竹节参多糖的提取分离、结构修饰与活性研究

作     者：王如锋 

作者单位：武汉工业学院 

学位级别：硕士

导师姓名：陈平

授予年度：2012年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：竹节参多糖 提取 结构修饰 活性研究 

摘      要：本论文主要对竹节参中多糖成分进行了系统深入的研究。优化了竹节参多糖的提取工艺;分级获得5种竹节参多糖;比较分析了5种竹节参多糖样品和未分级前的竹节参多糖（Z）的化学组成及结构异同;进行了竹节参多糖成分体内、体外药理活性的评价研究;开展了竹节参多糖成分化学结构修饰的研究，获得了竹节参硫酸酯化多糖和竹节参多糖铁复合物，得到了两种产物的最佳合成工艺。主要研究内容如下： 1.通过响应面优化设计法对竹节参多糖的提取工艺进行了优化研究，结果表明：得到的拟合方程可信度高，拟合程度好，失拟项不显著;通过软件分析，竹节参多糖的最佳提取工艺为：提取时间为3.74h、提取温度为93.90°C、液料比为40.22。 2．对Sevag法脱蛋白后的竹节参多糖进行分级醇沉，在40%、50%、60%、75%、90%醇浓度下分别得到Z1、Z2、Z3、Z4和Z55种竹节参多糖组分;分别采用硫酸-苯酚法、间羟联苯法和考马斯亮蓝法对竹节参多糖进行了多糖含量、糖醛酸含量和蛋白质含量的分析测定，结果表明：Z1多糖含量最高，为98.01%;Z2糖醛酸含量最高，为27.71%;Z中含有极少量的蛋白质，其余样品未检出蛋白质。FT-IR检测6种多糖样品都具有明显的多糖特征峰，都含有糖醛酸和α-吡喃型糖环。 3.通过薄层色谱法对6种竹节参多糖样品中单糖组成进行初步定性分析;气相色谱法进行定性、定量分析，通过对HP-5、DB-17和DB-35MS三种色谱柱的选择及糖醇乙酸酯衍生法和糖腈乙酸酯衍生法的比较，确定采用糖醇乙酸酯衍生法和DB-35MS色谱柱进行GC分析。测定出多糖样品中单糖组成为阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖，Z、Z1、Z2、Z3、Z4和Z5中单糖组成（Ara：Gal：Glc）的摩尔比分别为0.49:1:5.799、0.505:1:13.170、0.344:1:6.197、0.319:1:1.311、0.436:1:1.007、2.252:1:2.824。 4.采用氯磺酸-吡啶法成功合成竹节参硫酸酯化多糖，产物硫取代度可达0.7801;紫外和红外光谱证实竹节参硫酸酯化多糖具有-SO3的特征吸收峰，且未改变多糖类物质的本质。通过FeCl3法成功制取竹节参多糖铁复合物,产物中的铁核是以三价铁通过氧桥和羟基桥聚合而形成的以β-FeOOH聚合铁核为结构中心的聚合状态。 5.竹节参多糖药理活性的研究，通过对清除羟基自由基、清除超氧阴离子自由基和清除DPPH自由基能力的研究，考察了6种竹节参多糖体外抗氧化活性的能力，结果表明：竹节参多糖都具有显著的体外抗氧化活性，样品之间的抗氧化的能力存在较大差异，达到一定浓度后Z5的活性最好;各样品在相同浓度下，清除三者自由基中以清除DPPH能力最强，Z5浓度为10mg/ml时，清除DPPH效率已达90%。采用二甲苯致耳肿胀模型、腹腔毛细血管通透性试验和小鼠热板、扭体试验分别考察其抗炎镇痛的作用，结果表明竹节参多糖能够有效延长小鼠痛阈值，减少扭体次数，抑制耳肿胀，降低毛细血管通透性。