疫调节、改善学习记忆、保护神经元、降血脂、护肝、抗疲劳及抗肿瘤等多种药理活性。笔者主要对近年来知网、维普、万方上关于竹节参多糖的药理活性研究进行概述,为今后关于竹节参多糖及其组分的分离纯化和药理研究的提供参考价值。

关键词：竹节参多糖药理活性研究概况

竹节参多糖对对乙酰氨基酚诱导的小鼠肝损伤的保护作用

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中南民族大学学报（自然科学版） 2020年第1期39卷 51-55页

作者：徐瑞刘钊付千段欢邓旭坤睢宁县人民医院药剂科徐州221200 中南民族大学药学院武汉430074 中南民族大学学报编辑部武汉430074

目的:探究竹节参多糖(PSPJ)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的小鼠肝损伤的保护作用.方法:将32只小鼠随机分为对照组、模型组、PSPJ低(50 mg·kg^-1)、中(100 mg·kg^-1)、高(200 mg·kg^-1)剂量组,腹腔注射APAP(400 mg·kg^-1)建立肝损伤模型... 详细信息

目的:探究竹节参多糖(PSPJ)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的小鼠肝损伤的保护作用.方法:将32只小鼠随机分为对照组、模型组、PSPJ低(50 mg·kg^-1)、中(100 mg·kg^-1)、高(200 mg·kg^-1)剂量组,腹腔注射APAP(400 mg·kg^-1)建立肝损伤模型.通过检测实验小鼠的存活率,肝脏病理变化,血清中AST、ALT、LDH的水平,肝脏的GSH、MDA水平及炎症因子IL-1β、IL-6浓度变化情况来观察竹节参多糖对APAP诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用.结果:在连续7天灌胃给予竹节参多糖之后,小鼠生存率提高(P竹节参多糖还显著降低了肝损伤小鼠血清中ALT、AST、LDH及炎症因子IL-1β和IL-6水平(P竹节参多糖可能通过抗氧化和抗炎途径来减缓APAP诱导的急性肝损伤.

关键词：竹节参多糖对乙酰氨基酚肝损伤抗氧化抗炎

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竹节参多糖对肝细胞损伤的影响

中国中医药信息杂志 2014年第11期21卷 59-62页

作者：覃玉娥张长城王婷袁丁刘朝奇三峡大学分子生物学研究所湖北宜昌443002 三峡大学医学院湖北宜昌443002

目的探讨竹节参多糖对脂肪变性肝细胞的保护作用。方法制备竹节参多糖不同浓度(30%、60%及90%)乙醇洗脱部位,应用棕榈酸(PA)诱导HepG2脂肪变性的细胞模型,筛选药物的干预活性,采用MTT法观察细胞存活状况,油红O染色观察细胞脂肪变性情况... 详细信息

目的探讨竹节参多糖对脂肪变性肝细胞的保护作用。方法制备竹节参多糖不同浓度(30%、60%及90%)乙醇洗脱部位,应用棕榈酸(PA)诱导HepG2脂肪变性的细胞模型,筛选药物的干预活性,采用MTT法观察细胞存活状况,油红O染色观察细胞脂肪变性情况,提取细胞总RNA检测相关因子的表达水平。结果 MTT法检测结果显示,30%醇沉组细胞存活率较模型组明显升高;油红O染色其细胞内泡状脂滴数目较模型组明显减少;RT-PCR检测结果显示,内质网应激相关基因葡萄糖调节蛋白、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白及炎性因子的表达较模型组明显降低。结论竹节参多糖30%乙醇洗脱部位能明显降低PA诱导的HepG2细胞脂肪变性,其机制可能是通过干预内质网应激反应实现。

关键词：竹节参多糖细胞脂肪变性:棕榈酸内质网应激

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竹节参多糖抗氧化效能研究

第四军医大学学报 2009年第20期30卷 F0002-F0002页

作者：程清洲陈平彭超华许彬武汉工业学院健康科学与护理系湖北武汉430023 武汉工业学院物与制药工程系湖北武汉430023 武汉工业学院生物与制药工程系湖北武汉430023

引言近年来,自由基与多种疾病的关系,已愈来愈被重视,寻找天然抗氧化物质是营养学领域的研究热点.竹节参(***)为五加科人参属植物,主要分布于鄂西地区,具有滋补强壮、活血化淤、消肿止痛、止血祛痰等功效[1].我们通过测定竹节参多糖对... 详细信息

引言近年来,自由基与多种疾病的关系,已愈来愈被重视,寻找天然抗氧化物质是营养学领域的研究热点.竹节参(***)为五加科人参属植物,主要分布于鄂西地区,具有滋补强壮、活血化淤、消肿止痛、止血祛痰等功效[1].我们通过测定竹节参多糖对小鼠血液、脑及肝组织中的SOD,CAT,GSH-Px的活性及MDA的含量,研究鄂产竹节参多糖对小鼠抗氧化效能,为进一步开发利用竹节参资源提供科学依据.

关键词： D-半乳糖竹节参多糖抗氧化